有效抑制大鼠背根神经节细胞TRPV4通道小干扰RNA的筛选

目的:以不同浓度以及序列的小干扰RNA(SiRNA)转染,培养大鼠的背根神经节(DRG),观察对神经元形态、活性变化以及瞬时感受器电位离子4(TRPV4)通道功能的影响,筛选转染这种神经元的SiRNA。方法:取新生大鼠腰背段全部DRG,将处理好的DRG神经元进行培养,将神经元随机分为正常对照组、SiRNA不同浓度组、错配组,进行SiRNA转染,然后培养相应时间后观察各组神经元在荧光显微镜的形态学特点,并用四甲基偶氮唑兰比色法(MTT)分析各组神经元细胞生长活性的改变。另外利用Fluo3荧光探针,观察SiRNA作用下细胞内游离钙对低渗溶液的反应,采用酶联免疫法方法观察KCl刺激下各组细胞释放P物质的改变。结果:荧光显微镜下观察适宜浓度组SiRNA转染DRG神经元形态较正常组无明显差异。MTT法比较10-40nM各组神经元活性的差异无显著性意义。而SiRNA作用下细胞内游离钙对低渗溶液的反应以及细胞释放P物质的改变有显著差异。结论:40-80nMSiRNA可以有效转染DRG细胞,未对DRG神经元活性产生显著影响,这为研究TRPV4通道功能提供了一个有效的方法。