微生物学检验教学中的综合素养培育探讨

微生物学检验作为一门医学检验技术专业的重要核心课程,在培养高素质强技能的技术技能型医检人才中具有重要作用。宁波卫生职业技术学院专业教师在教学实践中不仅注重知识与技能的传授,更注重将道德准则和行为规范、生物安全、沟通能力、劳动素养、发现及解决问题的能力、责任与担当等元素融入教学,积极培育该专业学生的综合素养,努力引导学生成为全面发展的医学检验技术专业人员。

过硫酸氢钾复合物粉对4种常见水产病原微生物的杀灭效果

为验证过硫酸氢钾复合物粉在水产养殖中消毒的有效性,评价了其对草鱼(Ctenopharyngodon idella)呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)、斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)病毒(Channel catfish virus,CCV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)4种水产常见致病病原的杀灭效果,和有机物、温度、pH 3种因素对杀菌效果的影响,并在此基础上开展了过硫酸氢钾复合物粉对池塘养殖水体中目标菌的杀灭试验,和对患嗜水气单胞菌的病鲫(Carassius auratus)的药效试验。结果显示,过硫酸氢钾复合物粉对4种致病微生物均具有显著的杀灭效果。降低菌悬液中有机物浓度、适当提高作用温度或适当降低消毒液pH,均能促进过硫酸氢钾复合物粉消毒液的杀菌效果。通过目标菌的杀灭试验和药效试验,进一步确定了该消毒剂在实际使用中对目标菌杀灭的有效性和对鲫感染嗜水气单胞菌后的显著治疗效果。研究表明,过硫酸氢钾复合物粉是潜在的水产用消毒剂。

模拟医院教学模式在微生物学检验教学中的应用探讨

为解决微生物学的教学存在的实际问题,我校对接国家与行业标准,对医学检验专业的学生采用模拟医院授课方式。学生根据案例扮演病人,演绎病情,并在具有临床经验的教师的指导下针对案例进行分组讨论,最后完成样本检验。座谈会与调查问卷结果显示,模拟医院教学方法可以明显提高学生的学习热情,提高学生的自学能力和临床检验综合技能,同时提升教师的教学能力。模拟医院教学模式可以提高微生物学检验的教学效果,并为学生的实习打下坚实的基础。

牛蛙的人工繁殖及蝌蚪培育技术

牛蛙(Rana catesbiana)属脊索动物门、脊椎动物亚门、两栖纲、无尾目、蛙科、蛙属,原产于北美洲地区,以其体型大,繁殖力高,生长速度快,出肉率高,环境适应能力强,已遍及世界各大洲,成为食用蛙中的主要养殖种类。其肉质鲜嫩爽口,必需氨基酸及不饱和脂肪酸含量高且脂质含量较低,营养价值高,便于加工和运输,深受消费者喜爱。其中,牛蛙皮富含一种生物活性肽,是新型抗菌肽开发的优质原料;牛蛙脂肪储备量大,其脂肪可通过生物技术处理生成一种天然油脂,因其具有优秀的热稳定性和氧化稳定性,在营养食品及制药市场上有很大的潜力。

标准成本法在企业中的应用研究

文章以A生物科技股份有限公司为例,探讨了其“分阶段,试点先行;分步骤、明分工,稳步推进”的成本控制思路,结合目标成本,各部门协同制定产品标准成本、搭建标准成本管理数字平台、建立标准成本考核体系,从而改善了业务、财务基础管理水平,实现了基于业财融合的全员成本精细化管理。

鱼-蚌生态养殖模式中浮游植物群落特征及水质评价

三角帆蚌隶属于双壳纲、蚌科、帆蚌属,为双壳类软体动物,俗称珍珠蚌、淡水珍珠蚌、河蚌或三角蚌。三角帆蚌主要分布于我国河北、山东、安徽、江苏、浙江、江西等省的河流和湖泊中,尤其以中、大型湖泊分布最为广泛,是我国最主要的育珠蚌。三角帆蚌通常栖息于水体底部,通过滤食浮游生物和水体中的有机碎屑来获取营养。

1株克氏原螯虾肺炎克雷伯菌的分离鉴定及药物敏感性分析

从湖北潜江患病克氏原螯虾肝胰腺内分离到1株致病菌,经过生理生化特征测定、16S rRNA序列分析和进化树构建对该菌株进行鉴定,并通过琼脂扩散法检测该分离株的药物敏感性,通过肉汤微量稀释法测定抗菌药物的最小抑菌浓度。结果发现,该菌株具有与肺炎克雷伯菌一致的生理生化特征,16S rRNA测序和进化树分析发现该分离株与肺炎克雷伯菌的基因相似度达到99%以上,因此将该菌株鉴定为肺炎克雷伯菌。通过药敏试验发现,该菌株仅对头孢噻肟和多粘菌素B敏感,为多重耐药菌株。

1株克氏原螯虾摩氏摩根菌的分离鉴定及联合药敏试验

从患病克氏原螯虾肝胰腺内分离到1株病原菌,通过对其生理生化特征鉴定、16S rRNA序列分析和进化树构建对分离株进行了鉴定;测定了分离株对20种抗菌药物的敏感性及抗菌药物与天然化合物联用后的协同抑菌作用。结果发现,该菌株的生理生化特征与摩氏摩根菌基本一致,进一步通过测序和进化树分析发现该菌株与摩氏摩根菌的基因相似度达到99%以上,因此该菌株鉴定为摩氏摩根菌。药敏试验发现该菌株对恩诺沙星、氟苯尼考和新霉素等7种药物高度敏感,对卡那霉素中等敏感,对多西环素、链霉素和四环素等12种药物耐药。此外,联合抑菌试验发现多西环素与二氢辣椒碱联用后具有协同抑菌作用。以上研究表明,本次从克氏原螯虾肝胰腺中分离的细菌为耐药性摩氏摩根菌,可选用氟苯尼考、恩诺沙星、新霉素或二氢辣椒碱和多西环素的复方制剂进行治疗。

一株克氏原螯虾雷氏普罗威登斯菌的分离鉴定与联合药敏试验

为了探明克氏原螯虾(Procambarus clarkii)5—6月死亡的病因并制定相应的治疗方案,本试验从患病克氏原螯虾肝胰腺中分离到1株病原菌(L20190509),通过生理生化特征、16S rRNA序列分析和进化树进行鉴定,通过琼脂扩散法测定了该菌株的药物敏感性,进一步研究了抗菌药物与天然化合物的联合抑菌作用。结果发现,该菌株对克氏原螯虾的半数致死浓度为9.27×10^(4)CFU·mL^(-1),其生理生化特征与雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)一致,16S rRNA测序和进化树分析发现,分离株与雷氏普罗威登斯菌的亲缘关系最近,综合以上结果将该菌株鉴定为雷氏普罗威登斯菌。进一步通过药敏试验发现该菌株对20种受试药物中的亚胺培南、头孢噻肟、恩诺沙星3种药物敏感,对氟苯尼考和多西环素2种药物中度敏感,对其他受试药物均不敏感。此外,联合抑菌试验发现氟苯尼考与厚朴酚联用具有协同抑菌作用。以上研究发现,分离株L20190509是一株能导致克氏原螯虾发病的病原菌,具有多重耐药性,研究结果有助于进一步了解克氏原螯虾“五月瘟”的病因,并制定科学有效的治疗方案。

鹅细小病毒VP3基因和鹅副黏病毒F基因在重组禽痘病毒中联合表达

将重组转移载体质粒pSY681-VP3-F-LacZ与脂质体转染禽痘病毒感染的CEF细胞,通过五轮蓝斑筛选,获得纯化的重组病毒rFPV-VP3-F。经PCR检测,表明GPV-VP3基因和GPMV-F基因已重组到特异性禽痘病毒基因组中;Dot-ELISA和间接免疫荧光试验,证明VP3蛋白和F蛋白在重组病毒感染的CEF细胞中获得有效表达并且两种蛋白都保持其反应原性。

恩诺沙星乳在罗非鱼体内的药代动力学及组织分布

为研究恩诺沙星乳新剂型及其去乙基代谢产物环丙沙星在罗非鱼(Oreochroms mossambcus)血浆中的药代动力学及分布,在(30±1)℃养殖水温下,对罗非鱼单次口灌10 mg/kg恩诺沙星乳,在0.5、1、2、4、6、8、12、18、24、48、72、96、120、144、168 h取样,样品处理后以超高效液相色谱荧光检测器检测。研究显示:恩诺沙星在罗非鱼血浆中的达峰时间(T_(max))为2 h,峰浓度(C_(max))为4.38 mg/L;环丙沙星在罗非鱼血浆中的T_(max)为8 h,C_(max)为0.1 mg/L;恩诺沙星在罗非鱼肝、脑、肌肉、肾中的T_(max)分别为1、2、4和6 h,C_(max)分别为12.37、4.31、6.22和7.82 mg/kg,消除方程分别为C=3.96e^(-0.0232t)、C=7.52e^(-0.0253t)、C=6.04e^(-0.015t)、C=2.73e^(-0.0205t);环丙沙星在罗非鱼肝、肌肉、肾中的T_(max)分别为4、6和6 h,C_(max)分别为0.39、0.15和0.23 mg/kg,消除方程分别为C=0.11e^(-0.0186t)、C=0.29e^(-0.0184t)、C=0.17e^(-0.0132t)。结果表明,恩诺沙星乳在罗非鱼体内吸收迅速,大部分以恩诺沙星原药代谢出体外,仅有3.22%~6.03%恩诺沙星被代谢成环丙沙星,虽然环丙沙星含量低但在罗非鱼体内比恩诺沙星更难消除;建议罗非鱼以10 mg/kg口灌恩诺沙星乳用于疾病的防治。

饲料中添加玛卡对草鱼生长性能和免疫功能的影响

本试验旨在探究饲料中添加玛卡对草鱼生长性能和免疫功能的影响。选取体重为(9.0±0.4)g的健康草鱼,驯化暂养2周后随机分为5组,每组3个重复,每个重复60尾。5组草鱼分别饲喂基础饲料中添加0(对照组)、0.2、1.0、5.0和10.0g/kg玛卡粉末的试验饲料,连续投喂8周后对草鱼的生长性能、免疫功能相关指标进行测定。饲养试验结束后,对各组草鱼进行胁迫试验和攻毒试验,对胁迫环境和疾病感染应激情况下草鱼的存活率进行测定。结果显示:与对照组相比,饲料中添加不同水平的玛卡可不同程度地降低草鱼的饲料系数,提高草鱼的终末体重、增重率、摄食量及内脏器官指数。其中,5.0 g/kg组的作用效果最佳,其终末体重、增重率、饲料系数以及脾脏指数、头肾指数和性腺指数与对照组的差异均达到显著水平(P<0.05);此外,与对照组相比,饲料中添加5.0g/kg玛卡显著提高了整个试验期内草鱼血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶活性以及白蛋白、总蛋白、补体3和免疫球蛋白M的含量(P<0.05),显著提高了草鱼在亚硝态氮胁迫和假单胞菌感染应激情况下的存活率(P<0.05)。以上结果表明,在饲料中添加适宜水平的玛卡可提高草鱼的生长性能和免疫功能,增强草鱼在胁迫环境和疾病感染应激情况下的抵抗力。综合分析,草鱼饲料中玛卡的添加量以5.0g/kg为宜。

克氏原螯虾肝胰腺损伤模型的建立

为建立高效氯氰菊酯诱导的克氏原螯虾(Procambarus clarkia)肝胰腺损伤模型。分别设置0.005、0.01和0.02μg/L三个浓度高效氯氰菊酯溶液组确定最佳建模浓度,将克氏原螯虾暴露其中,于0.5、1和2 d采样检测相关指标;0.02μg/L高效氯氰菊酯溶液组,在0.5、1、2、3、5、7、14 d分别采集血清检测相关指标确定最适建模天数,并采集肝胰腺进行氧化物、抗氧化物活性检测和病理切片观察。浓度确定试验中,0.02μg/L实验组ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)活性与对照组相比均明显显著升高;天数确定试验中,第3天时实验组ALT、AST活性均显著升高,血清生化指标TP(血清总蛋白)与肝胰腺抗氧化酶SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化氢酶)和氧化产物MDA(丙二醛)与对照相比有显著差异。血清ALP(碱性磷酸酶)和GLU(血糖)未表现出显著差异。病理切片结果显示药物给药3 d后,肝胰腺出现较明显炎症反应。结果表明,0.02μg/L浓度高效氯氰菊酯,给药3 d可以建立克氏原螯虾肝胰腺损伤模型;血清生化指标ALT、AST、TP与肝胰腺抗氧化酶SOD、CAT和氧化产物MDA可作为肝胰腺损伤模型损伤程度判断指标,ALP和GLU不适合作为判断指标。

稻虾综合种养模式下吡虫啉的富集与残留消除

为评价吡虫啉对克氏原螯虾的安全性,采用吡虫啉0.2 mg/L的剂量,对克氏原螯虾进行了室内暴露试验和田间残留消除试验,分别采集克氏原鳌虾、稻田底泥和田水样品,研究稻虾综合种养模式下吡虫啉的富集和残留消除情况。结果发现,室内暴露条件下吡虫啉在克氏原鳌虾体内的累积量大小依次为鳃组织>肌肉>血淋巴>肠道>肝胰脏。田间残留试验中吡虫啉在克氏原鳌虾体内的累积量表现为肌肉>肠道>鳃组织>血淋巴>肝胰脏,同时发现,田间试验下施药后28 d,吡虫啉在克氏原鳌虾肌肉组织中的残留量为20.44μg/kg,吡虫啉在稻田水中降解率为97.54%,在底泥中的残留量为10.94μg/kg。为避免对非靶标生物克氏原螯虾产生危害,建议适当延长吡虫啉在稻田中的施药间隔期,在靠近养殖水体的稻田尤其是在稻虾综合种养模式下应谨慎施药或建议使用其他替代药物。

超高压前处理对虾仁冻藏期品质的影响

为研究超高压辅助脱壳所得到的中华管鞭虾虾仁在冻藏期的品质变化,以虾仁色泽、质构、肌原纤维蛋白相对含量、表面疏水性、总巯基相对含量和Ca^(2+)-ATPase活性为指标,探讨超高压前处理对虾仁品质的影响。结果表明,冻藏6个月后虾仁L~*值、a~*值和b~*值均有所变化,与对照组相比,超高压前处理对虾仁L~*值的影响不显著,但能延缓冻藏后期a~*值的增加,对保持虾肉色泽的稳定有一定作用;超高压前处理对虾仁的咀嚼性和弹性影响不显著,但能增加虾仁的硬度。超高压前处理使冻藏初期虾仁肌原纤维蛋白的表面疏水性增加,而对其溶解性、巯基含量及Ca^(2+)-ATPase活性的影响不显著;冻藏后期由于虾仁蛋白冷冻变性,致使肌原纤维蛋白溶解性、巯基含量及Ca^(2+)-ATPase活性下降。综上所述,超高压辅助脱壳在一定程度上有利于保持冻虾仁的色泽和硬度。本研究结果为利用超高压技术辅助脱除中华管鞭虾虾壳,生产冷冻虾仁提供了新思路。

低鱼粉饲料中黑水虻幼虫粉替代鱼粉对合方鲫生长性能、消化能力、血浆生化指标及相关基因表达的影响

实验以合方鲫2号幼鱼(31.50±0.50)g为实验对象,研究黑水虻幼虫粉(HM)替代饲料鱼粉(0、20%、40%、60%和80%)对合方鲫生长性能、饲料利用、消化能力、血浆生化指标及相关基因表达的影响。实验设计5组等氮(30%)等能(18.50 MJ/kg)等脂(6%)饲料,每组3次重复,每个重复25尾鱼,养殖时间74d。结果表明:增重率和特定生长率随饲料HM含量的升高呈现先升高后降低趋势,且在替代水平为20%时最大;饲料系数呈先降低后升高的趋势,20%替代组显著小于60%和80%替代组(P<0.05)。肥满度和脏体比均呈现先升高后降低趋势,且均在40%替代组最大;80%替代组肝体比显著高于0、20%和60%替代组(P<0.05),但与40%替代组无显著差异。全鱼水分和灰分无显著变化;20%和60%替代组粗蛋白显著低于0组(P<0.05);粗脂肪呈先升高后降低的变化趋势,在20%替代组达到最大值。血浆葡萄糖、总胆固醇含量及谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性无显著差异;血氨含量呈上升趋势,80%替代组显著高于0组;20%替代组血浆总氨基酸含量显著高于其他各处理组(P<0.05);60%和80%替代组血浆丙二醛含量显著低于20%替代组(P<0.05)。20%替代组肠道中lat2、pept1和cdx2基因的表达量均高于其他各处理组,asct2基因表达水平则在替代水平为40%时最大;肝脏中tor和igf1基因表达量均在40%替代组最大,gh和ghr基因表达水平则均在替代水平为60%时最高。黑水虻幼虫粉替代饲料中鱼粉的0—40%不影响合方鲫的生长,且在20%替代水平时可获得最大生长速率。

克氏原螯虾源普通变形杆菌分离、鉴定及联合药敏试验

本研究对患病克氏原螯虾(Procambarus clarkia)进行病原菌分离、鉴定及联合药敏试验。从患病克氏原螯虾的肝胰腺中分离出一株优势菌(QJ201905007),经形态学观察、生理生化特性分析、16S rRNA基因测序和构建进化树对该菌株进行了鉴定,并测定该菌株对抗菌药物的药敏性及化学抗菌药物和天然化合物的协同抑菌作用。结果显示:该分离菌生理生化特征符合普通变形杆菌(Proteus vulgaris)的特征,分子鉴定结果和进化树分析与普通变形杆菌的亲缘关系较近,由此可判定该病原菌为普通变形杆菌。回归试验发现,分离的菌株对克氏原螯虾具有致病力,半致死剂量为5.04×106CFU/mL。药敏结果显示,该菌株对亚胺培南、头孢噻肟、恩诺沙星和头孢吡肟敏感,对氟苯尼考、青霉素和丁胺卡那等耐药;联合抑菌试验发现,氟苯尼考与白藜芦醇联用可在体外协同抑制该菌株的生长。以上研究表明,普通变形杆菌是克氏原螯虾的病原菌,在保证小龙虾食用安全的前提下,可使用恩诺沙星治疗,或通过氟苯尼考与白藜芦醇联用提高氟苯尼考的敏感性。

乙肝表面抗原在酿酒酵母中的异源表达

乙肝表面抗原HBs Ag是乙肝疫苗的主要组分。从转录水平、翻译水平以及翻译后水平对其进行优化,实现了HBs Ag在重组酿酒酵母中的高效异源表达。与组成型启动子TEF1、TDH3、HXT7、ADH1相比,诱导型启动子GAL1可大幅度提高HBs Ag的表达;与GCCACC和AAAAAA相比,kozak序列TACACA最有利于HBs Ag的翻译表达;而共表达二硫键异构酶pdi对HBs Ag的活性表达具有显著的促进作用。通过3种水平的优化,HBs Ag活性从最初的8.87 IU/g提高至151.08 IU/g;最终,利用Ni柱亲和层析成功获得纯化的HBs Ag,活性为3.32 IU/m L。

临床实验室质量管理的体会

近年来随着实验诊断技术的不断提高和检测水平的发展,临床检验质量越来越受到各方面的关注和重视。检验结果的准确与否直接关系到广大群众和患者的利益。由于检验结果差错引起不必要的治疗或者得不到及时诊断,延误患者治疗的事件不时发生，给患者带来不必要的损失。

宁波市镇海区成年女性人乳头瘤病毒感染状况及流行病学调查

我国每年新发宫颈癌病例13．15万人，占世界宫颈癌新发病例的1／4。大量流行病学和分子生物学的研究已经证实，人乳头瘤病毒（humanpapillomaviru8，HPV）与宫颈癌的发生密切相关，尤其是高危型HPV。近年来，宫颈癌的发病率持续上升并呈年轻化趋势。为了解本地区女性HPV感染状况及基因分布情况，对近4年本地区780例门诊和住院患者进行调查，现将结果报告如下。