肾癌相关基因GYLZ-RCC18对肾癌细胞系GRC-1抗死亡作用机制的研究

目的 应用反义基因转染技术探讨肾癌相关新基因GYLZ RCC18与肾癌细胞死亡 (包括坏死及凋亡 )之间的关系 ,并探讨肾癌基因疗法的新途径。 方法 用脂质体包裹的新基因GYLZ RCC18第一编码区起始处的 2 0个碱基的反义和正义寡核苷酸导入肾癌细胞系GRC 1,应用流式细胞技术和伊红排斥实验连续检测GYLZ RCC18反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡、坏死的影响。 结果 导入GYLZ RCC18反义寡核苷酸后 ,可大量杀伤GRC 1细胞并明显促进GRC 1细胞坏死 ,于第 4天达到杀伤高峰约 6 0 % ;同时可连续 8d诱导凋亡峰 ,最高于第 2天达到约 2 2 5 % ,两种作用曲线形状和峰值不完全一致。 结论 GYLZ RCC18是肾癌相关的重要的新的癌基因 ,GYLZ RCC18的表达可通过两种不同的机制即抗癌细胞坏死机制和抗凋亡机制发挥对肾癌细胞的保护作用 ,GYLZ RCC18可能对肾癌细胞生存和耐药至关重要。通过导入反义基因的方法阻断肾癌细胞中GYLZ RCC18的表达 ,可有效地杀伤肾癌细胞。对此新基因的研究将有助于为肾癌的基础研究和临床治疗提供新的思路和途径。

肾癌相关新基因GYLZ-RCC18反义寡核苷酸转染对肾癌细胞系GRC-1的作用

目的 探讨肾癌相关新基因GYLZ RCC18在肾癌发生发展中的作用机制。 方法 采用逆转录PCR方法检测GYLZ RCC18在肾癌和正常肾细胞系中的表达 ,将第一编码区起始处的2 0个碱基的反义和正义寡核苷酸导入肾癌细胞系GRC 1,连续观察对肾癌细胞生长、增殖凋亡、死亡率、形态学的影响。 结果 GYLZ RCC18在肾癌细胞系中表达明显高于正常肾细胞系 ;导入GYLZ RCC18反义寡核苷酸后 ,GRC 1细胞的核分裂可明显减少 ,导致GRC 1细胞死亡 ,抑制癌细胞的生长和增殖活性 ,并可特异诱导GRC 1连续凋亡。 结论 GYLZ RCC18是肾癌发生发展密切相关的癌基因 ,其表达可促进肾癌细胞的生长和增殖 ,并通过抗癌细胞死亡和凋亡机制对癌细胞起保护作用。

丝裂霉素对膀胱癌EJ细胞作用机制的研究

目的 从诱导坏死和凋亡角度探讨丝裂霉素 (MMC)对膀胱癌EJ细胞的作用机制。 方法 将不同浓度的MMC作用于膀胱癌EJ细胞 ,在不同时间内采用流式细胞术 (FCM )和 3’末端脱氧核苷酸转移介导生物素 (TUNEL)及伊红排斥实验检测EJ细胞的凋亡情况和对其的杀伤作用。 结果 不同浓度的MMC在 2 4h内可以持续诱导EJ细胞凋亡 ,MMC 0 .1mg/ml组 2 4h时凋亡率为 71% ,对EJ细胞的杀伤作用与剂量呈正比。

Clusterin对膀胱癌细胞抗凋亡作用机制的研究

目的 探讨新的抗细胞凋亡因子Clusterin对膀胱癌EJ细胞的作用机制。 方法 用丝裂霉素 (MMC)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡 ,采用流式细胞术 (FCM)检测不同浓度的Clusterin对抗EJ细胞的凋亡率。 结果 小剂量Clusterin可以特异性抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。 结论Clusterin通过抗凋亡机制作用于膀胱癌EJ细胞 ,可能与膀胱癌细胞的复发、耐药等临床特性有关 ,此项研究对阐明膀胱癌发生发展的生物学机制以及临床应用Clusterin抗体治疗膀胱癌提供帮助。

聚集素在前列腺癌中的表达及意义

目的 探讨抗细胞凋亡因子聚集素 (clusterin)在前列腺癌中的表达及意义。 方法 RT PCR方法检测聚集素在前列腺癌组织 (3例 )、癌细胞系 (1株 )及正常前列腺组织 (3例 )中的表达水平。 结果 3例前列腺癌组织及 1例前列腺癌细胞株中聚集素与内参基因 β actin相比较的相对表达量明显高于 3例正常前列腺组织。 结论 聚集素在前列腺癌中高表达 ,提示聚集素可能通过抗凋亡机制在前列腺癌的生物特性中发挥作用。

Clusterin在膀胱癌细胞中的表达及作用机制

目的 探讨抗细胞凋亡因子Clusterin在膀胱癌EJ细胞中的表达及抗凋亡机制。 方法 应用免疫细胞化学染色检测Clusterin在EJ细胞中的表达 ,应用 3′末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法 (TUNEL)检测Clusterin对EJ细胞的抗凋亡作用。 结果 Clusterin在EJ细胞中有明显的阳性表达。细胞外加入Clusterin后 ,EJ细胞胞浆内染色加深 ,呈颗粒状 ,为强阳性染色。提示细胞外加入小剂量Clusterin可以明显抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。 结论 Clusterin在细胞外可以通过细胞膜进入细胞浆内发挥抗凋亡作用。检测Clusterin的表达特性有助于临床评估膀胱癌复发、耐药等生物学特性。

肾癌特异相关基因GYLZ-RCC18的表达及对肾癌细胞生长及增殖活性的影响

目的 通过检测肾癌相关新基因GYLZ RCC1 8(基因号 :BE82 51 3 3 )在肾癌中的表达特点及其对肾癌细胞生长、增殖的影响 ,探讨GYLZ RCC1 8基因的功能及其在肾癌发生发展中的作用。方法 应用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)的方法检测肾癌相关基因GYLZ RCC1 8在3 1例肾癌标本中的表达特点 ;观察GYLZ RCC1 8反义寡核苷酸对肾癌细胞生长、增殖活性、形态学的影响。结果 GYLZ RCC1 8基因在肾癌组织特异表达 ,正常肾组织较肾癌组织低表达或不表达 ,两者表达量差异为 1～ 9倍。GYLZ RCC1 8基因的表达在高分级、高分期肾癌明显高于低分级、低分期肾癌 ;导入GYLZ RCC1 8反义寡核苷酸后 ,可明显抑制癌细胞的生长和增殖活性 ,并减少GRC 1细胞的核分裂。结论 GYLZ RCC1 8是肾癌组织相对较特异表达的新基因 ,它的高表达与肾癌的发生发展以及生长、增殖密切相关 ,它的成功克隆为阐明肾癌发生发展的分子生物学机制开辟了新的途径 ,为今后肾癌的特异诊断 ,基因治疗提供了新的理论依据。