苏云金芽孢杆菌的特异性结合蛋白研究

用3 2 P分别标记 3 0 8bpcry1A上游和 65 0bpcry1C上游片段 ,并将标记后的DNA与不同苏云金芽孢杆菌菌株的细胞粗蛋白进行凝胶阻滞反应。结果表明 ,cry1A和cry1C上游均能被苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种 (Bacillusthuringinensis subsp .kurstaki)的细胞粗蛋白特异性结合 ,而同一cry1基因上游序列可被不同多肽特异或非特异性竞争结合 ,不同的cry1基因上游序列也能同时被一种蛋白结合。说明苏云金芽孢杆菌某些特异细胞蛋白参与了cry1基因上游序列的转录调控作用 ,而不同的调节因子可能会竞争同一结合位点。库斯塔克亚种和鲇泽亚种 (B .thuringinensis subsp .aizawai)所含特异细胞蛋白在种类和作用上都有差异。

碳源对苏云金芽胞杆菌融合基因cry1D-lacZ表达的影响

本研究检测了在不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中不同碳源对杀虫晶体蛋白cry1D -lacZ融合基因表达的影响。研究表明 ,cry1D -lacZ在同一菌株中的表达因碳源不同而异 ,在碳源相同的条件下不同菌株的表达也不相同 ,而衍生菌株HD - 133- 5的代谢途径非常特殊。琥珀酸钠作碳源时导致芽胞形成提前 ,cry1D -lacZ融合基因表达也随之提前。而以乙酸钠作碳源时 ,在不同亚种的菌株中都能高水平、持续稳定地表达。

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种HD-133 cry1D和cry1 Ab mRNA含量及稳定性研究

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种菌株HD 1 3 3含有代表性的三种cry1类基因cry1Ab,cry1C和cry1D ,它们的表达量却明显不同。通过Northern杂交检测了菌株HD 1 3 3中基因cry1D和cry1Ab的mRNA含量及其稳定性。结果表明 :基因cry1DmRNA的形成比基因cry1Ab的mR NA滞后 3h ,且基因cry1D形成mRNA的量很低 ,产生过程很平稳 ,在芽胞形成中期比cry1AbmRNA低 3 7倍 ;cry1AbmRNA含量在芽胞形成前期高于后期 ,在后期仍能大量持续稳定地转录。cry1DmRNA的半衰期为 1 8min,而cry1AbmRNA的半衰期为 1 4min。尽管cry1DmRNA比cry1AbmRNA的半衰期更长 。

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种HD-133 cry1D的表达调控

利用PCR扩增基因cry1D启动子及上游区片段 ,在测序的基础上构建含cry1D lacZ融合基因穿梭质粒 ,导入不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中 ,并以cry1Ab lacZ融合基因为对照测定 β 半乳糖苷酶活性 ,检测启动子上游区的作用。结果表明 ,cry1D lacZ和cry1Ab lacZ融合基因在不同遗传背景的菌株中表达完全不同 ,也许一些宿主专一性的因子参与了转录调控 ;而在同一菌株中Ccry1D lacZ和cry1Ab lacZ的表达差异是由于上游区的不同以及竞争有限的σ因子所致。利用PCR定点诱变技术突变其SD序列GGGGA为GGAGG后 ,cry1D lacZ融合基因的表达提高了 1 0～ 1 6倍。表明GGAGG是苏云金芽胞杆菌合适的SD序列 。