醛固酮可通过钠氢交换子1诱导肾小球系膜细胞外基质增生

目的探讨醛固酮能否在肾小球系膜细胞(GMC)激活钠氢交换子1(NHE1),以及能否通过NHE1诱导GMC细胞外基质增生。方法体外培养大鼠GMC,并按如下分组:对照组(Con,普通培养液);醛固酮组(Aldo,10-7mol／L);醛固酮+安体舒通组(Aldo+Spir 10-9 mol／L);醛固酮+NHE1抑制剂DMA组(Aldo+DMA 25μmol／L)。24 h后收集培养上清液和各组细胞,抽提总RNA。用酸负荷后钠依赖的pHi(细胞内pH值)的变化来检测NHE1活性,同时采用实时PCR以及流式细胞术检测NHE1基因和蛋白的表达。采用实时PCR和ELISA方法检测纤连蛋白(FN)基因和蛋白的表达。结果与对照组比较,Aldo组肾小球系膜细胞NHE1的活性(△pHi／100S)显著增高[Con(4．48±0．25)％,Aldo(5．29±0．11)％,P<0．05]。加入安体舒通和DMA后,上述NHE1活性均有所降低[Aldo+Spir(4．92±0．35)％,Aldo+DMA(4．07±0．23)％,与Aldo组比较,P<0．05]。实时PCR结果显示Aldo组NHE1 mRNA水平有所增高,是对照组的1．16倍(P<0．05),而Aldo+Spir组NHE1 mRNA水平明显下降,是Aldo组的81．9％(P<0．05)。流式细胞术结果显示Aldo组NHE1蛋白水平显著增高,是对照组的2．9倍(P<0．01),而Aldo+Spir组NHE1蛋白水平明显下降,仅为Aldo组的52．3％(P<0．05),安体舒通本身对NHE1的基因和蛋白表达没有显著影响。实时PCR结果显示Aldo组FN mRNA水平有所增高,是对照组的1．03倍(P<0．05); Aldo+Spir组和Aldo+DMA组FN mRNA水平有所下降,分别是Aldo组的91．21％(P<0．01)和92．30％(P<0．01)。ELISA结果显示培养上清液中分泌的FN(ng／ml)也表现为相同的趋势[Con(17．84±3．77),Aldo(51．66±1．40),P<0．01;Aldo+Spir(29．60±1．99),Aldo+DMA(25．75±4．66),与Aldo组比较,P<0．01]。结论醛固酮能够刺激肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分FN,其作用可能是由于醛固酮激活系膜细胞NHE1活性、上调其基因和蛋白表达所致。