万古霉素对体外培养小鼠耳蜗毛细胞影响的实验研究

目的 :通过内耳器官离体培养技术来观察万古霉素对体外培养耳蜗毛细胞的影响 ,探讨万古霉素耳毒性。方法 :选用生后 2～ 4 d的昆明小鼠做为实验对象 ,应用鼠尾胶包埋法离体培养耳蜗基底膜 ,通过若单明 -鬼笔环太染色技术定量观察不同浓度的万古霉素对耳蜗毛细胞的影响。结果 :给予万古霉素后的离体耳蜗内、外毛细胞未发生坏死和缺失 ,毛细胞密度与正常对照组无差别。结论

利尿酸是打开血-迷路屏障的钥匙

目的观察在不同的时机应用利尿酸以暂时破坏耳蜗血管纹上皮是否能够开放血-迷路屏障,从而促使庆大霉素进入耳蜗或者从耳蜗排出。方法听神经动作电位测试技术,全耳蜗毛细胞计数定量观察技术和荧光偏振免疫法测定庆大霉素浓度的技术被用于以下两个不同目的的实验观察。(1)当庆大霉素血中浓度高于内耳液浓度时,应用利尿酸破坏蜗管外壁以促使更多的庆大霉素进入耳蜗以制备不同程度耳蜗损害的动物模型。(2)当庆大霉素内耳浓度高于血中浓度时,应用利尿酸损坏蜗管外壁以促使蓄积在耳蜗内的庆大霉素从内耳排出以达到挽救毛细胞的目的。结果1郾当庆大霉素血中浓度高于内耳液浓度时,注射利尿酸可造成更多的毛细胞损害和听功能障碍,外淋巴中药物的峰值浓度和半衰期浓度也均比单独一次注射庆大霉素动物外淋巴中药物浓度增加一倍,说明同时注射利尿酸可促使更多的庆大霉素从血液进入耳蜗并造成更严重的毛细胞损害。2郾当血液中庆大霉素排空之后,注射利尿酸可减少毛细胞数量的损失程度,同时发现延迟注射利尿酸组动物的听力损失程度比不经利尿酸处理动物组有所减轻,外淋巴中药物浓度也比不经利尿酸处理动物组降低一半,说明当GM在耳蜗内蓄积但血清中已经排空时注射EA有助于降低药物在耳蜗内的蓄积并挽救尚未被破坏的毛细?

耳聋左慈汤含药血清对庆大霉素致小鼠耳蜗毛细胞损伤的拮抗作用

目的:用血清药理学方法观察耳聋左慈汤对庆大霉素(Gentamicin,GM)所致小鼠耳蜗毛细胞损伤的作用。方法:完整分离小鼠耳蜗基底膜,平铺于鼠尾胶上,无血清培养液培养24小时后,正常组更换含10%空白血清的培养液,模型组同时加入0.3mMGM和10%空白血清,耳聋左慈汤药物血清组同时加入0.3 mM GM和10%含药血清,继续培养24小时,免疫荧光染色后荧光显微镜下进行全耳蜗毛细胞计数。用全耳蜗毛细胞损失率评价耳聋左慈汤含药血清对GM所致耳蜗毛细胞损伤的作用。结果:正常耳蜗毛细胞排列整齐,无缺失,而0.3mM GM模型组耳蜗毛细胞大量缺失,外毛细胞损失率(41.8±1.9)%高于内毛细胞损失率(16.8±1.8)%;耳聋左慈汤药物血清可降低耳蜗毛细胞的损失率,内、外毛细胞损失率与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:耳聋左慈汤含药血清对GM造成的耳蜗毛细胞损伤有拮抗作用。