SV40诱导髁突软骨细胞永生化的实验研究

目的 建立髁突软骨细胞的永生化细胞系。方法 构建含有SV40大T抗原基因和neo抗性基因的逆转录病毒载体pLN/SV40 ,用常规脂质体转染的方法将目的基因导入包装细胞PA317,G418筛选出阳性克隆后 ,收集其病毒上清感染原代培养的新西兰白兔髁突软骨细胞 (mandibularcondylarchondrocyte ,MCC) ,G418筛选阳性克隆并挑选单克隆。设计大T抗原基因的特异性引物 ,用PCR检测不同克隆株对目的基因的整合。对所挑选的阳性克隆株进行扩增培养及常规的冻存复苏 ,比较其与MCC在形态增殖等方面特征。结果 10个阳性克隆株成功扩增出了 1196bp的基因片断 ,有 5株细胞传代超过 30次 ,其中克隆株A2 1已在体外 1.5年稳定传代 10 0次以上 ,命名为永生化髁突软骨细胞 (immortalizedmandibularcondylarchondrocyte,IMCC)。IMCC和MCC的倍增时间分别是 30 86h和 78 95h。IMCC的形态以多角形为主 ,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论 已建立了 1株永生化的髁突软骨细胞系。