含乙型肝炎病毒C基因的重组腺相关病毒对树突状细胞的作用

目的 研究腺相关病毒(AAV)为载体的含有乙型肝炎病毒(HBV)C基因重组病毒(rAAV-HBV-C)感染树突状细胞(DC)的效率及对DC生长和成熟的影响。 方法 从正常人外周血中分离单个核细胞收取单核细胞进行体外培养,分别用rAAV-HBV-C和293细胞裂解物感染刺激单核细胞,感染后的单核细胞在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF α)存在的条件下继续培养获得成熟的DC。用逆转录聚合酶链反应及流式细胞仪细胞内染色检测目的基因(HBV-C)的转录及表达;通过观察不同时间DC的形态及检测收获DC时其表面分化抗原(CD)的表达来评价DC的生长和成熟状态。 结果 rAAV-HBV-c感染后的DC可转录HBV-C基因并表达HBV-C抗原,病毒感染组与对照组收获的DC在细胞形态与CD表达方面差异无统计学意义。 结论 rAAV-HBV-C可有效感染DC,感染的病毒对DC的生长及成熟没有显著影响。

腺相关病毒Rep78蛋白对乙型肝炎病毒C基因的抑制作用

目的 研究腺相关病毒(AAV)Rep78蛋白对乙型肝炎病毒C基因(HBV-C)的抑制作用及机制。 方法 以pEOB6(含有HBV全长的质粒)为模板,聚合酶链反应法分别扩增出HBV-C启动子基因及含有HBV-C启动子的HBV-C基因。利用pMAL-Rep78体外扩增得到Rep78蛋白。以凝胶电泳阻滞实验检测Rep78与HBV-C启动子的结合,体外转录实验观察Rep78对HBV-C转录的影响。 结果 聚合酶链反应法扩增出了的HBV-C启动子基因(182 bp)及含有HBV-C启动子的HBV-C基因(789 bp)。凝胶电泳阻滞实验结果显示Rep 78与HBV-C启动子结合,呈剂量依赖性并可以被Rep 78抗体阻滞。体外转录实验显示Rep78明显抑制HBV-C的转录。 结论 AAVRep78可以通过与HBV-C启动子结合抑制HBV-C的转录。