信号转导和转录激活因子5与β-catenin在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的:从信号传导途径治疗疾病是目前生物治疗的新兴领域。有目的地控制信号分子的传递,有可能为诊治人类重大疾病开辟新的途径。β-caten in作为一种原癌蛋白是W nt信号系统下游的关键成分,它参与由E-cadherin介导的细胞间的信号传导和细胞黏附。信号传导和转录激活因子5(signal transducers and acti-vators of transcription 5,STAT5)是细胞浆转录因子,最初发现在小鼠乳腺发育过程中,因为参与正常乳腺上皮细胞的生长和发育,又称乳腺生长因子。W nt信号途径和STAT5信号途径是在细胞的正常生长发育过程中起重要作用的二条信号途径,它们的异常调节可引起生物发育缺陷,并参与肿瘤的发生。乳腺癌是我国女性高发性恶性肿瘤,分布广泛,但其发生的分子机制尚不明确。目前国内外对两者在乳腺癌中的情况未见报道。因此,研究STAT5和β-caten in在乳腺癌中的表达及其临床意义是本文关注的重点,目的是为了找到诊断和治疗乳腺癌的新分子靶点。方法:采用免疫组化S-P法检测20例正常乳腺组织和72例乳腺癌组织中STAT5和-βcaten in的表达情况。结果:STAT5和β-caten in在20例正常乳腺组织中均为阴性表达,而在乳腺癌组织中的阳性表达率分别是65.3%和70.8%;两者的表达水平均与乳腺癌临床分期、病理组织学分级及淋巴结转移有关(P<0.05);而与患者年龄及组织学类型无关(P>0.05)。STAT5和-βcaten in在乳腺癌组织中的阳性表达呈显著正相关(r=0.56,P<0.01)。结论:STAT5和-βcaten in在乳腺癌的阳性表达可能在乳腺癌的发生和侵袭转移中起重要作用,联合检测STAT5和β-caten in可以作为乳腺癌的诊断和预后判断指标。

抗β-catenin抗体制备及在结肠癌病理检测中的应用

制备和纯化兔抗小鼠β-catenin抗体,分析其在结肠癌诊断中的应用价值。应用重组小鼠β-catenin蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗β-catenin抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化,用免疫印迹法(Westernblot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及结肠癌细胞系SW48和HCT116中β-catenin蛋白的表达。用免疫组化SP法检测β-catenin在正常结肠组织和结肠癌组织中的不同表达。结果,用重组小鼠β-catenin蛋白免疫新西兰兔7周后,应用间接ELISA法检测静脉血中β-catenin抗体效价为1∶204800(A450=1.01)。将β-catenin经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为92000的蛋白条带。与文献报道相符。用抗β-catenin血清做Westernblot分析显示,在Mr为92000处有1条明显的区带,证明是抗β-catenin特异性抗体。从人结肠癌细胞株SW48和HCT116提取全细胞蛋白,经用所制备的β-catenin抗体反应,均可观察到β-catenin蛋白的表达。人结肠组织切片经抗β-catenin抗体免疫组化染色,在正常结肠组织细胞膜中可见棕黄色颗粒,而在结肠癌组织的细胞浆中可见棕黄色颗粒。制备了高效价、特异性的兔抗β-catenin抗体。用该抗体检测证实,正常结肠组织β-catenin表达在细胞膜中,而结肠癌组织β-catenin则在细胞浆中表达。

非受体型酪氨酸激酶-Syk蛋白的提取与纯化

目的 :从转染syk基因的Sf2 1细胞中提取、纯化免疫相关因子Syk蛋白。方法 :将syk基因转染Sf2 1细胞 ,于 2 8℃培养 48h ,收集细胞 ,用超声波破碎仪裂解细胞 ,提取裂解液中总蛋白 ,用Yellow 3凝胶和Toyopearl AF Heptin 650M凝胶层析柱分离、纯化。层析液中的Syk蛋白存在和性质 ,用SDS PAGE、免疫印迹实验和等电聚焦实验鉴定。结果 :从 2 5亿个Sf2 1细胞裂解液中提取了含有Syk的 2 2 5mg蛋白质。经Yellow 3凝胶层析分离 ,得到两个亚种的Syk蛋白 ,相对分子质量 (Mr)均为72× 10 3 。进一步用Toyopearl AF Heptin 650M凝胶层析纯化后 ,得到两个纯的Syk蛋白 ,SDS PAGE、免疫印迹实验结果显示 ,两种Syk的Mr 均为 72× 10 3,与Syk的理论相对分子质量吻合。但等电聚焦实验显示 ,这两种Syk蛋白成分具有不同的pI值。结论 :从 2 5亿个转染syk基因的Sf2 1细胞中纯化出8mgSyk蛋白 ,纯度高于 95%。这两种Syk的Mr 虽然相同 ,但具有不同的pI值 ,是两个亚种。这些Syk可用于研究Syk的作用机制。

癌基因产物STAT5在乳腺组织中的表达及其临床意义

目的 :探讨信号传导与转录激活因子 5 (signaltransducersandactivatoroftranscription5 ,STAT5 )在乳腺良、恶性组织中的表达情况 ,分析STAT5的表达改变与乳腺癌发生、发展的关系。方法 :应用Westernblot检测 4 4例乳腺癌组织及其癌旁 5cm外正常乳腺组织中STAT5蛋白的表达。结果 :乳腺癌组织中STAT5蛋白表达水平明显高于正常组织 (P <0 .0 5 ) ,平均为正常组织的 1 .6 1倍 ;STAT5表达水平与乳腺癌分化程度及临床分期有关 (P <0 .0 5 ) ;STAT5表达水平与肿瘤大小、年龄无关 (P >0 .0 5 )。结论 :STAT5的过表达可能在乳腺癌的发生、发展过程中起重要作用。