人免疫缺陷病毒1型Rev单链抗体细胞内免疫抗病毒基因治疗研究

应用抗HIV 1Rev单链抗体细胞内免疫方法 ,研究在人T细胞和周围血淋巴单核细胞内抗病毒复制的效果 ,探讨细胞内免疫抗HIV 1基因治疗的可行性。克隆抗HIV 1Rev单链抗体 (sFv)基因 ,以逆转录病毒为基因载体 ,将包装后的含靶基因的逆转录病毒转导至人CD4 阳性T 细胞株CEM和SupT1,以及HIV 1阴性自愿者的周围血淋巴单核细胞 (PBMC) ,再分别用不同剂量 (MOI)的HIV 1病毒株PNL4 3 和HxB2 进行病毒攻击实验。测定HIV 1p2 4抗原。滴度以了解抗病毒复制的效果 ,检测带报道基因CAT以了解靶基因在细胞内的表达状况。分别应用0 2 4、0 0 6和 0 0 2 4MOI的PNL4 3 或HxB2 病毒株攻击 ,测定p2 4抗原。结果显示 ,抗RevsFv细胞内表达能有效地抑制病毒在细胞内的复制 ,与对照组比较 ,病毒复制被抑制效率达 90 %以上。体外培养细胞 2个月 ,仍可观察到效果 ,病毒攻击后合胞体细胞形成显著减少。CAT实验表明 ,逆转录病毒载体可使靶基因在人T细胞和PBMC内有效表达。抗HIV 1RevsFv细胞内表达可有效地抑制病毒复制 ,有望成为抗HIV