逆转录病毒载体介导的核酶基因转移有效恢复肿瘤细胞的化疗敏感性

目的：为了研究抗ＭＤＲＩ核酶逆转肿瘤细胞中Ｐ－ｇｐ介导的多重耐药性（ＭＤＲ）的作用。方法：首先，我们建立了单纯由Ｐ－ｇｐ介导的、２０倍耐药的人Ｄａｕｄｉ淋巴瘤细胞的模型－Ｄａｕｄｉ／ＭＤＲ２０。同时我们将表达不同抗ＭＤＲ１核酶的逆转录病毒载体（Ｎ２Ａ＋ｔＲＮＡｉｍｅｔ－１９６ＭＤＲ１－Ｒｚ，Ｎ２Ａ＋ｔＢＮＡｉｍｅｔ－１９６ＭＤＲ１－ｓＲｚ和 Ｎ２Ａ＋ｔＲＮＡｉｍｅｔ－ｉＭＤＲＩ－ｓＲｚ）转染到ＧＰ＋ｅｎｖＡＭ１２细胞中进行包装，获得了高滴度的病毒［（１，１～２．５）×１０ｃｆｕ／ｍｌ］。后者用于感染Ｄａｕｄｉ／ＭＤＲ２０。结果：通过一系列分子生物学检测证实，携带３种核酶的逆转录病毒不但整合到ＤＮＡ中，而且也高水平表达相应的核酶ｔＲＮＡｉｍｅｔ－ｉＭＤＲ１－ｓＲｚ，ｔＲＮＡｉｍｅｔ－１９６ＭＤＲ１－ｓＲｚ和ｔＲＮＡｉｍｅｔ－１９６ＭＤＲ１－Ｒｚ。结果表明，ｔＲＮＡｉｍｅｔ－ｉＭＤＲ１－ｓＲｚ和ｔＲＮＡｉｍｅｔ－１９６ＭＤＲ１－ｓＲｚ转导的Ｄａｕｄｉ／ＭＤＲ２０细胞完全逆转了对长春新碱的敏感性，并伴随着ＭＤＲ１ ｍＲＮＡ和Ｐ－ｇｐ表达的阻断。

中国人HIV-1感染相关的基因CCR5多态性检测和不同方法提取的基因组DNA的比较

目的 检测中国人基因组中HIV-1感染相关的特异性协同受体(CCR5)的基因多态性和比较提取人基因组DNA方法的优缺点。方法 我们分别用常规法和柱层析法从1219名中国人外周血PBMC中提取基因组DNA样品,对纯化后的DNA样品质量进行定性和定量分析;并对其基因组DNA中CCR5基因进行了PCR、Southern杂交和直接DNA测序等分析。结果 在中国人基因组中,检测的CCR5基因多态性是wt/wt 1 210例、wt/△32 3例,未检测到CCR5△32/△32纯合子突变,CCR5等位基因突变率为0.125％。常规法提取的基因组DNA所需的外周静脉血多(5ml);DNA的量较少且不稳定;操作步骤复杂。相反,QIAamp Boold Kit柱层析法提取DNA仅需要外周血200μl,可稳定地获得一定量的DNA,操作简便。结论 首次报道了中国人CCR5等位基因突变率是0.125％,提示我国绝大多数人群对嗜巨细胞HIV-1病毒的遗传易感性较高;同时证实试剂盒法提取的DNA更适合于CCR5基因多态性分析。