肿瘤分子生物学是基础医学研究的前沿

0 引言 医学是探索人类疾病发病机制及治疗方法的科学.现代医学的快速发展揭示了多种人类疾病的发病机制,并使对多数疾病的预防和治疗成为可能.但仍有许多疾病,尤其是肿瘤性疾病,其发病机制不甚明确,更缺乏有效的预防和治疗手段,严重危害人类生命和健康.因此,迫切需要对肿瘤性疾病的发病机制和治疗措施进行广泛、深入、细致的研究.

肿瘤分子细胞遗传学研究方法的最新进展

荧光原位杂交已广泛应用于分子生物学、肿瘤遗传学的研究,在其基础上,又发展了许多新 技术,并已成为极为重要的研究手段。

蛋白质组学在实体瘤肿瘤标志物研究中的应用

在后基因组时代,生物学的中心任务是认识基因组的功能。由于基因功能主要是通过其表达蛋白质来实现的,要了解基因的全部信息,必须深入研究不同基因编码的蛋白质,因此蛋白质组学在生命科学研究中已具有重要的地位。肿瘤细胞或组织蛋白质样本通常经过双向电泳等技术可以按不同大小、等电点或类型得以分离(profiling),然后通过质谱技术和蛋白质数据库比较,进一步将特殊的感兴趣的蛋白质鉴定出来。肿瘤蛋白质组学是整个蛋白质组学研究中的一项重要内容,通过蛋白质组分析技术将能够从细胞整体水平上认识在肿瘤的发生、发展过程中蛋白表达谱的变化,为寻找特异的肿瘤标志物这一研究领域带来了新的希望。近几年来,使用蛋白质组学和激光捕获显微切割技术(lasercapturemicrodissection,LCM)已在多种肿瘤中发现了许多有研究前景的肿瘤标志物侯选蛋白,尽管目前被肯定的肿瘤特异性标志物尚为数不多,但和以往相比已经有了十分显著的进步,本文对此做了简要综述。

转入人肿瘤坏死因子α基因的鱼腥藻IB02(+)的细胞毒活性及其体内抗肿瘤药效学研究

目的测定转入人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因的鱼腥藻IB02(+)的抗肿瘤药效。方法在相同的培养条件下通过100L光生物反应器培养4组转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+),分别命名为批次1、2、3、4,经过反复冻融和真空冷冻干燥处理,得到转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)粗提物干粉样品。采用结晶紫染色法检测转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)粗提物干粉样品的细胞毒活性,并通过测定不同批次间的细胞毒活性差异检测其稳定性。采用转入人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因鱼腥藻IB02(+)对小鼠肝癌细胞H-22的抑制来测定体内抗肿瘤药效。结果转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)的细胞毒活性约为8000U/mg。4种不同批次的转入hTNFα基因蓝藻IB02(+)细胞毒活性相当,hTNFα蛋白性质比较稳定。小鼠1次口服最大耐受量为16.0g/kg,在观察期内所有受试小鼠无一死亡,生长发育正常,主要脏器未见异常,未显示明显毒性。药效学研究表明,口服6g/kg转入hTNFα基因蓝藻IB02(+)对小鼠肝癌细胞H-22的抑制率平均值(37.7±3.4)%,最高值为41.5%(P<0.001)。结论转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)抗肿瘤作用明显,无明显的毒副作用且药效学性质稳定。

细胞重要分子表型与肿瘤个体化治疗的研究进展

恶性肿瘤严重危害着人类的健康.尽管肿瘤的病因学研究取得了一定进展,肿瘤的临床处置依然面临挑战,包括手术切除、化学药物治疗和放射治疗在内的标准治疗模式不能对所有患者都奏效.如何选择合适的治疗方案和准确评估患者的预后,临床医生经常感到困惑.针对信号通路重要蛋白的分子靶向治疗的结果显示,不同肿瘤患者具有独特的分子表型特征并决定了肿瘤治疗的疗效.有效治疗肿瘤需要量体裁衣式地设计出个体化的治疗方案.通过"组"学研究发现了许多肿瘤细胞特异的分子表型,而针对这些表型的个体化治疗将是未来肿瘤治疗的方向.

细胞培养稳定同位素标记技术与肿瘤标志分子研究

以质谱为基础的定量蛋白质组学分析技术的发展,大大加快了肿瘤标志分子的研究进程。细胞培养稳定同位素标记技术,已成为目前定量蛋白质组学的主要策略之一,它将不同来源或不同状态的细胞分别培养于含轻/重型稳定同位素标记必需氨基酸的培养基中,经过若干次细胞倍增后,稳定同位素按照序列特异的方式,完全掺入到新合成的蛋白质中。通过比较标记前后同一肽段的质谱峰值变化,可以实现对蛋白质的精确定量。它具有样本需求量少、简单、直接、高效及定量准确等特点,不仅可以定性和定量地分析差异表达蛋白质,而且可以分析蛋白质翻译后修饰和蛋白质相互作用,已逐渐成为研究差异蛋白质组的重要工具之一,在肿瘤分子标志研究中发挥重要作用。

肿瘤个体化医学研究的需求和挑战

美国国立癌症研究中心将个体化医学定义为:"一种运用个体基因、蛋白以及环境信息来预防、诊断及治疗疾病的医药。"个体化医学在肿瘤治疗中的应用非常广泛,其中包括:评估可能罹患某种肿瘤的风险并选择相应的筛查方法来降低这种风险;针对特定的患者给予恰当的治疗方法,以提高效率并减少副作用;预测肿瘤复发的风险并鉴定需要辅助治疗的患者。在逐渐积累的分子肿瘤学知识以及不断进步的新技术(基因组测序、SNPs分析、DNA芯片技术、基于质谱鉴定的蛋白质组学以及生物信息学分析等)帮助下,患者们能得到针对某种特定肿瘤的更加高效的治疗。尽管个体化医学仍面临一些挑战,但在不久的将来它必定会极大的改善肿瘤治疗。

CD3AK细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用

CD3AK细胞是用抗T细胞表而CD3分子的单克隆抗体激活的新型杀伤细胞，在肿瘤的免疫疗法中愈来愈受到重视。本文用抗CD3单克隆抗体(北医太免疫室提供)和rIL-2(日本盐野义制药株式会社产品)共同刺激人外周血单个核细胞(PBMC)，诱导CD3AK细胞，系统地研究了其生物特性及其体外抗肿瘤活性并与LAK细胞作比较。

Ets转录因子家族在发育和肿瘤发生中作用的研究进展

Ets转录因子家族包括30多个成员,具有复杂的结构和功能,通过调节细胞的增生、分化、凋亡及细胞与细胞间的相互作用,在许多生理和病理过程中发挥重要的调控作用。Ets家族成员在发育过程中特异性时空表达与其对发育的调控作用密切相关,他从细胞、组织、器官不同的水平调控发育过程,特别是在血管发生和免疫系统的发生中发挥重要作用。此外,Ets在肿瘤的侵袭、转移和血管生成过程中发挥重要作用,主要与调节细胞外基质(ECM)酶的转录活性有关。Ets转录因子受多种信号通路的调控,MAP激酶(Erk,p38和JNK)、Ca^(2+)依赖的信号通路以及TGF-β。

RGD序列多肽与不同肿瘤细胞结合特性研究

目的:通过体外细胞和动物体内研究期望获得不同肿瘤细胞整合素αvβ3受体表达的资料,以指导临床研究。材料和方法:采用荧光显微镜检测FITC标记HYNIC-RGD对人胰腺癌、肝癌、肠癌和子宫颈癌细胞的结合;用99mTc-HYNIC-RGD在小鼠乳腺和肝癌动物模型上比较了肿瘤对99mTc-HYNIC-RGD的摄取。结果:体外研究表明胰腺癌和肝癌细胞对RGD结合明显高于肠癌和子宫颈癌。注射后3小时小鼠皮下接种的乳腺癌和肝癌肿瘤组织对99mTc-HYNIC-RGD的摄取达到高峰,乳腺癌对99mTc-HYNIC-RGD摄取高于肝癌40%以上。结论:体外研究表明胰腺癌和肝癌细胞均对RGD有高的摄取,活体小鼠动物模型研究表明乳腺癌对RGD具有高的摄取。

肿瘤干细胞靶向治疗研究进展

肿瘤干细胞（cancer stem cell,CSC）是存在于肿瘤组织中的一小部分具有干细胞性质的细胞群体,它具有自我更新的能力,是形成不同分化程度肿瘤细胞和肿瘤不断扩大的源泉。现有治疗肿瘤的方法主要是针对肿瘤组织内的大多数细胞,而不是肿瘤干细胞。即使99.99%的肿瘤细胞被杀死,但只要有0.01%的肿瘤干细胞存在,

腺病毒介导RA538基因转移及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究

RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因。通过重组体腺病毒将RA538基因成功地转导到人肺腺癌细胞系 (GLC - 82 )中 ,经X -gal染色证实转导效率达 10 0 % (MOI为 2 5) ,转导RA538基因后的GLC - 82肿瘤细胞生长受到明显的抑制 ,抑制率为 77 2 %。经流式细胞计数 (FCM)及TUNEL检测证实RA538可诱导肿瘤细胞发生凋亡 ,凋亡率为 59 4%。利用Westernblot法检测转导了RA538基因GLC - 82肿瘤细胞中癌基因蛋白发现 ,c -myc基因蛋白表达下调。结果提示 :RA538作为抑癌基因将有可能应用于肿瘤基因治疗。

SLC基因修饰对肿瘤细胞疫苗免疫效果的初步研究

目的:构建次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC)基因修饰的趋化型恶性黑色素瘤疫苗,并初步研究其免疫效果。方法:SLC基因转染小鼠黑色素瘤细胞B16,并用适当条件的丝裂霉素处理,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。在体外,利用趋化小室法检测趋化型疫苗培养上清对小鼠脾淋巴细胞的趋化活性。在体内,用趋化型疫苗免疫小鼠,检测脾淋巴细胞的CTL活性,并观察疫苗免疫对B16移植瘤生长的影响。结果:筛选获得了SLC基因转染的小鼠黑色素瘤B16细胞,以100μg/mL丝裂霉素处理1.5h,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。趋化型疫苗在体外培养48h后,其培养上清对淋巴细胞具有明显的趋化活性。与野生型疫苗相比,用趋化型疫苗免疫后,小鼠脾淋巴细胞的CTL活性更强,小鼠免疫后再次接种B16细胞,肿瘤的生长受到更明显的抑制。结论:成功构建了SLC基因修饰的趋化型黑色素瘤疫苗,并在体内外初步检测到该疫苗对抗肿瘤免疫的影响和对移植瘤生长的抑制,该疫苗有可能被应用于恶性黑色素瘤的免疫治疗。

M-FISH在实体肿瘤研究中的应用

本文综述了M-FISH在实体肿瘤研究的最新进展。介绍了M-FISH技术的原理,讨论了M-FISH使用的探针、M-FISH在肿瘤细胞系研究和肿瘤组织标本研究中的应用以及M-FISH技术的优缺点。

Id蛋白与肿瘤关系的研究进展

DNA结合和分化抑制剂(inhibitor of DNA binding and differentiation,Id)是螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)转录因子亚家族的一个成员,4个Id成员与碱性螺旋-环-螺旋(basichehx-loop-helix,bHLH)蛋白形成二聚体,但缺乏碱性DNA结合结构域,因此,Id-bHLH异源二聚体不能结合DNA,故Id蛋白是bHLH转录因子的显性负调节子.Id蛋白也能与非HLH蛋白相互作用,如Rb、Ets、同源盒家族转录因子Pax、小鼠Id相关蛋白1(MIDA-1),并抑制其活性.现已证实Id在肿瘤细胞中通常过表达,并且与肿瘤细胞增生、分化、凋亡、侵袭等密切相关.

HER-2/neu基因在肿瘤免疫治疗中的研究进展

原癌基因HER2 /neu是表皮生长因子受体家族中的一员 ,在多种人类恶性肿瘤中存在其扩增及过度表达 ,HER2 /neu的过表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关。近年来以HER2 /neu为靶点的抗肿瘤免疫治疗发展较快 ,在抗HER2 /neu抗体 (Herceptin) ,多肽疫苗 ,DNA疫苗等方面取得了很大进展。

单核苷酸多态性分析技术及其在肿瘤研究中的应用

单核苷酸多态性 (SNP)是第 3代遗传标记 ,由于其在基因组中分布的高密度性 ,被认为在多基因疾病的诊断及治疗方面有着广阔的应用前景。

CpG ODN与聚肌胞在肿瘤免疫中联合应用的研究

目的选择两种新型的生物型免疫刺激剂CpGODN和poly(I:C)联合作为多肽抗原佐剂,通过体外及体内多种免疫功能指标检测,探讨二者联合应用的免疫增效作用。方法体外实验中用CpGODN和poly(I:C)单独或联合与正常小鼠脾细胞混合培养,24h后检测细胞培养上清中细胞因子分泌情况;体内实验中用CpGODN和poly(I:C)单独或者联合作为MUC1多肽抗原的佐剂免疫小鼠,通过ELISA方法检测免疫血清中抗体效价及应用细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验对各组间免疫水平的差别进行评价。结果CpGODN与poly(I:C)联合应用体外能有效诱导脾细胞分泌IL-12p40和TNF-α。体内实验联合组小鼠血清中TNF-α和IFN-γ水平升高,IL-4水平降低。小鼠血清中抗MUC1多肽抗体效价各组间差别无统计学意义(P>0·05),但细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicityTlympho-cyte,CTL)杀伤实验显示联合组能有效杀伤靶细胞。结论CpGODN和poly(I:C)联合作为可溶性多肽MUC1的免疫佐剂,与单用相比能有效地增强机体的抗肿瘤免疫应答反应。

牙龈卟啉单胞菌在消化系统肿瘤中的作用及机制研究

越来越多的证据表明牙周疾病是导致消化系统肿瘤的一个重要危险因素,而牙龈卟啉单胞菌(Pg)是引起牙周疾病及慢性牙周炎的关键病原体。大量研究表明,牙龈卟啉单胞菌除在口腔中具有局部作用外,还可能引发其他器官肿瘤,该细菌可能与胃和结肠的癌前病变、食管鳞状细胞癌、头颈部肿瘤和胰腺癌存在密切关系。本文重点总结了牙龈卟啉单胞菌和消化系统肿瘤之间的关系及相互作用机制的最新研究进展。