驴小肽转运载体1基因的克隆、序列分析及组织表达研究

小肽转运载体1(PepT1)在动物肠道小肽的摄取过程中发挥重要作用。本试验旨在研究驴(Equus asinus)PepT1(ePepT1)基因的分子克隆、序列分析和组织表达。提取驴肠道组织总RNA,PCR克隆ePepT1基因片段,测序验证并进行序列分析;采用实时荧光定量PCR(real⁃time qPCR)方法分别测定驴肾脏、脾脏、心脏、肝脏、肺脏、胃、十二指肠、空肠和回肠组织中ePepT1基因的相对表达量。结果表明:ePepT1开放阅读框为2124 bp,共编码707个氨基酸残基。蛋白质理化性质预测显示,ePepT1蛋白分子质量为78.6 ku,等电点为7.52,具有11个跨膜区(TMD),且TMD 9和TMD 10之间有1个大的细胞外环;ePepT1蛋白有5个胞外N-糖基化位点,5个胞外蛋白激酶C(PKC)作用位点和3个蛋白激酶A(PKA)作用位点。组织分布研究发现,ePepT1基因在各组织均有表达,但在肠道(十二指肠、空肠和回肠)中相对表达量最高。综上所述,本研究首次克隆了ePepT1基因,研究了其组织表达规律,为进一步研究驴肠道小肽吸收提供了基础。

驴营养需求与饲料研究进展

驴产业作为一个新兴产业,在乡村振兴经济发展中起到重要作用。国内外有学者针对驴的营养需求和饲料进行了相关研究,但仍有部分营养需求量数据处于空缺状态。文章主要对驴的养殖现状和驴对水、能量、蛋白质、氨基酸、脂肪、脂肪酸、矿物质和维生素的需求以及功能性饲料添加剂、粗精粮应用等方面进行综述,为驴高效饲养、配合饲料开发及其养殖业健康发展提供参考。

德州驴盲结肠食糜液中纤维降解酶活性与挥发性脂肪酸含量的比较分析

本试验旨在比较分析德州驴盲结肠食糜液中纤维降解酶活性以及挥发性脂肪酸(VFA)的含量。采集9头德州驴的盲肠、腹结肠和背结肠食糜液样品,经4层纱布过滤后,通过分光光度计法测定羧甲基纤维素酶(CMCase)、微晶纤维素酶(AVI)、木聚糖纤维素酶(Xlyse)、阿魏酸酯酶(FAE)和乙酰酯酶(AE)活性,此外,使用气相色谱法测定VFA含量,每个指标3个平行。结果表明:CMCase、AVI与Xlyse活性在驴盲肠、腹结肠和背结肠食糜液中依次增加(P<0.05),而FAE活性在驴盲结肠间无显著差异(P>0.05)。驴背结肠食糜液中AE活性显著高于盲肠与腹结肠(P<0.05)。乙酸摩尔比例在驴盲肠、腹结肠和背结肠食糜液中依次显著增加(P<0.05),丙酸摩尔比例依次降低(P<0.05)。而且驴结肠食糜液中支链VFA含量显著高于盲肠(P<0.05)。综上所述,本研究明确了驴盲结肠食糜液具有较高的催化水解饲料细胞壁半纤维素与木质素分子间酯键连接的FAE和AE活性,随着驴后肠段逐渐后移,驴盲肠、腹结肠与背结肠食糜液中乙酸摩尔比例依次增加,丙酸摩尔比例依次降低。

过表达驴小肽转运载体1 CHO细胞的构建

为了研究驴小肽转运载体1(oligopeptide transporter1,PepT1)的转运功能,试验取驴肝脏组织,对PepT1基因进行克隆构建了驴PepT1的表达载体pcDNA3.1-PepT1,并将其转染至中华仓鼠卵巢(CHO)细胞中,采用Western-blot方法检测转染效率,然后以未转染的CHO细胞作对照进一步检测转染后CHO细胞对β-丙氨酸-赖氨酸-N-7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸(β-Ala-Lys-AMCA)的摄取情况。结果表明:成功扩增出驴PepT1基因CDS序列,并构建了表达载体pcDNA3.1-PepT1;转染pcDNA3.1-PepT124 h后,在CHO细胞中检测到过表达的驴PepT1蛋白,且过表达驴PepT1蛋白的CHO细胞对β-Ala-Lys-AMCA的摄取量显著高于对照组(P<0.05)。说明成功构建了pcDNA3.1-PepT1表达载体并转染至CHO细胞中,实现了驴PepT1蛋白的瞬时过表达。