萝卜硫素干扰微管与线粒体动力学抗肿瘤机制

萝卜硫素及其代谢物(sulforaphanes,SFNs)是源于十字花科植物,诸如西兰花、甘蓝、红萝卜的天然活性物质。SFNs主要代谢物是萝卜硫素-N-乙酰半胱氨酸(SFN N-acetylcysteine,SFN-NAC)、萝卜硫素半胱氨酸(SFN cysteine,SFN-Cys)和萝卜硫素谷胱甘肽(SFN glutathione,SFN-GSH)等。萝卜硫素可抑制多种肿瘤细胞生长,对正常组织毒性较低,但其在循环中的半衰期仅为2 h。然而,SFN-NAC和SFN-Cys在循环中的半衰期较长,给小鼠注射SFN后,SFN-NAC和SFN-Cys 72 h才经尿液排泄干净。十多年来笔者对SFNs的抑癌机制进行了系统地研究,除了半衰期不同外,几种SFNs的抑癌机制高度一致。笔者发现SFNs是一类微管抑制剂,通过干扰微管的结构,调节微管动力学平衡,以及抑制线粒体功能导致肿瘤细胞生长抑制和凋亡。

SIRT7抑制胰腺癌细胞上皮-间充质转化的作用和机制研究

目的探讨SIRT7在胰腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用和机制。方法使用siRNA或质粒转染将胰腺癌细胞分为siControl组、siSIRT7组、过表达SIRT7组、siSIRT7+siCOL4A1组和siSIRT7+siSLUG组。EdU实验、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测EMT标志物和肿瘤干细胞标志物的表达水平。对敲低SIRT7的胰腺癌细胞进行转录组测序(RNA-seq),探究SIRT7调控的信号通路和靶基因,采用qRT-PCR验证靶基因的转录水平。定量染色质免疫共沉淀实验(q-ChIP)和染色质免疫共沉淀聚合酶链反应(ChIP-PCR)鉴定SIRT7直接调控的靶基因。免疫组织化学法检测人胰腺癌组织(2013-2016年购自武汉塞维尔生物科技有限公司)中SIRT7及靶基因的表达。癌症基因组图谱(TCGA)数据库数据分析SIRT7及其靶基因的表达相关性。KM-Plotter网站用以分析SIRT7和靶基因在胰腺癌中的生存相关性。GeneMANIA、STRING和ENCORI在线工具用以分析SIRT7相关蛋白及miRNAs等。结果EdU实验结果显示,过表达SIRT7组PANC-1和BxPC-3细胞增殖率分别为(19.33±0.35)%和(17.00±1.89)%,均低于对照组[分别为(31.60±1.37)%和(24.33±0.78)%,均P<0.05];而敲低SIRT7表达组PANC-1和BxPC-3细胞增殖率[分别为(23.94±1.00)%、(27.08±0.97)%]和[(22.00±1.86)%、(25.96±1.61)%]均高于siControl组[分别为(11.80±1.86)%和(13.42±1.39)%,均P<0.05]。在PANC-1细胞中,细胞划痕实验结果表明,过表达SIRT7组细胞相对迁移率为(76.67±2.74)%,低于对照组细胞[(100.00±2.13)%,P<0.05];而抑制SIRT7表达后细胞相对迁移率[分别为(134.22±4.08)%和(199.82±9.20)%]均高于siControl组细胞[(102.24±3.13)%,均P<0.05]。迁移实验中(BxPC-3细胞),过表达SIRT7组细胞迁移数为(28.33±2.62)个,低于于对照组[(45.66±1.69)个,P<0.05];敲低SIRT7表达组细胞迁移数[分别为(65.66±2.86)个、(82.00±2.94)个]均高于siControl组细胞[(33.00±0.81)个,P<0.01]。Transwell实验结果表明,过表达SIRT7组细胞侵袭数为(16.33±2.05)个和(34.66±1.69)个,低于对照组[分别为(54.33±4.64)个和(58.66±5.90)个,均P<0.05];而敲低SIRT7表达组细胞侵袭数[分别为(63.66±2.49)个、(69.33±3.29)个和(134.33±3.09)个、(181.66±4.02)个]均高于siControl组细胞[(35.33±2.49)个和(42.00±0.81)个,均P<0.05]。qRT-PCR和Western blot结果显示,敲低SIRT7表达后,细胞上皮标志物表达降低,间充质标志物表达增多,肿瘤干细胞标志物增多。RNA-seq分析显示,SIRT7参与调控多种恶性肿瘤相关信号通路,其中包括胰腺癌通路和EMT通路。q-ChIP和ChIP-PCR结果显示,SIRT7可直接结合到靶基因COL4A1和SLUG等的启动子区域;EdU、Transwell和Western blot实验也证明SIRT7与靶基因COL4A1和SLUG在胰腺癌细胞中的功能呈负性相关。免疫组化结果显示,SIRT7在胰腺癌组织中表达下调,COL4A1、SLUG、SOX2在胰腺癌组织中表达上调。GeneMANIA、STRING和ENCORI在线网站分析结果显示,有众多潜在的SIRT7相互作用蛋白和相关miRNA。结论在胰腺癌中,SIRT7可以通过抑制COL4A1和SLUG等靶基因的转录,从而抑制胰腺癌细胞的EMT,胰腺癌中SIRT7是一个潜在的肿瘤抑制基因。

白藜芦醇与奥沙利铂联合应用抑制结直肠癌细胞增殖的机制

目的:探讨联合应用白藜芦醇与奥沙利铂抑制结直肠癌细胞系增殖的作用机制。方法:单独或联合应用奥沙利铂和白藜芦醇处理人结肠癌细胞系HCT-116和HT-29,CCK-8实验检测肿瘤细胞活力,流式细胞术检测细胞周期;应用慢病毒介导使HCT-116细胞过表达miR-34c,再用奥沙利铂处理,检测肿瘤细胞的活力和凋亡;建立结直肠癌皮下荷瘤裸鼠模型,分别给予二甲基亚砜、奥沙利铂、白藜芦醇及白藜芦醇+奥沙利铂,制作肿瘤组织石蜡切片进行Ki67染色并计数。结果:与单独应用奥沙利铂或白藜芦醇相比,联合应用奥沙利铂和白藜芦醇更显著抑制HCT-116细胞的活力,细胞阻滞在G1期。荷瘤裸鼠实验同样显示奥沙利铂和白藜芦醇联合应用较单独应用时Ki67阳性率减少。结论:联合应用奥沙利铂和白藜芦醇具有协同抑制结直肠癌细胞增殖的作用,其可能机制与白藜芦醇促进结直肠癌细胞抑癌基因miR--34c表达有关。

神经母细胞源性肿瘤患儿N-MYC基因拷贝数的变化及其临床意义

目的:研究N-MYC基因拷贝数在神经母细胞源性肿瘤(neuroblastic tumors,NTs)患者中的异常改变及其临床病理学意义。方法:收集483例NTs患儿肿瘤组织标本,其中包括神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)388例、节细胞神经母细胞瘤(ganglioneuroblastoma,GNB)89例、节细胞神经瘤(ganglioneuroma,GN)6例。运用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测N-MYC基因拷贝数改变。考察N-MYC基因拷贝数改变与临床病理学特征的关系并进行生存分析。结果:483例NTs患儿N-MYC基因扩增率为12.4%。N-MYC基因扩增均发生在NB中,而在GNB及GN中未见其扩增(P<0.05)。N-MYC基因拷贝数改变更易发生在低分化程度的NB中(P=0.01),且随着分化程度降低,N-MYC基因扩增率增加。男性患儿N-MYC基因拷贝数改变的发生率多于女性患儿(P=0.05)。患儿年龄≤18个月者N-MYC基因扩增率有低于>18个月者的趋势(P=0.092)。生存分析显示:N-MYC基因扩增组患儿生存率明显低于获得组及正常组。结论:NTs患儿N-MYC基因扩增与NTs的类型、分化程度、性别、年龄及生存密切相关。本研究为NTs患者的诊断、治疗及预后提供可靠的参考和帮助。

同源异型盒1基因促进乳腺癌细胞增殖和侵袭

同源异型盒1(sine oculis homeobox homolog 1,SIX1)基因参与多种肿瘤调控,在乳腺癌发生发展过程中发挥了重要作用,但具体机制仍有待探讨。本研究目的在于分析SIX1基因在乳腺癌中的表达情况,研究其在乳腺癌细胞增殖与侵袭过程中所发挥的作用并探讨作用的机制。TCGA数据库和GEPIA2在线数据库分析发现,SIX1在乳腺癌中的表达高于正常组织,且在乳腺癌的不同分子亚型Basal-like、HER2、Luminal A、Luminal B中也证实了这一点(P<0.05);HPA数据库分析发现,SIX1的免疫组化蛋白质表达水平高于正常乳腺组织,SIX1基因在乳腺癌中高表达,差异具有统计学意义(P<0.001)。在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,干扰SIX1的表达及在MCF-7中过表达SIX1后,生长曲线及EdU实验结果显示:敲低SIX1后乳腺癌细胞的生长增殖受到抑制,而过表达SIX1则会发挥促进作用(生长曲线实验:P<0.05;EdU实验:P<0.001);Transwell结果表明,SIX1能够增强乳腺癌细胞的侵袭能力(P<0.001)。利用TCGA数据库,根据SIX1基因表达值的上下四分位定义SIX1基因高表达及低表达人群,对两组队列进行差异基因分析,发现差异基因与代谢、干细胞调控等通路相关;对敲低SIX1的乳腺癌细胞系进行转录物组测序(RNA-sequencing,RNA-seq),并对测序结果进行一系列生物信息学分析发现,SIX1与代谢、干细胞调控以及EMT等通路密切相关。挑选代表性基因MYC、SNAI2、EGFR,通过已发表的GEO临床数据集以及KM-plotter验证靶基因与SIX1表达的相关性及与临床乳腺癌病人的预后关系,我们发现:SIX1与MYC、SNAI2、EGFR表达正相关。高表达的SIX1、MYC、SNAI2与EGFR不利于乳腺癌病人的生存。利用GCBI、GeneMANIA及String在线工具,我们发现了SIX1基因相互作用的蛋白质和相关的lncRNA及miRNA。综上,本研究中初步揭示了SIX1在乳腺癌中发挥的作用及其调控机制,为进一步深入研究该基因提供了线索。

完全经肛全直肠系膜切除术联合括约肌间切除治疗超低位直肠癌

目的探索应用完全经肛全直肠系膜切除(pure transanal total mesorectal excision,pure-TaTME)联合括约肌间切除(intersphincteric resection,ISR)治疗超低位直肠癌术式的安全性及可行性。方法经过术前肠镜、直肠腔内超声及盆腔磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)等检查进行评估,筛选出本例超低位直肠癌患者,顺利施行pure-TaTME联合ISR手术:利用肛门牵开器充分显露肛管,直视下完成ISR手术。然后建立经肛手术路径,完全经肛完成pure-TaTME手术,并创建肠道的连续性。结果手术时间350 min,术中出血量200 mL。切除标本长约18 cm,远断端切缘1.0 cm,直肠系膜完整。术后病理报告为直肠高级别锯齿状腺瘤,局灶黏膜内癌变,远近断端及环周切缘阴性;检出淋巴结32枚,未见癌转移。病理分期为p T1N0M0。患者术后恢复满意,术后3d肠道功能恢复,开始进流食,术后第5天进半流食,无感染及吻合口瘘发生。至今随访24个月,大便控制功能良好,未见肿瘤复发转移。结论完全经肛全直肠系膜切除(pure-TaTME)联合括约肌间切除(ISR)治疗超低位直肠癌安全可行,这为低位甚至超低位直肠癌的外科治疗提供了一种可行性选择,但远期效果还需要更多病例进行临床研究来确定。

转化医学与中国微创外科的发展（英文）

转化医学(translational medicine,TM)的概念于1992年提出,它的核心是一门将医学生物学基础研究成果迅速有效的转化为可在临床实际应用的理论、技术、方法和药物的科学。近年基础医学研究投入不断提高,但能应用到临床的成果却甚少,如何提高基础医学研究成果的转化率,受到世界范围内广泛关注,转化医学因此应孕而生。纵观世界微创外科的发展史,亦是实验科学与临床科学不断促进和发展的过程。中国微创外科起步较晚,但经过中国微创外科前辈们的努力,从基础研究转化到临床应用并逐步摸索出自己的经验,提高自身在国际上的影响力。总的来看,基础研究成果丰硕,但真正能转化为临床实践并得到验证却很少,如何提高转化医学的转化率是全世界面临的难题。本文简要综述了转化医学的概念与发展,转化医学在中国微创外科中的应用及面临的问题。

基因编码钙指示剂在药物反应性细胞核钙信号实时动态检测中的应用

目的探讨新型基因编码钙指示剂(genetically-encoded calcium indicators,Ge CIs)在药物反应性细胞核钙信号实时动态检测中的应用。方法将常用的Ge CI变体——GCa MP6s用核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)标记以用于细胞核钙的检测;同时在其C端与红色荧光蛋白td Tomato融合作为分子内的定量参照。将构建的质粒分别转染至He La细胞和U87MG细胞中,利用活细胞共聚焦显微成像技术对核钙信号的实时变化进行动态监测。结果蕈青霉素(Paxilline)能够引起在40 min连续记录中核钙水平的持续增加,并且增加的动力学模式在不同的细胞系中差异存在统计学意义;同时在药物处理后细胞反应的筛选中显示,青蒿素可以引起细胞核钙浓度的明显改变,其变化的幅度与持续情况与蕈青霉素及过氧化氢的作用有所不同。此外,笔者还发现利用核钙的变化指标可以对细胞在接受应激性刺激后的异质性表现进行统计聚类分析。结论在非兴奋细胞中,不同药物刺激可以引起细胞核钙离子浓度的升高。

继续提升我国高质量结直肠外科多中心临床研究

高质量的临床研究是提高临床诊断与治疗水平,促进学科建设以及拓展医学前沿的重要途径。近年来,我国结直肠外科多中心临床研究日益增多,临床研究水平逐步提升,已积累丰富临床研究经验。创新选题以及科学设计是高质量临床研究的基础。手术技术标准化及研究各环节质量控制是高质量研究的关键。同时,研究者应当建立数据管理体系,选择合适的数据采集系统,定期核查数据及反馈以保证研究的数据质量。笔者总结国内外结直肠外科高质量临床研究经验,旨在进一步推动高质量的临床研究开展。

抑癌基因Keap1抑制非小细胞肺癌细胞的增殖

目的了解抑癌基因Keap1对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖能力的影响。方法用携带EGFP-Keap1慢病毒感染NSCLC细胞系A549细胞,以空载EGFP慢病毒感染的A549细胞为对照;采用细胞计数法建立细胞生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期;建立BALB/c裸鼠荷瘤鼠NSCLC模型,观察肿瘤大小,对肿瘤组织切片进行Ki67免疫荧光染色。结果过表达Keap1明显抑制细胞生长,显著延长细胞倍增时间,阻滞细胞周期阻滞,并明显抑制荷瘤鼠肿瘤的生长,降低肿瘤组织Ki67阳性细胞。结论抑癌基因Keap1具有明显抑制NSCLC细胞增殖的作用。

回归基础解剖探索食管胃结合部肿瘤外科治疗的困惑与争议

食管胃结合部肿瘤的外科治疗在手术入路、清扫范围、切除范围等方面尚存在较多争议,对食管胃结合部范围的认知差异是造成这一现象的主要原因。该部位现有的解剖学阐述已无法满足临床实践的需要。基于大量基础解剖和临床操作,食管胃结合部可能是由完整、单独的食管胃结合部膜所包裹的有独立解剖结构的移行组织,从黏膜下静脉分布入手,可以了解该区域组织移行变化的意义及其与临床操作的关系,根据这些解剖特点,可以对当前的争议进行合理的分析,期待与同道一起进一步深入研究。

腹腔镜右半结肠癌切除术后消化道重建的研究现状及前景

腹腔镜右半结肠癌切除术后腹腔内吻合正逐渐成为结直肠手术领域中的热点。研究者发现:腹腔内吻合与腹腔外吻合比较,前者在促进病人术后恢复,降低术后并发症发生率等方面有潜在优势。且腹腔内吻合较腹腔外吻合病人术后胃肠功能恢复更快、术后疼痛评分更低。但对于腹腔内吻合的并发症发生率,尤其是重要指标吻合口漏的比较,尚缺乏足够证据。而手术技术不统一、吻合口漏定义不明确是目前研究的主要困难。多项高质量的前瞻性随机对照试验目前正在进行中,对于腹腔镜右半结肠癌切除术的客观评价仍需要更高级别的循证医学证据验证。笔者综合分析国内外研究进展,系统阐述腹腔镜右半结肠癌切除术后消化道重建的研究现状及前景,旨在为我国结直肠外科临床研究探索新方向。

遵照IDEAL框架和建议:开展高质量的直肠癌外科临床研究

“设计、开发、探索、评价和长期随访(IDEAL)”框架和建议为外科创新技术提供了高质量研究和实践的指导路径。经肛全直肠系膜切除术作为直肠外科领域的一项新技术,其发展严格遵循IDEAL框架并逐步推进。在技术设计和开发阶段,验证了该技术的可行性。在探索阶段,进行小规模临床验证,制订诊断与治疗规范和手术标准,开展结构化培训。在评价阶段,进行大规模随机对照研究,验证该技术的安全性和有效性。随后在临床实践中进行长期监测和随访,成为外科临床研究领域的良好范例。笔者回顾、总结和整理本研究团队在质量控制方面的开创性工作,以飨读者。

积极参与国际高质量临床试验提高中国结直肠外科临床研究水平

中国的结直肠癌患者数量一直位居世界前列。然而,中国的国际性结直肠癌诊断与治疗指南或高级别循证医学研究证据十分罕见。经肛全直肠系膜切除术(taTME)是近年发展起来的结直肠外科领域新手术方式,目前国际上taTME相关临床实践一直与临床研究同步开展。笔者结合参加国际结直肠外科研究领域顶级临床研究(COLOR系列前瞻性研究)的经验,介绍COLORⅢ研究在中国的组织实施情况,希望COLOR系列研究成为高质量外科临床研究领域的范例,进而提高中国结直肠外科临床研究水平。

直肠癌保肛术后短期生活质量研究现状

保肛手术是目前中低位直肠癌治疗中的热点。尽管保肛手术保留了肠道的解剖连续性,但患者术后功能及生活质量能否达到满意的效果仍有待进一步证实。现有的研究显示,保肛患者术后1个月多项功能及症状评分较术前明显恶化,而在3~6个月内逐渐恢复并接近术前水平,在1年左右基本稳定。患者术后功能变化情况与患者相关因素、肿瘤因素、治疗相关因素和术后并发症密切相关。(1)在患者相关因素中,年龄<70岁患者的角色功能、性功能相对较差,而认知功能、躯体功能则相对较好;男性患者在性功能、社会功能下降相对明显。(2)在肿瘤相关因素中,肿瘤位置较低的患者排粪功能较差,进展期较早期肿瘤患者额外增加化疗治疗及副作用影响。(3)在治疗相关因素中,患者经括约肌间切除术后的排粪功能、社会功能、角色功能下降相对明显;预防性造口使患者角色功能、身体形象、性兴趣恶化;放化疗治疗使患者味觉改变、胸闷等化疗相关症状评分恶化。(4)在术后并发症方面,吻合口漏患者术后排粪功能、心理状态在近期明显下降;重度直肠前切综合征及泌尿生殖系统障碍患者的总健康评分,躯体功能、角色功能和社交功能下降。总体来说,保肛手术患者的短期生活质量改变是可接受的。在该阶段应对患者进行针对性地干预和治疗,以期提高患者术后的功能及生活质量。另外,由于多种因素同时影响患者生活质量,研究者对术后生活质量评分的解读存在一定困难,需要更具体及全面的评价工具来评价直肠癌术后的生活质量。

经肛全直肠系膜切除术中国医师结构化培训需求和资质认定的调查研究

目的调查国内对于经肛全直肠系膜切除术(taTME)结构化培训的需求与意见。方法在2018年3月25日至4月11日期间,以国内130位熟悉taTME手术以及有taTME手术经验的结直肠外科医师[包括中国taTME病例登记协作研究成员、中国医师协会结直肠肿瘤专业委员会taTME专业委员会(CSTAS)成员以及中国结直肠外科医师青年联盟成员]为调查对象。通过问卷形式进行横断面调查研究,设计《中国经肛全直肠系膜切除术(taTME)结构化培训调查问卷》,包括调查对象个人结直肠手术经验情况,taTME培训需求和对培训内容的期望,以及关于参加taTME培训的学员、教员和中心资质认可的意见。问卷通过微信"问卷星"平台发放,问卷回收后用Microsoft Office Excel 2010(MAC)整理,运用SPSS 24.0软件处理数据。结果本次调查的问卷回收率为79.2%(103/130),调查对象在结直肠外科中位工作年限为15(10~20)年,其中47.6%(49/103)有taTME手术经验,93.2%(96/103)未接受过尸体手术培训。99.0%(102/103)接受调查的结直肠外科医师认为,在开展taTME术式之前,有必要接受taTME结构化培训。理想的taTME结构化培训应包含taTME手术演示(98.1%,101/103)、理论授课(93.2%,96/103)、教员现场实时指导真实taTME手术(80.6%,83/103)及尸体手术培训(64.1%,66/103)。而结合培训资源与可行性角度考虑后,更少医师(46.6%,48/103)将尸体手术培训选为可行的taTME结构化培训内容。对taTME培训学员的资质要求包括:独立完成30例腹腔镜TME手术的基础(47.6%,49/103)、不需或仅需10例经肛微创手术[经肛内镜微创手术(TEM)或经肛微创手术(TAMIS)]经验(78.6%,81/103)、每个单位都有必要以主刀与助手两人为团队接受taTME培训(83.5%,86/103)。对taTME培训教员的资质要求包括:10年的结直肠外科工作经验(47.6%,49/103)、30例以上的taTME手术经验(73.8%,76/103)、以及每年发表1篇相关领域研究文章(75.7%,78/103)。对taTME培训中心的资质要求包括:必须具备多学科团队培训能力(70.9%,73/103)、每年最少开展1~2次培训(68.0%,70/103)、必须具备模拟培训设备(53.4%,55/103);79.6%(82/103)接受调查的医师认为,尸体手术培训条件非taTME培训中心必须具备。结论中国结直肠外科医师对于开展国内taTME结构化培训的需求大,最关注的培训内容是taTME手术演示、理论授课和教员现场实时指导真实taTME手术。国内目前对尸体手术培训重视程度较低。

经肛全直肠系膜切除术病例注册登记研究在国际共识指南中的体现与价值

经肛全直肠系膜切除术(taTME)是结直肠外科领域的热点手术方式,目前研究者对该手术方式的治疗效果存在争议。基于不断积累的经验与证据,国内外关于taTME的共识与指南在不断更新和完善。2020年发布的《经肛全直肠系膜切除术适应证、实施和质量评估的国际专家共识指南》中,病例注册登记研究的重要性再次被强调。落实前瞻性病例信息记录是保障数据质量的根本前提。日益完善的信息收集方法及在线平台构建,可以实现数据质量的进一步提升。笔者结合最新taTME国际指南内容,探讨病例注册登记研究在其中的重要性,旨在通过提升taTME病例注册登记研究的数据质量,为结直肠外科领域提供可靠并具有时效性的循证医学证据。

直肠癌前切除术后吻合口漏的发生率以及影响因素分析

目的探讨直肠癌行前切除术后吻合口漏的发生率以及相关独立危险因素。方法采用回顾性病例对照研究方法，分析2007年4月至2017年3月期间，首都医科大学附属北京友谊医院普通外科收治的行直肠癌前切除或低位前切除术的550例患者病例资料，采用χ^2检验及Fisher确切检验分析吻合口漏发生率与临床病理特征的关系，Logistic多因素回归分析影响吻合口漏发生的独立危险因素。吻合口漏定义为直肠切除术后，结肠与直肠或结肠与肛管吻合口的肠壁因坏死或脓肿形成，导致其完整性遭到破坏而引起的肠管内外腔隙相通。分为3个等级：（1）A级，不需介入性操作治疗；（2）B级，需要介入性操作来治疗但不需手术治疗；（3）C级，需行手术治疗。结果550例行前切除或低位前切除术的直肠癌患者中，32例（5．8％）术后2—14d发生吻合口漏，其中15例（46．9％）为A级，4例（12．5％）为B级，13例（40．6％）为c级。围手术期相关死亡5例（0．9％，5／550），其中吻合口漏相关死亡3例（9．4％，3／32），非漏相关死亡2例（0．4％，2／518），两组病死率差异具有统计学意义（P=0．002）。χ^2检验或Fisher确切检验结果提示，吻合口漏的发生与新辅助放化疗（P=0．011）、术中出血量多（≥100m1）（χ^2=11．980，P=0．001）以及行吻合口缝合减张（P=0．015）有关；logistic多因素分析结果提示，吻合口漏发生的独立危险因素为新辅助放化疗（OR=2．402，95％CI：1．004～5．749，P=0．049）、术中出血量≥100ml（OR=2．971，95％CI：1．269～6．957，P=0．012）及吻合口缝合减张（OR=2．304，95％CI：1．008—5．263，P=0．048）。结论直肠癌行前切除术吻合口漏发生率为5．8％。接受新辅助放化疗、术中出血量多以及行吻合口缝合减张的患者。术后出现吻合口漏的风险较高，需积极采取有效的预防措施。

死亡诱骗受体3对乳腺癌预后及乳腺癌细胞的体外功能的影响

目的观察死亡诱骗受体3(DcR3)对乳腺癌预后的影响和在乳腺癌细胞侵袭功能中的作用。方法通过实时定量聚合酶链反应(PCR)(real-time Q-PCR)进行定量检测包含115例乳腺组织样本的DcR3表达,对应患者随访并分析,中位随访时间10年。通过免疫细胞化学法和RNA提取和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测DcR3在乳腺癌MCF7、MDA-MB-231细胞系中的表达,建立DcR3敲除的细胞亚系并验证。通过侵袭和迁移模型观察减少DcR3表达后产生的影响。结果患者分为预后良好组(n=81)和预后不良组(n=26)。预后不良组(133 350±49 646)拷贝/50 ng RNA较预后良好组(5 393±1 428)拷贝/50 ng RNA,P=0.020)DcR3的表达显著增高;病理分级2级的肿瘤较病理分级1级的肿瘤DcR3表达显著升高[(82 844±34 068)拷贝/50 ng RNA(n=39)]与[(5 371±3 500)拷贝/50 ng RNA,n=20,P=0.029]。成功敲除MCF7细胞系和MDA-MB-231细胞系的DcR3基因,DcR3的敲除降低了MCF7细胞的侵袭和迁移能力(P=0.009,P=0.001),但MDA-MB-231细胞系在这两方面的差异无统计学意义(P=0.475,P=0.102)。结论DcR3促进了乳腺癌细胞的侵袭性,在乳腺癌的转移中起到了一定作用,DcR3检测有助于乳腺癌预后判断。

冰冻尸体标本手术操作的经肛全直肠系膜切除术结构化培训效果分析

目的：探讨冰冻尸体标本手术操作的经肛全直肠系膜切除术（TaTME）结构化培训效果。方法：采用回顾性横断面研究方法。收集2018年4月12—13日由中华医学会外科学分会结直肠外科学组、中国TaTME临床研究协作组、北京解剖学会等联合主办，首都医科大学附属北京友谊医院、北京解剖学会临床应用解剖科学技术培训中心承办的第一期TaTME结构化培训的9名学员资料。TaTME结构化培训包括理论授课、手术演示教学和冰冻尸体标本手术操作。冰冻尸体标本手术操作时9名学员分为 3组：第1组学员编号A、C、E，第2组学员编号B、D、F，第3组学员编号G、H、I，每名学员进行冰冻尸体标本手术操作问卷调查。学员培训完成3个月后进行追踪问卷调查，包括参加结构化培训前、后TaTME手术量，参加结构化培训前、后TaTME熟练度，目前尚未开展TaTME的原因，TaTME学习曲线，TaTME手术相关并发症或不良事件，将来是否会继续行TaTME，TaTME结构化培训的作用，开展TaTME前是否需要接受该结构化培训。观察指标：（1）学员参与理论授课及手术演示教学情况。（2）学员冰冻尸体标本手术操作情况。（3）学员结构化培训完成3个月后追踪调查情况。学员结构化培训前后比较采用秩和检验。结果：（1）学员参与理论授课及手术演示教学情况：9名学员均接受理论知识授课及手术演示教学。理论知识授课，加深学员对TaTME理解；现场手术演示教学使学员更加直观感受TaTME技术要领及注意事项。（2）学员冰冻尸体标本手术操作情况：9名学员在指导老师的指导下，均能顺利完成冰冻尸体标本手术操作，达到训练目的。指导老师总体评价：3组学员的标本吻合口均完整；直肠系膜完整度Quirke分级为第1、2组 2级，第3组3级；并发症及主要困难为错误间隙操作、烟雾控制不佳，其中第3组发生尿道损伤。（3）学员结构化培训完成3个月后追踪调查情况：9名学员结构化培训后，2名TaTME手术量〉10例、2名6～10例、2名1例、3名0例，结构化培训前2名TaTME手术量6～10例、2名2～5例，1名1例、4名0例，培训前后学员TaTME手术量比较，差异无统计学意义（Z=1.000，P〉0.05）；其中3名学员仍未开展TaTME，原因分别为未发现合适的患者、无TaTME手术必备的硬件设施以及仍未完全掌握TaTME。9名学员结构化培训后，1名TaTME熟练度为极为熟练、3名需要1/4程指导、3名需要1/2程指导，2名需要3/4程指导，结构化培训前1名需要1/4程指导、1名需要1/2程指导，4名需要3/4程指导、3名非常不熟悉，培训前后学员TaTME熟练度比较，差异无统计学意义（Z=1.243，P〉0.05）。9名学员中5名认为完成10例TaTME后才度过学习曲线。学员开展TaTME手术相关并发症或不良事件包括尿道损伤、出血、手术错误间隙及手术切除标本不完整。9名学员中8名表示将来会继续行TaTME。9名学员一致认为TaTME结构化培训非常必要以及开展TaTME前需要接受该结构化培训。结论：冰冻尸体标本手术操作的TaTME结构化培训，是对TaTME这一新手术方式培训的崭新尝试。结构化、规范化TaTME培训是临床开展TaTME前的必要条件，有利于提高TaTME的安全性和有效性。