尿液中多环芳烃羟基代谢产物分析方法研究

通过实验建立了"酶水解-固相萃取-HPLC 荧光检测"尿液中多环芳烃羟基代谢产物1-羟基芘,9-羟基苯并[a]芘和3-羟基苯并[a]芘的分析方法,研究了3种代谢产物在不同保存温度下的稳定性,并通过对200个实际尿液的测定初步验证了该方法的可行性。该方法回收率为70%～85%,最低检出限为0 02～0 05μg L。-20℃保存的尿液样品及尿液提取液中3种化合物在1个月内降解了10%～36%,提取液比尿液的稳定性稍好,保存温度越高稳定性越差。

小毛茛内酯影响耐药结核患者外周血淋巴细胞SHSP和GLS表达的研究

目的 :研究小毛茛内酯 (Ternatolide ,Tern)抗人PBL内结核休眠菌感染的分子免疫学机理。方法 :用Tern 2 0 0mg·L-1体外分别培养PBL 2 4 ,36 ,4 8,6 0 ,72 ,84h后 ,采用PCR方法检测 84例耐药、多耐药结核患者体外PBL内结核菌小热休克蛋白 (16KDaSHSP)基因的表达 ;采用反转录聚合酶链反应半定量 (QC RT PCR)方法 ,测定其PBL内颗粒裂解肽 (Granulysin ,GLS)mRNA的表达。结果 :Tern能显著减少耐药结核患者PBL内结核菌16KDaSHSP基因拷贝表达量 (P <0 .0 0 1) ,这种表达减少与培养时间成正比 ;同时显著增加了PBLGLSmRNA的表达水平 (P <0 .0 0 1)。结论 :Tern可能通过减少结核休眠菌 16KDaSHSP的表达 ,激活休眠菌的同时促进GLSmRNA高水平的表达 ,增强机体CTL杀菌能力 ,达到抗耐药的作用。

小毛莨内酯对结核病人颗粒裂解肽基因表达的作用

目的 研究小毛莨内酯 (Ternatolide ,Tern)对健康成人 ,初诊未治、耐药肺结核病人及儿童结核患儿周围血淋巴细胞 (PBL)体外活化后颗粒裂解肽 (granulysin ,GLS)mRNA表达的作用 ,探索其抗结核菌的分子免疫学机理。方法 采用反转录聚合酶链反应半定量 (QC RT PCR)方法 ,测定不同剂量的Tern对以上 4组人群PBL颗粒裂解肽mRNA表达水平的影响。结果 当Tern在 10 0mg·L-1,2 0 0mg·L-1浓度时 ,均能诱导以上 4组人群体外活化的PBLGLSmRNA的表达 ,且各组诱导表达水平无显著差异。结论 Tern可能是通过提高CTL的效应分子GLSmRNA表达的水平 ,杀灭胞内致病菌MTB ,其诱导作用呈现剂量依赖性。

小毛莨内酯对结核休眠菌感染病人GLS mRNA表达的影响

目的 研究小毛莨内酯抗人体结核休眠菌感染的分子免疫学机理。方法 采用PCR方法检测结核病人PBLs中结核菌 16kDα 晶状体同源蛋白DNA阳性的 5 6例患者为本研究对象 ;采用反转录聚合酶链反应半定量 (QC RT PCR)方法 ,测定不同剂量的Tern .对以上病人PBL颗粒裂解肽mRNA表达水平的影响。结果 当Tern .在 10 0mg L ,2 0 0mg L浓度时 ,能诱导结核休眠菌感染病人体外活化的PBLGLSmRNA的表达。结论 Tern .可能通过促进颗粒裂解肽mRNA的表达 ,增强机体CTL杀菌能力 ,达到抗结核休眠菌的作用。

心肌组织特异性microRNA－1在ST段抬高性急性心肌梗死患者血中含量变化的研究

目的通过检测心肌组织特异性microRNA－1（miR－1）在sT段抬高性急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）患者血浆中的含量，探讨血浆miR-1在AMI诊断中的作用。方法20例AMI患者在发病12h内取血，20例健康志愿者血作为对照，用TaqMan实时荧光定量RT—PCR（TaqManreal—timequantityRT—PCR，qRT—PCR）检测血中miR—1含量，并同时检测血清肌钙蛋白I（cTnI）和肌酸激酶同工酶（CK—MB）。结果AMI患者血清cTnI、CK—MB和血浆miR-1含量明显高于正常值（P〈0．01），AMI患者血浆miR-1含量与血清CK—MB和cTnI含量呈直线正相关（P〈0．05）。结论血浆miR-1可作为AⅧ的-个新的敏感牛物学标志。

大鼠主要水溶性晶体蛋白在老化进程中的时相变化

目的 :研究大鼠老化进程中主要晶体蛋白相对含量的时相变化与晶体老化的关系。方法 :常规饲养不同年龄SD大鼠 (出生后 1d、8d、2周、8周、8个月及 1.5年 ) ;提取水溶性晶体蛋白 ,双向电泳 (等电聚焦 /SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,IEF/SDS -PAGE)得到大鼠晶体蛋白电泳图形 ;考马斯亮蓝染色后扫描蛋白图形 ,分别确认各主要晶体蛋白组分并测定其相对含量百分比组成。结果 :(1)所测各组大鼠 18种主要晶体蛋白组分中 ,7种晶体蛋白相对含量呈渐进性时相改变 ,但总水溶性晶体蛋白水平未见明显变化。 (2 )晶体蛋白相对含量时相改变主要有 4种形式 :升高 (βB4 、αB2 、αA2 、βA1)、降低 (β7、β8、γ2 ,3 、γ5 ,6)、大致保持稳定 (βA3 、βB5 )及无规则性改变。 (3 )晶体蛋白 βB4/αA2比值在大鼠老化进程中呈渐进性升高。结论

蒙古种沙土鼠的大脑动脉环

本文采用结扎颈总动脉中断其血流的方法,研究了80只蒙古种沙土鼠的大脑动脉环,查明其前、后交通动脉的形态特征。前交通动脉可分为3型:1.完全的前交通动脉,占66.25%。该型动物在右颈总动脉结扎2h以后均未出现神经症状,故称为一侧颈总动脉血流中断后的抗卒中型沙土鼠。2.细弱的前交通动脉,占13.75%。3.缺乏前交通动脉,占20.00%。后两型称为易卒中型沙土鼠。这两型动物在中断一侧颈动脉血流后,可出现神经损伤症状。沙土鼠具有十分细小的后交通动脉(30~60μm),连于基底动脉的终支小脑上动脉与颈内动脉的分支大脑后动脉之间。结扎双侧颈总动脉后,可导致所有动物致死性脑缺血。

ST段抬高型急性心肌梗死患者外周血心肌特异性微小RNA-208a水平的变化

目的观察心肌特异性微小RNA-208a（microRNA-208a，miR-208a）在sT段抬高型急性心肌梗死（sTEAMI）患者血中的含量变化，探讨血miR-208a在STEAMI诊断中的作用。方法采集30例STEAMI患者发病12h内的外周血，用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（qRT—PCR）检测血中miR-208a相对含量，同时用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清心肌肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK—MB）含量。以30例健康者血标本作为对照。结果STEAMI患者血cTnI（μg／L）、CK—MB（μg／L）含量明显高于健康对照者（cTnI：17．72±8．43比0．05±0．01，CK—MB：250．834-177．26比71．20±20．50，均P〈O．01）。在PCR60个循环内，健康对照者血均未能检出miR-208a，STEAMI患者血中可检出miR-208a（0-6h为44．95±4．77，6—12h为43．98±4．68）；以健康对照者血miR-208a阈值循环（ct）值60为基础进行统计，AMI患者血miR-208a相对含量至少高于健康对照者2-5倍以上，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论血miR-208a可作为STEAMI患者早期诊断的新型敏感生物学标志。

获得性免疫缺陷综合征患儿抗病毒治疗后耐药基因变异分析

目的 观察接受联合抗病毒治疗获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)患儿人类免疫缺陷病毒 (HIV)的蛋白酶、逆转录酶及蛋白酶切割位点的耐药基因变异。方法 利用套式逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)从 7例接受蛋白酶和逆转录酶抑制剂抗病毒治疗的AIDS患儿的血浆中扩增HIV的蛋白酶、逆转录酶、gag和部分pol基因 ,直接将PCR产物进行核苷酸序列测定或克隆后测序 ,分析测序结果 ,确定耐药基因变异。结果 有 6例患者发生了多位点蛋白酶和逆转录酶耐药基因变异 ,其中2例患者在发生多位点蛋白酶和逆转录酶耐药基因变异的基础上出现了 gag蛋白酶切割位点的耐药基因变异。结论 大部分长时间 (33～ 10 6个月 )接受蛋白酶和逆转录酶抑制剂联合抗病毒治疗的AIDS患儿体内HIV发生了蛋白酶和逆转录酶耐药基因变异 ,其中只有少数患儿的HIV发生了 gag蛋白酶切割位点的耐药基因变异。