GJB6基因敲除小鼠耳蜗血管纹超微结构观察

目的观察缝隙连接蛋白30（connexin，Cx30）基因敲除纯合子Cx30（-/-）小鼠（P3、P7、P10、P30、P60、P90）耳蜗血管纹（stria vascularis，SV）超微结构的发育情况，进一步探讨GJB6基因突变导致耳聋的机制。方法选取Cx30（-/-）小鼠P3、P7、P10、P30、P60、P90等6个发育阶段的小鼠，用透射电镜观察耳蜗血管纹超微结构变化情况。结果P3～P90耳蜗血管纹边缘细胞、中间细胞、基底细胞呈现一个由不成熟至成熟的正常发育过程，至P90时均未发现退化性表现或缺失改变。血管纹毛细血管随着小鼠日龄的增加，管腔逐渐变宽，逐渐成熟，高倍镜下见P3、P7、P10时血管内皮细胞结构无明显异常，P30时内皮细胞之间的纤维突起出现疏松，P60时内皮细胞之间出现较大的裂隙，P90时这种改变更加严重，内皮细胞之间出现扩大的细胞间隙。结论 GJB6基因缺陷本身并不影响耳蜗组织血管纹的形态发育和成熟，GJB6缺失引起小鼠出生后逐渐出现的血管纹内皮细胞超微结构的改变导致内皮细胞屏障破坏，可能引起耳蜗内电位缺失，从而造成听力的下降。

腺相关病毒在不同年龄小鼠耳蜗中表达的研究

目的观察腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)血清型9(AAV9)在不同年龄小鼠耳蜗中的感染和表达情况.方法将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的AAV9通过圆窗注射或中阶注射两种途径分别导入不同年龄组小鼠的内耳,根据年龄和注射部位分为4组(每组6只):P1SM组,出生后1天(P1)小鼠经中阶注射;P1RW组,出生后1天(P1)小鼠经圆窗注射;P9RW组:出生后9天(P9)小鼠经圆窗注射;P30RW组,成年小鼠(P30)经圆窗注射.4组小鼠注射后1个月行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试以及耳蜗基底膜铺片观察GFP在内耳中的表达情况(所有小鼠均左耳手术注射AAV9,右耳做为空白自身对照).采用GraphPad Prism 5统计软件进行数据分析.结果GFP可特异性表达于耳蜗毛细胞,新生小鼠(P1)两种注射途径均可导致GFP在内、外毛细胞高表达,且注射耳ABR反应阈值与对侧非注射耳相比,差异无统计学意义(P值均>0.05).P9RW组小鼠耳蜗内毛细胞GFP表达均为阳性,而外毛细胞表达明显下降;P30RW组仅内毛细胞GFP表达阳性,其外毛细胞无阳性表达.P9RW组与P30RW组注射耳ABR反应阈值较对侧耳均明显提高,差异有统计学意义(P值均<0.01).结论AAV9转染新生小鼠后可在耳蜗内、外毛细胞中高表达,且对小鼠ABR反应阈无明显影响;成年小鼠内耳转染AAV9后,仅在内毛细胞表达,并造成小鼠ABR反应阈升高.AAV9在新生小鼠耳蜗中的转染效率明显高于成年小鼠.