工程化同种胰岛移植治疗1型糖尿病小鼠的实验研究

目的将外源蛋白FasL修饰的供者胰岛移植于糖尿病小鼠肾包膜下,观察其治疗1型糖尿病的效果。方法采用ProtExTM技术将嵌合蛋白SA-FasL修饰于供者小鼠胰岛,流式细胞检测蛋白的表达;以近交系小鼠BALB/c和C57BL/6分别为胰岛移植的供受者,进行同种小鼠胰岛移植,部分受者联合免疫抑制剂雷帕霉素(rapamycin,RPM)治疗,从手术当日开始应用RPM(0.2 mg/kg),连续治疗10天。根据移植胰岛的不同及有无联合RPM治疗将受者分为5组:(1)SA-FasL修饰组(FasL组,n=33);(2)SA-FasL修饰+RPM治疗组(FasL-RPM组,n=31);(3)SA修饰组(SA组,n=27);(4)SA修饰+RPM治疗组(SA-RPM组,n=30);(5)未修饰胰岛组(Islet组,n=20)。术后连续3天测定血糖,其后每周测定尿糖3次。若受者尿糖阳性并连续2天血糖≥250 mg/dL为移植排斥反应,尿糖阴性超过100天为移植胰岛长期存活。结果激光共聚焦显微镜观察生物素呈绿色,FasL蛋白呈红色表达于胰岛表面,胰岛细胞的平均生物素化效率为(90.8±0.9)%,FasL蛋白平均表达率为(82.6±2.2)%。FasL组中28%受者的移植胰岛获得长期存活,联合应用RPM之后(FasL-RPM组)长期存活率提高到92%,两组间差异有显著统计学意义(P<0.05);SA组于术后25天全部受者均发生排斥反应,移植胰岛平均存活时间(mean survival time,MST)为(16±1.5)天,联合应用RPM之后(SA-RPM组)21%受者的移植胰岛获得长期存活,但显著低于FasL-RPM组的存活率(P<0.05)。Islet组于术后22天全部受者均发生排斥反应,移植胰岛MST为(14±1.7)天。结论表达FasL嵌合蛋白的工程化胰岛移植于糖尿病小鼠并联合短程免疫抑制剂治疗,有可能诱导移植胰岛长期存活,对1型糖尿病的治疗具有潜在的临床意义。

FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注诱导免疫耐受的机制

目的探讨FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注诱导移植免疫耐受的内在机制。方法采用ProtExTM外源蛋白修饰技术,以FasL嵌合蛋白修饰供者WF大鼠的脾脏细胞,于心脏移植围手术期多次输注给受者ACI大鼠,按注射细胞的不同随机将实验动物分为3组:(1)SA-FasL修饰的供者脾脏细胞组(SA-FasL组,n=23);(2)链霉亲和素蛋白(streptavidine,SA)修饰的供者脾脏细胞组(SA组,n=20);(3)未修饰的供者脾脏细胞对照组(Spl组,n=8)。围手术期未作任何治疗为空白对照组(Control组,n=10)。进行体外混合淋巴细胞反应,将第三方F344大鼠心脏移植给耐受大鼠,观察排斥反应。检测受者体内CD4+CD25+FoxP3+调节性T(Treg)细胞,并将其选出用于进行过继免疫研究。结果SA-FasL组移植心脏长期存活率为70%,显著高于其他组(P<0.05)。混合淋巴细胞反应与对第三方心脏的排斥反应表明已建立供者特异性免疫耐受。耐受大鼠体内Treg细胞明显增多(P<0.05),输注这群细胞能够过继免疫耐受。结论FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注能够诱导供者特异的免疫耐受,Treg细胞在免疫耐受状态的建立与维持中发挥重要作用。

FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注诱导移植免疫耐受的动物研究

目的 探讨FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注诱导移植免疫耐受的可行性.方法 采用ProtEx^（TM）源蛋白修饰技术,将FasL嵌合蛋白修饰供者WF大鼠的脾脏细胞,在围手术期分次输注给受者ACI大鼠.施行大鼠异位心脏移植术,按注射细胞的不同处理将实验动物随机分为3组：（1）SA-FasL修饰的供者脾脏细胞组（SA-FasL组,n=23）;（2）链霉亲和素蛋白（SA）修饰的供者脾脏细胞对照组（n=20）;（3）未修饰的供者脾脏细胞对照组（n=8）.围手术期未作任何细胞治疗为空白对照组（n=10）.将耐受大鼠脾脏细胞输注给未处理ACI大鼠再行心脏移植.进行混合淋巴细胞反应;将第三方F344大鼠心脏移植给耐受大鼠,观察排斥反应.结果 SA-FasL组移植心脏长期存活率为70%,显著高于其他组（P〈0.05）.耐受大鼠的脾脏细胞输注能够过继转移免疫耐受;混合淋巴细胞反应与第三方移植后的排斥反应表明形成了供者特异性免疫耐受.结论 FasL嵌合蛋白修饰的供者脾脏细胞输注能够诱导供者特异的免疫耐受,这一简便高效的方法具有潜在的临床应用价值.