缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子干扰性RNA抑制鼠视网膜新生血管的研究

目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）小片段干扰性RNA（siRNA）对小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法本研究采用随机对照方法。构建HIF-1α siRNA重组质粒。C57BL／6J小鼠玻璃体腔注射增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达质粒pEGFP-N1，1d后视网膜铺片观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达。选7天龄C57BL／6J小鼠90只，17只为正常组，73只建立氧诱导的视网膜新生血管模型，分为模型对照组、空载体组和基因治疗组（HIF1α siRNA组、VEGF siRNA组及共转染组）。于出氧舱前1d，向空载体组小鼠玻璃体腔注射空载体质粒；HIF—1α siRNA组注射HIF—1α siRNA，VEGF siRNA组注射VEGF165 siRNA，共转染组注射HIF1α siRNA＋VEGF165 siRNA。采用荧光造影视网膜铺片方法观察血管形态变化；制作组织切片计算突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数；采用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测视网膜HIF—1α和VEGF的表达。采用单因素方差分析和组间最小显著差法进行统计学分析。结果pEGFP-N1经脂质体LF2000介导转染视网膜细胞后1d即可见GFP表达。基因治疗组较模型对照组新生血管丛明显减少，荧光渗漏明显减轻，其中共转染组效果最明显。基因治疗组[HIF-1α siRNA组为（27．73±2．33）个，VEGF siRNA组为（15．43±3．23）个，共转染组为（8．70±2．88）个]较其他3组突破视网膜内界膜的细胞核数量减少，差异均具有统计学意义（F=3016．527，P〈0．01）。视网膜HIF-1α mRNA及蛋白表达水平：模型对照组（1．08±0．06，0．383±0．009）和空载体组（1．09±0．05，0．386±0．010）较正常组（0．81±0．07，0．035±0．003）上调，而HIF-1α siRNA组（0．46±0．06，0．182±0．008）较模型对照组下调，抑制效率分别为57．4％和52．5％，差异均有统计学意义（F=139．804，2686．001；P〈0．01）。VEGF mRNA及蛋白表达水平：模型对照组（1．53±0．07，0．340±0．004）和空载体组（1．59±0．06，0．337±0．009）较正常组（0．27±0．08，0．051±0．008）明显上调，而基因治疗组较模型对照组明显下调，差异均有统计学意义（F=421．423，2513．583；P〈0．01），其中共转染组下调最明显，抑制效率分别为85．6％和80．9％。结论HIF-1α siRNA和VEGF165 siRNA均可有效抑制小鼠视网膜新生血管形成，两种siRNA共转染抑制效果最明显。