大鼠胃的主细胞分离纯化培养及功能测定

目的 通过建立分离纯化大鼠胃的主细胞培养系统 ,为进一步深入研究主细胞的生理调节和病理变化提供新的方法。方法 采用链霉蛋白酶的消化、淘析法分离纯化大鼠胃的主细胞。主细胞的纯化率在光镜下根据细胞的大小、结构和颜色计算。用血红蛋白法测定胃蛋白酶。在主细胞的短期培养系统中 ,主细胞的最佳功能状态通过比较胆囊收缩素 (CCK 8)、卡巴可林和异丙肾上腺素在不同培养时间和刺激状态下 ,主细胞分泌胃蛋白酶原的量而定。结果 在泵速为 37ml/min收集分离的主细胞化率为 83%～ 92 %。细胞的存活率 >95 %。CCK 810 -5mol/L、卡巴可林 10 -4 mol/L和异丙肾上腺素 10 -5mol/L刺激 30min后 ,主细胞分泌胃蛋白原的量在培养 2 4h明显高于培养 6、12、36h(P <0 .0 5 )。在主细胞培养 2 4h后 ,CCK 810 -5mol/L、卡巴可林 10 -4 mol/L和异丙肾上腺素 10 -5mol/L刺激主细胞 45min时胃蛋白酶原的分泌量明显高于刺激 30、6 0、90min(P <0 0 5 )。卡巴可林EC50 为 2× 10 -7mol/L ,在浓度为 10 -5mol/L时最大分泌量是对照组的 1.82倍 (P <0 .0 5 )。CCK 8的EC50 为 10 -8mol/L ,在浓度为 10 -5mol/L时最大分泌量是对照组的 1.5 2倍 (P <0 .0 5 )。结论 具有良好功能的分离纯化大鼠胃的主细胞培养系统已被建立?

胃肠激素与其他肠嗜铬样细胞的分离培养与功能测定

体内的研究已经提示为的ECL细胞在调节胃酸分泌中起重要作用,但以往由于缺乏分离、培养ECL细胞的方法,因此对ECL细胞的生理调节、病理变化的研究受到了限制。本研究采用链霉蛋白酶的消化。

幽门螺杆菌脂多糖对肠嗜铬样细胞功能的影响

目的 通过幽门螺杆菌（Ｈｐ） 的脂多糖抗原对体外大鼠肠嗜铬样细胞功能的影响，深入探讨Ｈｐ 改变胃酸分泌和黏膜增生的病理机制。方法 通过链球蛋白酶消化、淘析法和梯度离心分离出纯化率９５％ 、成活率＞ ９０ ％ 的大鼠胃的肠嗜铬样细胞。短期培养后通过酶标免疫法，ＢｒｄＵ掺入试验分别测定肠嗜铬样细胞基础和刺激后的组胺分泌及ＤＮＡ 增生。结果 脂多糖抗原刺激基础组胺的分泌（ＥＣ５０４ ×１０－１１ ｍｏｌ／Ｌ） ，同时显著增强胃泌素刺激组胺分泌的作用（ＥＣ５０ １０－１０ ｍｏｌ／Ｌ）。生长抑素（１０－１２ ｍｏｌ／Ｌ）能完全抑制这些作用而胃泌素拮抗剂Ｌ３６５２６０ 则无明显抑制作用。脂多糖抗原不能刺激肠嗜铬样细胞的ＤＮＡ合成，但明显增强胃泌素对其ＤＮＡ的合成（ＥＣ５０ １０－１０ ｍｏｌ／Ｌ）。大肠杆菌的脂多糖抗原（１０－ １２ ～１０ －６ ｍｏｌ／Ｌ） 对肠嗜铬样细胞的组胺分泌和ＤＮＡ合成均无明显作用。结论 在体外，Ｈｐ 直接影响肠嗜铬样细胞的增生和分泌。高度提示脂多糖抗原同肠嗜铬样细胞的互相作用参于了Ｈｐ 感染引起的酸分泌异常和胃黏膜的病理改变。

胃内肠嗜铬样细胞的分离与培养及功能测定

目的 体内研究已提示胃内肠嗜铬样 (ECL)细胞在调节胃酸分泌中起到重要的作用。但以往由于缺乏分离、培养ECL细胞的方法 ,对它的生理调节、病理变化的研究受到了限制。方法 采用链霉蛋白酶的消化 ,淘析法和颗粒梯度离心分离纯化ECL细胞。结果 经电镜 ,组胺含量测定 ,纯化率达 90 %～ 95 %。经锥虫蓝染色细胞成活率大于 95 %。分离纯化后的ECL细胞短期培养 2 4h后 ,胃泌素对ECL细胞的作用 ,经酶标免疫测定组胺分泌的EC50 为 3× 10 -10 mol/L。经BrdU掺入试验测定DNA增生的EC50 为 2× 10 -11mol/L。胃泌素受体拮抗剂L3652 66抑制胃泌素释放组胺的作用 (IC50 10 -8mol/L)。结论 ECL细胞在培养系统中生长良好 。