人cbl基因真核表达载体的构建及表达

目的 :构建带有flag标签的人cbl基因真核表达载体 ,并检测其在真核细胞中的表达 .方法 :以含有人全长cblcDNA的质粒pEFHAcbl为模板 ,采用PCR方法扩增cbl基因 ,并在其N 末端带上含 2 4bp的flag标签 ,克隆到 pGEM Teasy载体并测序 ,再亚克隆至真核表达载体 pcDNA3 1(+) ,酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染COS 7细胞 ,Westernblot检测flag cbl在细胞中的表达 .结果 :测序证实以pEFHAcbl为模板获得的flag cbl融合基因的序列以及读框全部正确 ;重组质粒 pcDNA3 1(+) flag cbl经酶切后产生与理论预期长度相符的片段 ;脂质体法转染COS 7后检测到预期目的蛋白的表达 .结论 :成功构建了N 末端带flag标签的cbl真核表达载体 ,并使其在真核细胞COS 7中表达 .