纽约肝癌肝移植现状

肝移植是终末期肝病合并原发性肝癌（肝癌）的有效治疗手段，但肝癌肝移植患者手术前后的肝癌治疗策略，及如何减少术后肝癌复发率，仍是目前令人困惑的难题。近年免疫抑制剂和抗肿瘤药物的更新，早期诊断技术的进步，对肝癌肝移植术后复发的防治策略均有启发和促进作用。本文将笔者在美国纽约医学院肝胆与移植外科的临床经验与各位同道分享。

去甲基化在白血病上的研究进展

DNA甲基化是白血病表观遗传学改变中较常见的改变。在白血病的发展中,甲基化对基因表达的调控和基因结构的稳定起着重要的作用。造血干细胞移植和化疗是目前治疗白血病的常用方法。遗憾的是,合适的移植供者难以找到,而且白血病的复发和耐药是化疗中的大问题。由于甲基化的可逆性,降低甲基化水平的药物就成了治疗白血病的新手段。地西他滨是用于降低甲基化的常用药物。本文对甲基化与肿瘤、甲基化与血液病,甲基化的检测方法和去甲基化治疗等问题进行了综述。

病理性近视的基因位点筛查

目的通过基因组扫描和家系连锁分析,对已知病理性近视相关位点进行筛查。方法收集符合常染色体显性遗传的病理性近视家系,选取330对微卫星标记进行基因组扫描,在显性遗传模式、基因频率0·0133和外显率100%的条件下,进行二点连锁分析和多点连锁分析。结果连锁分析在9个家系中均未发现连锁位点。第12号染色体上LODs最大0·773459,最小-8·121303,第18号染色体上LODs最大0·559933,最小-8·936928,排除了与已知病理性近视基因位点MYP2和MYP3连锁。结论我国病理性近视基因位点与国外报道不同,存在遗传异质性。病理性近视遗传模式可能不是单一的单基因常染色体显性遗传。

革胡子鲇卵巢在第一次性周期内分化与发育的研究

用光镜和电镜研究了革胡子鲇（Ｃｌａｒｉａｓｌａｚｅｒａ）原生殖细胞的起源迁移，卵巢在第１次性周期内的分化与发育以及各发育时期卵母细胞的超微结构。原生殖细胞起源于内胚层，有固定的迁移路线，进入生殖嵴后，生殖嵴进一步分化，出现卵巢腔分化成卵巢，卵母细胞在第１次性周期内的发育可分成６个时相，描述了各时相卵母细胞的显微结构与超微结构。同时，叙述了卵母细胞中卵黄发生的形态形成。

有色光对视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β的影响

目的研究不同色光对RPE细胞分泌生长因子的影响,从细胞生物学和分子生物学水平探讨RPE细胞在有色光信号传导中的作用.方法将第二代RPE细胞以每孔5×104的密度接种于4个6孔板,培养3 d后,将培养液换为含1%胎牛血清的F12培养液,置于各种色光下培养,分别于4、8、12、24、48h后收集培养液,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA),测定TCF-β的量;将置于红色、黄色和蓝色光下照射24h后的细胞取出,采用Trizol一步法提取RPE细胞总RNA,通过RT-PCR检测不同色光照射后RPE细胞TGF-β的mRNA表达水平.结果 ELISA结果显示人胚RPE细胞可分泌TGF-β,在受到不同波长的光照射后,不同时段TGF-β的分泌量也不一样,数据采用两因素方差分析,差异有统计学意义;RT-PCR结果显示不同色光照射24h后RPE细胞TGF-β的mRNA表达水平不同.结论有色光线可能引起RPE细胞蛋白质合成功能受阻,进而对眼球的生长发育产生作用.

异硫氰酸苯己酯降低U266细胞株p16基因甲基化的研究

本研究探讨异硫氰酸苯己酯对p16基因高甲基化的多发性骨髓瘤U266细胞株是否有去甲基化的作用。用异硫氰酸苯己酯0、5、10μmol/L孵育U266细胞株,提取DNA备用。用亚硫酸氢盐处理正常人基因组DNA,并以此为模板进行PCR扩增。设计1组特殊荧光标记探针以构建1种检测p16基因启动子区3个CpG位点甲基化改变的芯片,特殊荧光标记探针包括1对非甲基化探针和甲基化探针,检测相邻的3个CpG位点甲基化的程度。采用基因芯片的方法,将完全未甲基化的DNA和完全甲基化的DNA混合后制成标准曲线,将U266细胞株样本处理后点在芯片上与标准曲线进行比较后得出定量检测的结果。结果表明:芯片上探针的可重复性和精确性很好,0、5、10μmol/L异硫氰酸苯己酯处理后的U266细胞株p16基因的甲基化程度分别为78.2%、61.7%、54.8%。结论:异硫氰酸苯己酯可以降低U266细胞株p16基因甲基化的程度。

视网膜色素上皮—脉络膜在近视发病中的作用

目的 :探讨人眼视网膜色素上皮细胞 (RPE)、黑素细胞、成纤维细胞与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、β转化生长因子 (TGF β)和肝细胞生长因子 (HGF)的关系。 方法 :①用不含血清的培养液培养三种细胞 48h ,收集培养液 ,用酶标免疫吸附法测量生长因子含量 ;②将各种生长因子加入含有三种不同细胞的培养液中 ,五天后行细胞计数。结果 :在RPE和成纤维细胞培养液中能测出HGF、bFGF和TGF ,而在黑素细胞培养液中则不能测出。bFGF能刺激上述三种细胞的生长 ,HGF能刺激RPE与黑素细胞的生长 ,而TGF β能抑制三种细胞的生长。结论 :RPE、成纤维细胞和黑素细胞具有上述生长因子受体 ,其中RPE和成纤维细胞还能产生上述生长因子。视网膜产生的各种与近视有关的信使不能透过RPE—脉络膜 ,所以不能直接作用于巩膜。RPE、成纤维细胞和黑素细胞通过产生、抑制和应答各种生长因子、神经递质及激素 。

氯通道在肾脏的表达及其功能

随着膜片钳和分子克隆技术的应用,人们在肾脏发现了多种氯通道。这些通道参与许多生理过程,包括膜电位形成、细胞容积调节以及盐的吸收和排泄等。确定氯通道在肾小管和集合管上皮细胞的基侧膜和管腔膜的分布情况以及这些通道的生理功能是近年来的研究热点。最近,由于特异性抗体的应用和遗传学研究方法的建立,使这方面的研究取得了很大进展。本文就这方面的研究进展作一综述。

BPDE诱发人胎气管上皮细胞ras基因点突变的研究

ＢＰＤＥ诱发人胎气管上皮细胞ｒａｓ基因点突变的研究陈家 ，詹德进，吴中亮，杜应秀，吴孟起（广州医学院化学致癌研究所广州５１０１８２美国纽约医学院）苯并（ａ）芘的代谢活化终致癌物ａｎｔｉ─ＢＰＤＥ作用于体外培养的人胎气管上皮细胞，并用聚合酶链反应（ＰＣ?..

反式-BPDE诱发人胎气管上皮细胞H-ras癌基因点突变的研究

用苯并[a]芘的代谢物反式-BPDE,作用于6例体外培养人胎气管上皮细胞,2至6周后,用PCR结合限制性内切酸酶切片段多态性分析法,检测H-ras癌基因12位点密码子的点突变情况。结果显示,经反式-BPDE处理的气管上皮细胞,都有H-ras癌基因第12位点密码子的点突变,其中部分细胞还同时伴有起始密码子上游24bp处的另一个CCGG序列的点突变,而这些细胞都未出现典型的转化细胞的形态特征的改变。提示癌基因的点突变早于细胞形态学的改变。

Clenbuterol，β_2-肾上腺素能受体激动剂促进成年大鼠脊髓半横切后红核脊髓束轴突再生和运动功能的恢复

目的研究Clenbuterol对于促进脊髓半横切(SCI)后轴突再生和运动功能恢复的功效。方法成年Wistar大鼠(n=10-12)接受硬脊膜内的第7颈段脊髓单侧半横切显微手术。Clenbuterol以9 mg/L的剂量加入饮用水中,而对照组未给予任何治疗。采用Cylinder试验和患肢抓力试验观察运动功能的恢复状况。行为学观察期(6周)结束后,大鼠接受第二胸段脊髓处椎板切开术,4%Fluorogold微量注射进入红核脊髓束,一周后被处死。结果运动功能逐渐恢复,从SCI后第3周开始,Clenbuterol治疗组显著优于对照组(最终患肢抓力:403.45±19.82g vs 335.13±13.48g,p<0.05);在Cylinder试验中,双侧前肢共同使用触壁的百分比,Clenbuterol组显著高于对照组(43.39%±5.85%vs 19.42%±6.61%,p<0.05)。Clenbuterol治疗显著地降低了SCI后继发性组织损伤,提高了pCREB阳性细胞核在整个SCI点的表达水平。与对照组相比,Clenbuterol显著地促进了红核脊髓束轴突的再生。结论脊髓损伤后,Clenbuterol可促进离断的轴突再生以及运动功能的恢复。

苯己异硫氰酸酯通过抑制组蛋白去乙酰化和诱导去甲基化来抑制MDS细胞生长

目的为了探索治疗骨髓增生异常综合征(mylodysplasia syndrome,MDS)新的一类靶向药物,笔者研究了苯己异硫氰酸酯(phenylhexyl isothiocyanate,PHI),1种合成的萝卜硫素(sulforphate,SFN)衍生物对MDS细胞作用。方法 MDS细胞株SKM-1经过不同浓度PHI处理3个平行孔后使用台盼蓝拒染法测定细胞活力,流式细胞术分析细胞周期相,荧光染料JC-1检测线粒体膜电位改变;甲基化特异性PCR检测去甲基化改变,Western blot法蛋白印迹分析p^(15)基因表达和组蛋白乙酰化程度,以及ELISA法测定细胞培养上清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量。结果经过5μmol/L PHI处理后MDS细胞增殖受到抑制和产生凋亡,在诱导浓度低至10μmol/L细胞增殖减少了50%,和细胞周期分析显示MDS细胞停滞在细胞G_1期,PHI诱导p^(15)基因去甲基化呈现浓度依赖性,进一步证明也以浓度依赖方式PHI诱导组蛋白H3高乙酰化。同时也表明,PHI抑制MDS细胞中VEGF产生,以及通过破坏线粒体膜电位诱导细胞凋亡。结论 PHI可以诱导p^(15)基因去甲基化和组蛋白H3高乙酰化,具有对MDS p^(15)基因去甲基化和组蛋白高乙酰化的双重表观遗传效应,从而启动了靶向途径抑制MDS细胞增殖。

2019年中国医师协会变态反应医师分会第三届全国年会嘉宾发言精选

美国纽约西奈山医院儿童变态反应及免疫科教授, 变态反应专科医师导师, 西奈山伊肯医学院儿科学系教授, 西奈山伊肯医学院贾菲食物过敏研究所临床研究主任. 主要研究方向为食物过敏及食物蛋白诱导性小肠结肠炎综合征 (FPIES).

直肌睫状前血管的分离和保留对兔眼前段缺血综合征的预防作用

目的 观察兔眼眼外直肌手术中直肌睫状前血管 (ACVs)的分离和保留对预防眼前段缺血综合征 (ASI)的作用。方法 将 32只健康新西兰白兔随机分为 4组 ,每组右眼分离和保留ACVs,左眼去除ACVs。A组 :切断 2条水平直肌 ;B组 :切断 2条垂直直肌 ;C组 :切断内、外直肌和 1条垂直直肌 ;D组 :切断 4条直肌。术前和术后裂隙灯显微镜下观察眼前段的体征 ,测量眼压、房水中总蛋白和乳酸的浓度。术后 4周处死动物 ,光镜和电镜下检查虹膜和睫状体的超微结构。结果 4组中右眼术后均未发生缺血性改变。A组左眼无明显缺血改变 ,B组左眼仅出现轻度缺血的病理学改变。C、D组左眼出现明显甚至严重的ASI体征 ,眼压出现下降趋势 ,C组眼压术前为 (17 2 1± 3 76 )mmHg(1mmHg =0 133kPa) ,术后最低降至 (14 4 8± 3 36 )mmHg(P <0 0 5 ) ,D组眼压术前为 (16 6 8± 2 33)mmHg,术后最低降至 (3 17± 0 92 )mmHg(P <0 0 5 ) ;房水中总蛋白和乳酸的浓度明显增高 ,C组术前分别为(5 0 5 3± 5 0 )mg/L和 (7 5 4± 0 4 7)g/L ,术后分别最高升至 (811 9± 4 4 4 )mg/L和 (11 0 0± 3 5 9)g/L(P<0 0 5 ) ;D组术前分别为 (5 0 4 6± 4 1)mg/L和 (7 17± 1 4 4 )g/L ,术后分别最高升至 (10 2 5 8± 78 3)mg/L和 (8 2 3±

中国人常染色体遗传的病理性近视基因定位

目的在中国人群中进行病理性近视致病基因的定位。方法1个12人的病理性近视家系（患者7名）经过研究人员告知，同意参加本研究。从每个家系成员静脉血中提取DNA，选取覆盖全基因组的330对高度杂合的微卫星DNA引物，进行基因组扫描；以常染色体显性遗传为模式，基因频率0．0133和外显率100％的条件下，运用Linkage软件进行二点连锁分析，运用Genehunter软件进行多点连锁分析。标记位点之间的遗传距离根据Genethon连锁图谱来确定。基于最低重组率原则，用cyanic软件构建单倍型。结果二点连锁分析发现15号染色体长臂上存在与病理性近视密切连锁的位点。在重组率为0的情况下，最大对数优势记分（LOD）值1．76出现在D15S1010，D15S1007和D15S1042位点；多点连锁分析也支持这个区域内存在连锁，最大NIL值为5．16。单倍型分析把这个近视眼位点局限在15q12-13上D15S1019和D15S146之间大约12cM的区间内。在已知的近视眼相关位点，包括18p11．31，12q21-23，7q36，17q21-22，4q22-q27，2q37．1，15q15-21，12q13．11-13．2，6p21．3，1q21-31，1p21和21q22．3，均没有发现明确的连锁证据。结论在15q12-13可能存在一个新的近视眼基因位点。在这个区域内至少有94个已知的基因，因此有必要对此区域进行测序寻找致病基因，这个新的基因位点的发现也证实了病理性近视存在很强的遗传异质性。

假性近视是否常见及能否治疗?

据我国数以千计的青少年近视在使用调节麻痹药前后的验光结果,约60％的近视具有调节因素(屈光度降低0．5 D或更多),10％为假性近视(用药后近视消失,呈现为正视或远视)。长期阿托品治疗能消除调节张力,中止或减慢近视的进行。对其他假性近视的治疗方法,应根据循证医学原理通过随机分组、双盲对照的长期观察进行严肃认真的评估。

细胞移植在眼科临床的应用

细胞移植是组织修复的一种重要手段。目前己在眼科临床应用的有视网膜色素上皮细胞移植、虹膜色素上皮细胞移植、角膜缘干细胞移植、结膜上皮细胞移植和视网膜感光细胞移植等。本文复习了各种眼科细胞移植的现况及展望。对一些细胞移植的适应证、远期效果及潜在副作用均有待进一步研究。细胞移植与干细胞工程、基因工程及组织工程结合具有一定的发展前景。

甲基化特异性微阵列法定量检测恶性血液病患者p16基因甲基化

DNA甲基化是细胞的一种表观遗传现象，也是一种重要的影响基因表达的机制。当DNA异常甲基化时会导致癌基因的激活和抑癌基因的沉默，促使肿瘤的发生^[1]。研究表明，CpG二核苷酸是肿瘤中癌基因和抑癌基因突变的热点^[2]。目前研究DNA甲基化的技术包括Southern blot法、限制性内切酶-PCR法、DNA测序法、甲基化特异性PCR（MSP）、单链核苷酸引物延伸法、变性高压液相色谱法等。

角膜边缘真菌与阿米巴混合感染一例

患者女性，55岁。因左眼眼红、异物感半个月，于2015年10月3日于外院就诊。患者既往有糖尿病史10年，血糖控制欠佳，

HLA-A2单抗轻链可变区基因的克隆及其序列分析

以HLA—A2单抗mRNA为模板,设计了3对特异性引物,采用PCR技术,扩增和克隆出单抗轻链可变区基因并应用双脱氧链式终止法及计算机基因文库测定和分析了其氨基酸和核苷酸序列。结果证明,本组单抗轻链由不同的基因家族编码。