人肺炎球菌参考血清09CS的制备及其中13个肺炎球菌结合疫苗血清型抗体的IgG含量和调理吞噬滴度

目的制备人肺炎球菌参考血清,对其中13价肺炎球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,PCV)血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型)的抗荚膜多糖抗体Ig G含量和调理吞噬滴度进行定值。方法用23价肺炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人,采集免疫后血浆,进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干,制备人肺炎球菌参考血清09CS。在WHO细菌性呼吸道病原参考实验室(University of Alabama at Birmingham,UAB)和兰州生物制品研究所有限责任公司(Lanzhou Institute of Biological Products,LIBP)实验室,采用WHO推荐的Pn PS ELISA法,以国际标准血清89SF为标准,对其中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量定值;以临时定值的09CS为标准,检测12份WHO校正血清、16份LIBP质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。同时以调理吞噬杀菌试验(opsonophagocytic killing assay,OPA)测定针对13个血清型的调理吞噬滴度。结果制备了5 000支(0.5 ml/支)冻干人肺炎球菌参考血清09CS,残留水分含量2.3%。确定了09CS中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的临时定值;以09CS为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P<0.05);以09CS为标准检测的89SF的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差百分率的绝对值均<20%。确立了09CS中13价PCV血清型调理吞噬滴度。结论 LIBP成功制备了人肺炎球菌参考血清09CS,完成了对其中的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的准确定值,并确定了调理吞噬滴度。

人脑膜炎球菌参考血清 Men10的制备及其抗A、C、Y、W135群脑膜炎血清群荚膜多糖抗体IgG含量和体外杀菌试验滴度

目的：制备人脑膜炎球菌参考血清，对其中A、C、Y、W135血清群的抗荚膜多糖抗体IgG含量和体外杀菌试验（ serum bactericidal assay ， SBA）滴度进行定值。方法用4价A、C、Y、W135群脑膜炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人，采集免疫后的血浆进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干，得到人脑膜炎球菌参考血清Men10。在兰州生物制品研究所有限责任公司（ LIBP ）实验室，用标准检测人血清中抗脑膜炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法，以国际标准血清CDC1992为标准，对其中4个血清群抗荚膜多糖抗体IgG含量定值；以临时定值的Men10和CDC1992分别为标准检测12份美国疾病预防控制中心（ CDC）的校正血清、56份4价多糖疫苗免疫后的血清，通过比较对定值的准确性进一步验证。同时以体外杀菌试验测定针对4个血清群的SBA滴度。结果制备了4000支（0．5 ml/支）冻干人脑膜炎球菌参考血清Men10。该血清HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋体检测均阴性，残留水分含量2．3％。以Men10为标准检测的12份CDC校正血清和56份4价多糖疫苗免疫后的血清群抗荚膜多糖抗体结果，与以CDC1992为标准检测的结果均具有良好的直线相关关系（ r＝0．99，P＜0．05）；以Men10为标准检测的CDC1992的4个血清群抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较，各血清型的误差均＜10％。同时确立了Men10中各血清群的体外杀菌试验滴度。结论 LIBP成功制备了人脑膜炎球菌参考血清Men10并完成了对其中的4个血清群抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值，并确定了其中各群别抗体的体外杀菌试验滴度。

人血清中A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量ELISA检测方法的建立

目的建立人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖Ig G抗体含量的ELISA定量检测方法,并进行验证。方法筛选适用的酶标板,优化抗原包被浓度,确定ELISA检测过程的关键条件,对建立的ELISA方法的特异性、线性、准确性、精密度、最低检测值和稳定性进行验证,并建立实验室质控血清的质控检测范围。结果酶标板的板内CV为9.8%,板间CV为16.4%,符合检测使用要求。免疫血清经多糖吸收后,群特异性抗体含量与同群多糖吸收剂量呈明显的剂量依赖关系。12份美国CDC质控血清中各群Ig G抗体含量与血清的稀释度呈负相关,相关系数（r）和斜率（slope）均接近-1,线性关系良好;检测结果与CDC公布数据一致性良好,一致性相关系数A、C、W135、Y群分别为0.912 5、0.939 6、0.963 7和0.920 6,准确度较好。实验室内部质控血清Men20中各群Ig G抗体含量试验内和试验间精密度分别小于10%和20%,精密度较好;各血清群别的CV值均〈30%,稳定性较好;A、C、Y、W135群多糖Ig G抗体含量最低检测值分别为0.092、0.118、0.067和0.035μg/ml,质控血清的检测范围分别为：92.49~36.53、37.29~17.69、66.18~25.54和50.15~23.31μg/ml。结论建立了标准化的检测人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖Ig G抗体含量的定量ELISA方法,并确定了实验室日常用质控血清Men20的质控检测值范围。

成人免疫ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后血清中抗体水平的动态分析

目的：从血清抗体体外杀菌功能和IgG含量角度观察健康成人接种一剂ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后不同时间体内抗体的动态水平，探讨抗体功能和含量的相关性和疫苗的保护期限。方法对20名健康成人接种一剂四价脑膜炎多糖疫苗，分别采集免疫前和免疫后不同时期的血清。采用血清杀菌试验（SBA）和标准定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中杀菌抗体滴度和抗荚膜多糖IgG抗体含量。结果成人免疫前血清中存在一定水平的抗A、C、Y和W135群荚膜多糖抗体，并且除C群外，血清中针对A、Y和W135群球菌的杀菌抗体滴度都较高。免疫15d后，各群荚膜多糖抗体的含量和血清杀菌抗体滴度都较免疫前有了明显的升高（P＜0．05），并且在30～160d维持在较高的水平；免疫后近3年时杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度降至免疫前水平。血清杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度之间相关关系较弱（r＜0．3，P＞0．05），但免疫前后不同时间的受试者的血清杀菌抗体几何均数滴度（GMTs）和IgG抗体几何均数浓度（GMCs）之间具有良好的相关关系（r＞0．7，P＜0．05）。结论受试者免疫前后不同时间血清杀菌抗体GMTs和IgG抗体GMCs，在评价疫苗效果时具有一致性。接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期大约3年。

b型流感嗜血杆菌疫苗及新型疫苗或联合疫苗的免疫原性评价方法

b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)是全球范围内引起3个月到5岁龄儿童肺炎、脑膜炎和败血症等严重疾病的重要病原菌。接种疫苗是唯一有效的预防和控制Hib引起疾病的公共卫生措施,将Hib结合疫苗纳入儿童常规免疫程序的国家,Hib发病率和携带率均明显降低。本文现对Hib疫苗种类、免疫学特性、临床效力以及Hib新型疫苗或联合疫苗的免疫原性评价方法作一综述。