过表达驴小肽转运载体1 CHO细胞的构建

为了研究驴小肽转运载体1(oligopeptide transporter1,PepT1)的转运功能,试验取驴肝脏组织,对PepT1基因进行克隆构建了驴PepT1的表达载体pcDNA3.1-PepT1,并将其转染至中华仓鼠卵巢(CHO)细胞中,采用Western-blot方法检测转染效率,然后以未转染的CHO细胞作对照进一步检测转染后CHO细胞对β-丙氨酸-赖氨酸-N-7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸(β-Ala-Lys-AMCA)的摄取情况。结果表明:成功扩增出驴PepT1基因CDS序列,并构建了表达载体pcDNA3.1-PepT1;转染pcDNA3.1-PepT124 h后,在CHO细胞中检测到过表达的驴PepT1蛋白,且过表达驴PepT1蛋白的CHO细胞对β-Ala-Lys-AMCA的摄取量显著高于对照组(P<0.05)。说明成功构建了pcDNA3.1-PepT1表达载体并转染至CHO细胞中,实现了驴PepT1蛋白的瞬时过表达。