小剂量激素对类风湿性关节炎患者的远期疗效

目的系统评价小剂量糖皮质激素(<15mg/d)治疗类风湿性关节炎的远期疗效以及安全性。方法检索小剂量糖皮质激素治疗类风湿性关节炎的随机临床试验结果。用Revman4.2软件对入选的文献进行Meta分析。结果最终纳入14项研究,Meta分析结果:临床有效率的合并OR值为1.50,95%CI:1.18～1.92,P=0.001;骨关节有效率的合并OR值为0.87,95%CI:0.66～1.55,P=0.32;小剂量激素对Sharp评分影响的合并OR值为-5.84,95%CI:-6.73～-4.95,P<0.000 01;对骨质侵蚀分数影响的合并OR值为-4.34,95%CI:-4.63～-3.99,P<0.000 01;对关节狭窄分数影响的合并OR值为-1.03,95%CI:-1.31～-0.75,P<0.000 01;对健康评定问卷(HAQ)评分和握力比较差异无统计学意义。结论小剂量糖皮质激素治疗类风湿性关节炎远期疗效较好且不会引起不良反应。

121例原发性IgA肾病的临床与病理及相关性分析

目的:了解IgA肾病患者的临床表现及其病理类型、损害程度,并探讨其相关性。方法:对经肾活检证实为原发性IgA肾病的121例患者的资料进行回顾性分析。结果:121例中男55例,女66例,平均年龄(33.33±10.59)岁;临床表现以尿检异常型最常见,为50例(占41.3%),其次是高血压型25例(占20.7%)及大量蛋白尿型21例(占17.3%);肾脏病理类型多样,Hass分级以Ⅲ级为主(占47.9%);伴新月体形成39例(占32.2%),伴肾小管损害91例(占75.2%),伴有血管病变23例(占19%),免疫复合物的沉积以IgA+IgM+C3型比例最高为48例(占39.67%),IgM沉积总计达77例(占63.63%)。结论:IgA肾病的临床表现和病理类型多样,存在着一定的相关性但不完全一致,要综合临床表现并早期行肾活检以明确肾脏病理诊断。

组织因子siRNA表达载体的构建及其抑制人神经母细胞瘤细胞组织因子表达的研究

目的:构建组织因子(TF)特异性小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其对人神经母细胞瘤细胞TF表达的影响。方法:分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,限制酶切予以初步筛选,基因测序进行证实。以脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC。以WesternBlotting检测TF表达。结果:所构建TFsiRNA-pSUPER表达载体经基因测序证实。SK-N-MC细胞高表达TF,TFsiRNA-pSUPER表达载体转染48h后,TF表达水平与转染pSUPER质粒的对照细胞相比显著降低,呈剂量依赖性。结论:人神经母细胞瘤SK-N-MC中TF异常高表达,本研究构建的TFsiRNA表达载体可在SK-N-MC中特异性下调TF表达,可作为干预TF表达、研究其非凝血功能的有效手段。

一种测定饲料中氯羟吡啶残留的快速电化学检测方法

为探索检测氯羟吡啶等广谱抗球虫药物快速、灵敏的检测方法,本文采用玻碳电极为工作电极,建立了伏安法检测氯羟吡啶的电化学行为。结果表明:氯羟吡啶在1.45 V处具有氧化峰电流,检测的线性范围为1.7×10-7mol/L至2.3×10-5mol/L,检测限为1.4×10-8mol/L,回收率达93.7%。当玻碳电极用Nafion-二茂铁修饰后,可显著提高检测的特异性及灵敏度,使检测下限达1.8×10-9mol/L。同时本文就不同支持电解质溶液、pH值、断路富积时间对测定结果的影响及修饰电极的再生等进行了详细的探讨。

GJB6基因敲除小鼠耳蜗血管纹超微结构观察

目的观察缝隙连接蛋白30（connexin，Cx30）基因敲除纯合子Cx30（-/-）小鼠（P3、P7、P10、P30、P60、P90）耳蜗血管纹（stria vascularis，SV）超微结构的发育情况，进一步探讨GJB6基因突变导致耳聋的机制。方法选取Cx30（-/-）小鼠P3、P7、P10、P30、P60、P90等6个发育阶段的小鼠，用透射电镜观察耳蜗血管纹超微结构变化情况。结果P3～P90耳蜗血管纹边缘细胞、中间细胞、基底细胞呈现一个由不成熟至成熟的正常发育过程，至P90时均未发现退化性表现或缺失改变。血管纹毛细血管随着小鼠日龄的增加，管腔逐渐变宽，逐渐成熟，高倍镜下见P3、P7、P10时血管内皮细胞结构无明显异常，P30时内皮细胞之间的纤维突起出现疏松，P60时内皮细胞之间出现较大的裂隙，P90时这种改变更加严重，内皮细胞之间出现扩大的细胞间隙。结论 GJB6基因缺陷本身并不影响耳蜗组织血管纹的形态发育和成熟，GJB6缺失引起小鼠出生后逐渐出现的血管纹内皮细胞超微结构的改变导致内皮细胞屏障破坏，可能引起耳蜗内电位缺失，从而造成听力的下降。

雷公藤有效组分WZ_1对肾小球肾炎动物模型的治疗作用及机制探讨

中药雷公藤在我国用于风湿病的治疗已有近千年历史。近年来由于其具有明显的免疫活性,受到国内外学者的关注。目前已从雷公藤全根中鉴定出70余种不同组分。目前所报道的有效成分多为有机溶剂提取物,其毒性较强,影响了进一步使用。我们以传统煎煮的方法从雷公藤根中提取有效成分,

人GJB2基因错义突变表达载体构建及鉴定

目的构建6种分别携带GJB2基因错义突变A40G、V37I、L90P、L90V、V84L和W44C的真核表达载体,转染HEK293细胞,建立6种错义突变的稳定表达细胞系。方法以野生型Cx26-EGFP融合蛋白质粒为模板,用Stratagene公司定点突变试剂盒构建错义突变表达载体,直接测序鉴定序列正确性,选取含有突变的载体转染HEK293细胞,G418选择性培养2周,流式细胞仪筛选表达阳性细胞,扩增培养形成稳定表达人Cx26突变的HEK293细胞系。培养细胞用4%多聚甲醛固定,鬼笔环肽和4',6-二脒基-2-苯基吲哚衬染细胞核,荧光显微镜下检测结果。结果6种突变表达载体经过测序,均含有相应突变,无多余突变出现,转染后均可在细胞间形成缝隙连接,呈现绿色荧光。结论成功构建6种携带GJB2基因错义突变的真核表达载体,为进一步研究错义突变致聋原因奠定了实验基础。

循环伏安法快速检测饲料中球虫酯

本实验探讨了检测球虫酯等广谱抗球虫药物快速、灵敏的检测方法,本文采用玻碳电极为工作电极,以伏安法检测了球虫酯的电化学行为。球虫酯在+1.54V处具有氧化峰电流,检测的线性范围为2.5×10-7～3.1×10-5mol/L,检测限为1.6×10-8mol/L,回收率达92.5%。当玻碳电极用Nafion修饰后,可显著提高检测的特异性及灵敏度,使检测下限达2.4×10-9mol/L。同时本实验对不同支持电解质溶液、pH值、断路富积时间对测定结果的影响及修饰电极的再生等进行了详细的探讨。

连接蛋白29在小鼠耳蜗中的表达

目的研究连接蛋白29(connexin 29,Cx29)在小鼠内耳的表达,探讨Cx29突变致聋的原因。方法野生型小鼠耳蜗冰冻切片,用神经丝蛋白(neurofilament,NF)、髓鞘相关糖蛋白抗体(myelin associated glycoprotein,MAG)和神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体与Cx29抗体行双重免疫荧光染色,荧光显微镜观察染色结果。结果Cx29主要表达于位听神经和螺旋神经节细胞髓鞘,MAG与Cx29的共同表达于内耳位听神经处,表达呈圈状;GFAP只在内听道以外的脑干部位表达,与Cx29无共同表达;Cx29形成一个个圈样围绕NF;血管纹处可见Cx29微量表达。结论Cx29在小鼠内耳中大量表达,可能对维持小鼠正常听觉功能起重要作用。

碳酸镧与醋酸钙治疗维持性透析患者高磷血症的比较研究

目的:探讨新型磷结合剂碳酸镧相对于传统磷结合剂醋酸钙用于治疗维持性透析患者高磷血症的疗效及其对于血管钙化的影响。方法:选取80例终末期慢性肾脏病(CKD)维持性透析高磷血症患者,按随机数字表法分为碳酸镧组和醋酸钙组,检测2组患者服药后1、2、4周及4、8、12个月的血磷、血钙、钙磷乘积水平,并于治疗4周及12个月后检测患者甲状旁腺激素(PTH)水平,比较2组患者短期和1年维持期治疗的疗效。测定2组患者1、4、8、12个月的血管钙化程度,分析碳酸镧对于血管钙化的影响。结果:2组患者的血磷在短期内均下降,前2周2组血磷及钙磷乘积差异不明显,但在第4周碳酸镧组血磷及钙磷乘积均低于醋酸钙组(均P<0.01)。维持1年冶疗后,2组血磷和PTH水平无明显差异,均能有效降低血磷,但碳酸镧组钙磷乘积明显低于醋酸钙组(P<0.01);相比于血透患者,碳酸镧组腹透患者的血磷下降更为明显(P<0.05)。血管钙化程度比较,碳酸镧组出现轻度钙化12例,中重度钙化3例,高钙血症0例,总不良影响率为37.5%;醋酸钙组出现轻度血管钙化14例,中重度血管钙化8例,高钙血症8例,总不良影响率为75.0%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:碳酸镧对于治疗维持性透析患者高磷血症有效,相较于醋酸钙,具有更好的短期疗效,且较少引起高钙血症,更易改善患者的钙磷乘积,其对血管钙化的影响较小。

蛋氨酸对化疗药物引起内耳损伤的保护作用

目的研究蛋氨酸对化疗药物顺铂导致耳毒性的保护作用。方法将30只昆明小鼠随机分为3组。顺铂组(n=10):给予顺铂3.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射,连续7d;蛋氨酸+顺铂组(n=10):蛋氨酸300mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射,30min后给予顺铂3.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射,连续7d;对照组(n=10):生理盐水3.5mg·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射,连续7d。实验第8天,利用听觉脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR)对3组小鼠进行听功能测试,然后迅速断头取出双侧内耳,解剖耳蜗基底膜,铺片并HE染色,普通光学显微镜下观察。结果在ABR测试中,对照组小鼠实验前后听力无明显变化;顺铂组小鼠听阈及Ⅰ波和Ⅲ波潜伏期与对照组相比变化明显;蛋氨酸+顺铂组小鼠听阈及Ⅰ波和Ⅲ波潜伏期与对照组相比也出现变化,但变化程度较顺铂组明显减轻。光镜观察:对照组动物耳蜗基底膜外毛细胞排列整齐;顺铂组基底膜外毛细胞有不同程度的坏死、脱落,尤以底转缺失严重;蛋氨酸+顺铂组耳蜗毛细胞损伤较顺铂组明显减轻。结论化疗药物顺铂对耳蜗毛细胞引起损害,而蛋氨酸对这种损害有较好的保护作用。

小鼠缺血性脑卒中后磷脂酶D1在自噬和神经损伤中的作用

目的探讨在小鼠缺血性脑卒中模型中,磷脂酶D1(PLD1)在自噬和神经损伤中的作用。方法将6只6~8周龄成年雄性C57鼠采用随机数字表法分为两组,sham组和stroke组,每组各3只。sham组小鼠给予缺血性脑卒中处理但不进行大脑中动脉结扎,stroke组小鼠给予缺血性脑卒中处理。观察两组小鼠脑神经元内PLD1的变化。然后构建条件性基因敲除小鼠,将小鼠采用随机数字表法分为3组:sham PLD1^(fl/fl)组12只,缺血性脑卒中后PLD1^(fl/fl)组(stroke PLD1^(fl/fl)组) 12只,缺血性脑卒中后PLD1-KO组(stroke PLD1-KO组) 12只,然后利用免疫荧光染色、Western blotting、TTC染色法观察sham PLD1^(fl/fl)组小鼠,缺血性脑卒中后PLD1^(fl/fl)小鼠和缺血性脑卒中后PLD1-KO小鼠神经元自噬(LC3-Ⅱ)的情况及自噬对梗死面积的影响,明确PLD1的作用机制。结果在缺血性脑卒中后24 h,缺血半暗带的神经元中,stroke组较sham组PLD1表达明显增多。在条件性敲除小鼠中,stroke PLD1^(fl/fl)组较sham PLD1^(fl/fl)组自噬重要标志物LC3-Ⅱ明显升高(P <0. 05),而条件性敲除神经元内PLD1后,stroke PLD1-KO组较stroke PLD1^(fl/fl)组LC3-Ⅱ明显降低(P <0. 05),同时,梗死面积也明显缩小(P <0. 000 1)。结论缺血性脑卒中后神经元内PLD1表达升高,LC3-Ⅱ增多,抑制PLD1引起的过度自噬可以有效改善缺血性脑卒中后的神经损伤。

L人晶体膜内蛋白MP19基因(LIM2)启动子上一个晶体特异顺式元件的鉴定(英文)

使用重叠和变异的寡核苷酸作为探针 ,凝胶迁移分析和竞争实验分析了LIM2转录起始位点上游 - 4 7至- 32的区域 ,与其高度亲和结合的一个蛋白复合体看来仅仅结合到这个DNA双链区域的“敏感”位点。这个位点的序列由 4个G核苷 ,接着 7个其他核苷酸 (AACCTAA)及连着另外 4个G核苷组成 ,即GGGGAACCTAAGGGG ;我们称其为Hsu元件。使用含有这个元件或相应的变异元件所构建的LIM2基因启动子 CAT质粒的活性分析表明Hsu元件是位于LIM2基因启动子之内 ,它是LIM2基因表达所必须的。结合到Hsu元件的反式因子存于晶体发育期间 ,看来是晶体特异性的。由于LIM2基因启动子并不包含一个经典的TATA盒 ,这个Hsu元件可能充当RNA复制酶复合体结合的位点。

美国医学教育和消化内科医师的规范化培养

笔者有幸在中国、美国都从事消化内科临床医师工作多年，近年来有许多中国消化内科医师到访，建议谈谈美国医学教育和消化科医师的规范化培养，故撰此文希望能给国内同行一些参考。

氧化应激在衰弱发病机制中的作用

衰弱包括躯体衰弱、认知衰弱与社会心理衰弱,衰弱老年人表现为多个器官和系统生理储备功能下降,当遇到微小的刺激如呼吸道感染、微创手术等,便可引发慢病加剧、再住院、跌倒、谵妄、失智、失能,甚至死亡等一系列不良事件。衰弱的本质是动态的,个体从健康、衰弱前、衰弱再到失能是一种连续演变的过程,经过早期干预,衰弱可在一定程度上逆转,从而减少生理储备的损失。因此,研究衰弱的发病机制,明确与衰弱相关的生物标志物并尽早识别非常重要。氧化应激在衰弱的发病机制中起了重要作用,本文对氧化应激在衰弱发生中的作用进行探讨,重点论述氧化应激标志物、抗氧化防御系统及氧化应激相关线粒体功能障碍与衰弱的关系。

现代科学对经络的揭示

本文是继《科技导报》１９９１年第３期（第３７～４０页）“生物电化学振荡”一文后,对经络研究新进展的进一步总结,其中有关生物电场的作用和针灸机制的探讨因前文已述,故本文从略。近年来针灸和经络研究在世界上受到日益广泛的重视,数以百计的随机分组对照实验肯定了针...

关于我国生物医学科学中长期战略发展和生物医学战略平台建设的建议

根据我国生物医学科学发展的现状和问题,文中提议在制订国家中长期科学和技术发展规划时应考虑国外当前生物医学科学战略转移所带来的挑战和机遇;建议以系统分子生物学和多系统生物学为基础,把“DNA复制调控和人类疾病”的研究作为我国生物医学科学中长期战略发展的一个切入点和突破点。以此搭建我国生物医学科学的战略平台,建设系统的国家生物医学学科和完整的生物医学科学研发体系,并充分发挥基金激励机制。

抗血管性血友病因子抗体在特发性血栓性血小板减少性紫癜发病机制中的作用

目的在具有正常血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS13）活性且不存在抗ADAMTS13自身抗体的特发性血栓性血小板减少性紫癜（1vrP）患者血浆中检测是否存在抗血管性血友病因子（VwF）自身抗体，并通过体外实验验证鼠源性抗人VwF单克隆抗体（单抗）是否可以降低ADAMTS13对VwF的裂解活性。方法本研究为临床实验诊断研究。应用酶联免疫吸附试验对53例成人特发性1TrP患者检测抗VWF自身抗体，采用十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳进行VwF多聚体分析，检测是否存在超大分子量VwF（uL—VWF）多聚体。并且，在高剪切力和变性条件下分别观察8种鼠源性抗VwF单抗对重组ADAMTS13（rADAMTS13）裂解血浆源纯化VwF的活性的影响。结果在2例具有正常血浆ADAMTS13活性且不存在抗ADAMTS13自身抗体的特发性TrP患者血浆中检测到抗VwF自身抗体和UL—VwF多聚体。另外，一种鼠源性抗人VwF单抗SZ34在高剪切力条件下能够降低rADAMTS13对VwF的水解活性，但在静态／盐酸胍变性条件下并无此影响。结论抗VwF抗体有可能是具有正常ADAMTS13活性且不存在抗ADAMTS13自身抗体的特发性TTP患者的发病原因之一。

腺相关病毒在不同年龄小鼠耳蜗中表达的研究

目的观察腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)血清型9(AAV9)在不同年龄小鼠耳蜗中的感染和表达情况.方法将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的AAV9通过圆窗注射或中阶注射两种途径分别导入不同年龄组小鼠的内耳,根据年龄和注射部位分为4组(每组6只):P1SM组,出生后1天(P1)小鼠经中阶注射;P1RW组,出生后1天(P1)小鼠经圆窗注射;P9RW组:出生后9天(P9)小鼠经圆窗注射;P30RW组,成年小鼠(P30)经圆窗注射.4组小鼠注射后1个月行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试以及耳蜗基底膜铺片观察GFP在内耳中的表达情况(所有小鼠均左耳手术注射AAV9,右耳做为空白自身对照).采用GraphPad Prism 5统计软件进行数据分析.结果GFP可特异性表达于耳蜗毛细胞,新生小鼠(P1)两种注射途径均可导致GFP在内、外毛细胞高表达,且注射耳ABR反应阈值与对侧非注射耳相比,差异无统计学意义(P值均>0.05).P9RW组小鼠耳蜗内毛细胞GFP表达均为阳性,而外毛细胞表达明显下降;P30RW组仅内毛细胞GFP表达阳性,其外毛细胞无阳性表达.P9RW组与P30RW组注射耳ABR反应阈值较对侧耳均明显提高,差异有统计学意义(P值均<0.01).结论AAV9转染新生小鼠后可在耳蜗内、外毛细胞中高表达,且对小鼠ABR反应阈无明显影响;成年小鼠内耳转染AAV9后,仅在内毛细胞表达,并造成小鼠ABR反应阈升高.AAV9在新生小鼠耳蜗中的转染效率明显高于成年小鼠.

姜黄素类似物EF25-(GSH)_2抗肝癌作用的研究

在细胞及动物个体水平探讨姜黄素类似物EF25-(GSH)2的抗肝癌作用。用不同浓度的EF25-(GSH)2处理体外培养的肝癌细胞、正常肝细胞以及HepG2荷瘤裸鼠,MTT法检测细胞存活率,电镜及激光共聚焦显微镜观察细胞形态,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测AMPK/Akt/mTOR相关通路蛋白磷酸化水平的变化。结果显示,EF25-(GSH)2对HepG2作用48 h的IC50为7.2μmol/L,对其生长抑制作用明显优于姜黄素及顺铂,且对正常细胞的杀伤作用较小。形态学观察到细胞中有自噬现象的发生。免疫印迹法结果提示,EF25-(GSH)2可能通过AMPK/Akt/mTOR的相关通路抑制肿瘤细胞生长。对肝癌模型裸鼠的实验显示,给药后的肿瘤体积明显缩小。该实验结果证明,EF25-(GSH)2具有良好的作为肝癌治疗药物的开发前景。