血清伏立康唑候选参考方法的建立和性能评价

目的基于同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)技术建立检测血清伏立康唑的候选参考方法。方法以甲醇为沉淀剂,采用蛋白沉淀法(PPT)对样本进行前处理。以伏立康唑-2H3为内标,建立基于ID-LC-MS/MS的血清伏立康唑候选参考方法。评估所建立方法的线性、定量限(LOQ)、检测限(LOD)、准确度、精密度、基质效应、稳定性。结果ID-LC-MS/MS测定血清伏立康唑的线性范围为0.2~16.0μg·mL^(-1),定量限为0.08μg·mL^(-1),检测限为0.016μg·mL^(-1)。加标回收率为97.26%~98.48%。批内变异系数(CV)<1%,批间CV<2%。相对基质效应为-1.87%~0.33%。样本分别经室温[(23±2)℃]放置4、8 h和-20℃反复冻融5次,经前处理后的样本在室温和自动进样器(8℃)分别放置4、8、12、24 h,回收率为95.63%~99.50%,检测结果稳定。相对扩展不确定度≤3.34%。结论建立了基于ID-LC-MS/MS的血清伏立康唑候选参考方法,可用于该项目的检测标准化。

基于IFCC参考测量程序实现常规检测系统量值溯源的可行性探索

目的探讨基于国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考测量程序对常规检测系统实现量值溯源的可行性分析。方法以乳酸脱氢酶(LDH)为例,采用IFCC参考测量程序和常规检测系统(以下简称A法)同时测定20份不同浓度冷冻人混合血清样本。按《临床检验质量管理技术基础》中判定依据和偏移图分析法进行评价常规检测系统测量结果的正确度,对存在系统偏移的常规方法通过回归分析进行厂家校准品认定值校正,并测定20份不同浓度的新鲜单人份血清验证校正后该方法(以下简称B法)测量结果的正确性。结果 A法与IFCC参考测量程序测定结果的直线回归方程为Y=1.092X-4.529,平均偏移为7.24%,B法校准品校正值为174 U/L。经验证B法与IFCC参考测量程序测定结果的直线回归方程为Y=0.988X-0.470,平均偏移降为-1.37%。结论 A法测量结果明显偏高于参考测量程序测量结果,经校正建立的B法与参考测量程序测定结果一致。

全血免疫抑制剂ID-LC-MS/MS候选参考方法的建立和性能评价

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)检测全血免疫抑制剂(他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A)的候选参考方法,并评价其性能。方法采用蛋白沉淀法(PPT)对全血样本进行前处理,采用ID-LC-MS/MS定量检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A。对建立的候选参考方法的分析性能(线性、定量限、基质效应、精密度和正确度等)进行评估。结果ID-LC-MS/MS检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A的总检测时间为4.5 min;环孢素A的线性范围为10~500 ng/mL,定量限为10 ng/mL;他克莫司、西罗莫司和依维莫司的线性范围均为1~50 ng/mL,定量限均为1 ng/mL。4种免疫抑制剂的相对基质效应范围均≤8.64%,批内、批间变异系数(CV)均≤5%,加标回收率为98.84%~100.99%。他克莫司的扩展测量不确定度≤7.91%(k=2)、西罗莫司≤7.97%(k=2),依维莫司≤7.14%(k=2),环孢素A≤7.91%(k=2)。结论成功建立了ID-LC-MS/MS检测全血他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A的候选参考方法,可用于相关项目的量值溯源和标准化。

离子色谱法测定血清锂离子候选参考方法的建立及性能评估

目的：以离子色谱法为基础，建立血清总锂离子测定的候选参考方法并评价其性能。方法采用一种简单的样本前处理方法，用新鲜患者血清样本、IFCC-RELA 样本等对方法的精密度进行评估；用加标回收实验评价方法的准确性。结果锂离子标准曲线线性方程为：Y ＝0．8171X -0．0013，r^2＝0．99995，方法的检出限为6μg/L；测量血清样本的不精密度（CV）小于1．0％；样本的加标回收率在99％～101％之间。结论成功建立了血清锂候选参考方法，可用于血清锂离子项目的量值溯源和标准化，为血清锂常规检测系统向参考方法/参考物质溯源提供了有效途径。

血清总胆红素参考方法的建立及其不确定度评估

目的建立血清总胆红素(T-BIL)参考方法,评价其性能,并评估其测量结果不确定度。方法根据国际医学检验溯源联合委员会(JCTLM)公布的相关文献建立参考实验室内部的血清总胆红素参考方法,对方法的线性、精密度和准确度进行评估,测量结果不确定度参照GUM文件进行评估。结果总胆红素标准曲线线性方程为:Y=0.007 50 X-0.003 08,R2=0.9999,线性范围0～200mg/L;测量血清样本的相对标准偏差(CV)小于1.0%;测量IFCC-RELA样本,结果在等效范围内,相对标准不确定度[urep(c)]小于2.0%。结论成功建立了血清总胆红素参考方法,可用于血清总胆红素项目的量值溯源和标准化,为血清总胆红素常规检测系统向参考方法/参考物质溯源提供有效途径。

尿素、尿酸和总蛋白复合冰冻人血清国家标准品的研制

目的研制尿素、尿酸和总蛋白复合冰冻人血清国家标准品,用于校准和评价常规方法,促进尿素、尿酸和总蛋白测定的标准化。方法收集含不同浓度尿素、尿酸和总蛋白的血清(无溶血、脂血和黄疸)样本,过滤除菌后分装,于-70℃保存。采用单因素方差分析评价候选品的均匀性。通过线性回归方差分析进行稳定性研究。采用参考方法或经验证的方法定值,计算不确定度。对候选品及25份新鲜血清样本在参考方法(或经验证的方法)及3个常规检测系统间的互通性进行评估。结果候选品中尿素、尿酸和总蛋白均匀性检验F值分别为1.071 4、1.339 9和1.275 0,均<F0.05。在-20℃条件下,候选品中尿素、尿酸和总蛋白均至少可稳定37 d;在2~8℃条件下,尿素可稳定27 d,尿酸及总蛋白至少可稳定37 d;在20~25℃条件下,尿素仅能稳定3 d,尿酸可稳定8 d,总蛋白可稳定27 d。定值结果分别为:尿素(5.68±0.17)mmol/L(k=2)、尿酸(288.68±3.96)μmol/L(k=2)、总蛋白(67.03±3.46)g/L(k=2)。尿素、尿酸和总蛋白浓度全部在25份血清样本的回归直线95%可信区间范围内。结论研制的尿素、尿酸和总蛋白复合冰冻人血清国家标准品候选品均匀性、稳定性、互通性良好,定值准确、可靠。

MS/MS技术在新生儿氨基酸、有机酸及脂肪酸氧化代谢障碍性疾病筛查中的应用共识

串联质谱(MS/MS)技术因其高通量、样本用量少、分析速度快、敏感性高、结果可靠等优点,被广泛用于生物、医药、食品、临床、环境等领域。采用MS/MS技术筛查新生儿遗传代谢病,不仅扩大了筛查疾病的种类,还提高了筛查效率。中国医师协会检验医师分会临床质谱检验医学专业委员会结合目前已公布的MS/MS技术相关指南、文献及实际操作经验撰写的“MS/MS技术在新生儿氨基酸、有机酸及脂肪酸氧化代谢障碍性疾病筛查中的应用共识”,系统介绍了MS/MS技术在新生儿遗传代谢病筛查中的关键流程以及方法验证的关键因素,旨在协助新生儿疾病筛查相关实验人员使用MS/MS技术检测新生儿滤纸干血片(DBS)中氨基酸、游离肉碱及酰基肉碱含量,为筛查新生儿氨基酸、有机酸及脂肪酸氧化代谢障碍性疾病提供实验室依据。

质谱技术在临床微量元素检测中的应用共识

用于临床微量元素检测的质谱技术涉及多种质谱类型。按离子源分类,可分为辉光放电质谱、微波等离子体质谱和电感耦合等离子体质谱(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)。按质量分析器分类,可分为四极杆、扇形磁场和飞行时间等多种类型。目前,临床应用最广泛的是ICP-MS。ICPMS是一种将电感耦合等离子体的高温电离与四级杆的快速筛选扫描相结合而形成的检测元素和同位素的分析技术,具有敏感性高、动态线性范围宽、分析速度快、样本用量少等优点,可在短时间内准确检测样本中的多种元素。中国医师协会检验医师分会临床质谱检验医学专业委员会结合目前已公布的质谱技术标准、相关指南、文献及实际操作经验,制定本共识,重点阐述质谱技术在临床微量元素检测应用中对人员、环境、仪器、试剂、耗材、检测规程、方法性能评估及质量控制的要求,为临床实验室采用质谱技术开展微量元素检测提供基本指导。

基于离子色谱技术对血清氯离子常规系统的正确度评价

目的：以离子色谱法为比对方法，评价电极法和硫氰酸汞法测定血清氯离子的正确度。方法用离子色谱法测定2011～2013年的 RELA 样本，27份新鲜单份血清和校准品中的氯离子，同时采用电极法和硫氰酸汞法在自动生化分析仪上检测血清中氯离子和校准品中的氯离子，测定结果依据 EP9-A2文件进行方法学比对进行评价。结果电极法和硫氰酸汞法与离子色谱法比对的直线方程分别为Y ＝1.0181X ＋2.2780，Y ＝0.6793X ＋34.222平均偏移分别为4.05％和1.59％。结论离子色谱法能准确测定血清中氯离子的含量。依据 EP9-A2文件，电极法与离子色谱法的正确度性能一致，硫氰酸汞法与离子色谱法的正确度性能不一致。为保证临床样本的准确测量，各厂家和临床界都急需建立常规检测项目的测量正确度评价方法来评价常规测量系统的正确度。

Doumas参考方法对总胆红素常规检测系统的正确度评价

目的采用Doumas参考方法评价胆红素化学氧化法和重氮法检测血清总胆红素含量的正确度。方法采用Doumas参考方法测定IFCC-RELA样本及20份新鲜单人份血清样本中总胆红素;采用化学氧化法和重氮法在自动生化分析仪上测定20份新鲜血清及A、B校准品中的总胆红素,按EP9-A3文件对2种常规检测系统进行正确度评价;根据EP14-A2文件对A、B校准品进行互换性评价。结果重氮法和化学氧化法与Doumas方法正确度性能不一致。A校准品具有互换性,B校准品互换性不佳。结论 Doumas方法能准确测定血清样本中的总胆红素含量。为保证临床样本检测的准确性,有必要采用参考方法对常规方法进行正确度评价。