NanoLuc标记的重组克里米亚-刚果出血热病毒及其初步用于抗病毒药物筛选

目的为了构建可分泌表达NanoLuc荧光素酶的重组克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)并探讨其用于抗病毒药物高通量快速初筛的可行性。方法将NanoLuc基因与CCHFVM节段上的mucin编码框融合,拯救重组病毒,并以利巴韦林为阳性对照,评估Furin抑制剂在体外对重组病毒的抑制效果。结果成功获得可分泌表达NanoLuc荧光素酶的重组CCHFV(rCCHFV_mucin_NLuc),且在感染细胞上清中,表示NanoLuc活性的相对光单位(relative light unit,RLU)与病毒半数组织感染剂量(TCID50)呈显著正相关性(cor=0.998,P=0.001)。10μmol/L浓度下,Furin抑制剂处理后1~3d感染细胞上清中NanoLuc荧光素酶活力与利巴韦林处理组无明显差异(P>0.1),但第4天Furin抑制剂处理组上清中RLU值显著高于利巴韦林处理组(P=0.001),且与未处理病毒对照组无明显差异(P>0.1)。结论成功构建1株NanoLuc标记的rCCHFV并可用于抗病毒药物的体外快速初筛。