美国黑核桃SSR反应体系优化

优化SSR-PCR反应体系是黑核桃(Juglans nigra L.)SSR基因鉴定和群体遗传等研究的基础。本研究通过对PCR反应中Mg2+浓度、牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)浓度、Taq聚合酶用量、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA量的组合以及PCR程序组合试验,确定了黑核桃SSR的最佳反应体系,即在10μL的PCR反应体系中,含10 ng模板DNA,0.1 mg.mL-1牛血清蛋白(BSA),0.25 mmol.L-1 dNTPs,1.5 mmol.L-1 Mg2+1μL 10XTaq DNA聚合酶反应缓冲液,0.5 U Taq聚合酶,1.0 mmol.L-1单对引物(0.5 mmol.L-13对引物)。SSR-PCR反应扩增程序为:94℃变性3 min;93℃变性15 s,50℃或者53.5℃退火1 min,72℃延伸30 s,32个循环;72℃后延伸10min,置4℃保存。利用此反应体系对黑核桃进行PCR扩增并电泳检测,其结果清晰、稳定、可靠,适合进一步对黑核桃群体遗传、基因型鉴定和分子生态研究。

美国和日本核桃RAPD-PCR反应体系优化

核桃属种质资源丰富,其中多数物种木材材质优良,果实可食,营养丰富,为重要的经济树种。以美国白核桃Juglans cinerea、日本核桃Juglans ailantifolia等为材料,通过改良CTAB方法,从嫩芽、新鲜叶片和干叶片中分别提取核桃基因组DNA,并以此DNA为模板对RAPD-PCR反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果表明,改良的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染,大大提高DNA的数量和质量。优化适合于美国核桃、日本核桃和杂合核桃的RAPD-PCR反应体系为:在20μL的PCR反应体系中,含10 ng模板DNA,0.1 mg/mL牛血清蛋白(BSA),0.25 mmol/L dNTPs,3.5 mmol/L Mg2+,1μL10×Taq DNA聚合酶反应缓冲液,0.5 U Taq聚合酶,5.0 mmol/L RAPD引物。RAPD-PCR反应扩增程序为:92℃变性3 min;93℃变性1 min,35℃复性1 min,72℃延伸1 min,35个循环;72℃后延伸10 min,置4℃保存。

耕地非粮化的系统认知与研究框架:从粮食安全到多维安全

研究目的:耕地非粮化不仅关乎粮食安全,也影响农业发展、农村环境与农户生计,通过系统认知耕地非粮化过程、科学构建其研究框架,为促进耕地非粮化治理优化提供理论基础和研究思路。研究方法:文献综述法和归纳演绎法。研究结果:现有成果多聚焦于粮食安全视角下耕地非粮化问题产生的归因分析,但究其范围界定、定量识别与粮食安全效应评估仍未达成统一共识;结合国内外实证案例,分析了耕地非粮化与资源安全、生态安全、生计安全的逻辑关联和作用机制;提出了基于“对象分类—问题诊断—机理剖析—治理优化”耕地非粮化分析框架。研究结论:未来耕地非粮化研究需要转向以粮食安全为核心、多维安全并重的理论视角,形成由对象精确识别、效应定量测度到空间精细治理的研究范式,促进耕地“三位一体”保护。