水貂犬瘟热、细小病毒性肠炎二联灭活疫苗制备及其质量评价

本研究制备了水貂犬瘟热、细小病毒性肠炎二联灭活疫苗3批,通过病毒液检验、半成品检验及成品检验,显示所生产的灭活疫苗工艺稳定,批间差异小,成品接种水貂安全无副反应;采用血清抗体测定和免疫攻毒方法对3批灭活二联苗进行免疫效果研究,结果显示,免疫接种21 d,水貂犬瘟热中和抗体可达1:51~1:91,水貂细小病毒HI抗体可达1:64~1:256,经免疫攻毒,可抵抗100 ID_(50)的犬瘟热强毒和水貂细小病毒强毒的攻击,具有较好的免疫效果。

牛病毒性腹泻病毒一步法微滴数字PCR检测方法的建立与初步应用

为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)一步法微滴数字PCR(RT-ddPCR)方法,本研究在一步法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的基础上,设计BVDV的特异性引物和探针,对RT-ddPCR试验中的反转录酶、退火温度、引物和探针浓度以及检测方法的反应条件进行优化。同时对其特异性、敏感性、重复性进行评估。结果显示,建立的RT-ddPCR方法最佳反转录体系为商品化一步法数字PCR试剂盒配套试剂、引物和探针终浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为57℃;用本方法检测常见疫病病毒时结果呈阴性;本方法最低检测限为3.2 copies/μL,重复性好,且变异系数小于5%。采用RT-ddPCR和RT-qPCR对24份牛源拭子样品进行检测,检测结果显示所建方法优于RT-qPCR方法。本研究建立的RT-ddPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样品的核酸检测,为牛病毒性腹泻病毒感染的早期检测和定量诊断提供了技术支持。