基于TCGA/GEO数据库对lncRNA在口腔鳞状细胞癌中甲基化水平及预后相关性的分析

目的:探讨lncRNA异常甲基化与口腔鳞状细胞癌预后的关系。方法:从TCGA和GEO数据库中获取口腔鳞状细胞癌甲基化数据及表达数据,采用R软件的CHAMP包对DNA甲基化芯片进行差异甲基化位点分析,R软件的DESeq2包对表达数据进行差异表达分析。利用GENCODE 28V探针进行甲基化注释,Cox回归分析及GSE52793芯片验证获得预后相关lncRNA。Kaplan-Meier生存分析、单因素和多因素分析、接受者工作特征曲线(Receiver Operation Characteristic,ROC)等评估影响预后的因素。结果:4种lncRNA SFTA1P,AL049775.2,KCNMB2-AS1和AL445250.1在口腔鳞状细胞癌中表现为高甲基化,生存分析显示,所有4种lncRNA在OSCC中均具有临床预后价值。结论:SFTA1P,AL049775.2,KCNMB2-AS1和AL445250.1的甲基化水平与口腔鳞状细胞癌预后有关。

磨牙根管治疗后Ⅰ类洞应用直接树脂充填的临床修复效果

目的回顾性分析针对磨牙根管治疗后Ⅰ类洞,直接实施树脂充填治疗的临床效果。方法回顾性分析磨牙根管治疗后Ⅰ类洞患者80例,根据修复方式的不同分成对照组和治疗组,接受常规冠或高嵌体修复的40例患者为对照组,接受树脂充填治疗的40例患者为治疗组。对比两组患者治疗总时间、椅旁时间、不良反应情况、治疗前后生活质量评分、口腔充填修复治疗效果、对治疗效果的满意度。结果治疗组患者口腔功能恢复正常、治疗总时间和椅旁时间均短于对照组(P<0.05);治疗组患者不良反应发生率为5.0%,低于对照组的22.5%(P<0.05);治疗组患者生活质量评分和口腔充填修复治疗总有效率略高于对照组(P>0.05);治疗组患者对治疗效果的满意度达到92.5%,高于对照组的75.0%(P<0.05)。结论针对磨牙根管治疗后Ⅰ类洞患者,直接实施树脂充填治疗,可减少不良反应,缩短治疗时间,大幅度提升患者满意度。

Caveolae/Caveolin-1与膜胆固醇共同调控小鼠BMSCs成骨分化

目的研究小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜上Caveolae/Caveolin-1与膜胆固醇(Chol)对BMSCs成骨分化的影响。方法体外培养BMSCs,未处理细胞作为对照,对细胞进行以下干预:用甲基-β-环糊精(MβCD)处理耗竭细胞膜Chol,添加Chol补充细胞膜Chol,转染非特异性小干扰siRNA(si Ctrl)和转染Caveolin-1 siRNA(si CAV-1)。通过Amplex Red法检测各处理组细胞的Chol含量;RT-PCR与Western blot检测各组Caveolin-1表达;碱性磷酸酶活性测定和茜素红染色观察成骨细胞形成情况。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果与对照相比,MβCD处理细胞后Chol含量[(59.33±11.24)比(127.00±12.45)mmol/L]、Caveolin-1 mRNA(0.52±0.05比1.00±0.15)下降,ALP活性[(18.37±0.31)比(10.13±0.41)U/L]增强,添加Chol后细胞Chol含量[(228.21±10.38)比(127.00±12.45)mmol/L]、Caveolin-1 mRNA(4.58±0.25比1.00±0.15)和Caveolin-1蛋白表达(184.00±10.25比51.25±8.12)增加,ALP活性[(6.32±0.54)比(10.13±0.41)U/L]减弱(P均<0.05)。与转染si Ctrl相比,转染si CAV-1的细胞Chol含量[(95.35±14.05)比(136.00±15.52)mmol/L]、Caveolin-1 mRNA(0.10±0.21比1.00±0.45)和Caveolin-1蛋白表达(6.12±0.35比13.06±1.52)下降,ALP活性[(19.28±0.34)比(10.15±0.43)U/L]增强(P均<0.05)。茜素红染色显示,MβCD处理和转染si CAV-1使BMSCs基质矿化增加,而添加Chol使BMSCs基质矿化减少。结论Caveolae/Caveolin-1与膜Chol相互影响并共同调控小鼠BMSCs成骨分化。

DEPTOR通过与ErbB2相互作用促进人牙周膜干细胞增殖和成骨分化

目的探讨含DEP结构域mTOR结合蛋白(DEPTOR)与人表皮生长因子受体2(ErbB2)的相互作用对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖和成骨分化能力的影响。方法收集联勤保障部队第九〇〇医院口腔科就诊的3例青少年患者正常人牙周膜组织,采用组织块培养方法分离hPDLSCs,并利用流式细胞术进行细胞鉴定。通过慢病毒将FLAG-DEP、FLAG-PDZ、FLAG-DEPTOR转染至P3代hPDLSCs,通过免疫共沉淀实验检测DEPTOR与ErbB2之间的结合关系。使用脂质体转染法将si-DEPTOR、si-ErbB2、si-NC转染至hPDLSCs,采用CCK8检测各组细胞的增殖能力;对细胞进行成骨诱导培养,采用茜素红染色观察细胞第21天成骨矿化形成情况,并用分光光度计法对矿化结节进行定量分析;利用RT-qPCR检测各组细胞Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、1型胶原蛋白(COL1)、碱性磷酸酶(ALP)mRNA表达水平;采用Western blot检测各组细胞DEPTOR、Erb-b2受体酪氨酸激酶2(ErbB2)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果培养的P3代PDLSCs CD90和CD105表达呈阳性,CD34表达呈阴性。在过表达FLAG-DEPTOR和FLAG-DEP的免疫沉淀产物中可检测到ErbB2b蛋白。与si-NC比较,转染si-DEPTOR后DEPTOR蛋白表达水平(1.00±0.18比0.23±0.11)降低,差异有统计学意义(P<0.05);与si-NC比较,转染si-ErbB2和si-DEPTOR后ErbB2蛋白表达水平(1.00±0.07比0.50±0.10、0.23±0.05)均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC比较,转染si-DEPTOR、si-ERB2的细胞在第7天增殖能力(246.45±8.66比208.33±2.89、216.67±5.77)减弱,矿化结节形成OD值(1.23±0.09比0.78±0.06、0.64±0.09)减少,Runx2、OCN、COL1、ALP mRNA表达水平、p-PI3K蛋白表达水平(1.00±0.16比0.36±0.05、0.16±0.06;1.00±0.27比0.38±0.08、0.21±0.12;1.00±0.15比0.51±0.07、0.51±0.09;1.00±0.17比0.70±0.03、0.64±0.08;1.00±0.15比0.44±0.05、0.23±0.05)降低。结论在hPDLSCs中,DEPTOR的PDZ端与ErbB2结合。沉默DEPTOR能够降低其与ErbB2的相互作用,抑制PI3K信号通路,抑制细胞增殖和成骨分化。