肝细胞肝癌NTS的表达与炎症微环境形成和肿瘤上皮间质转化及预后的相关性研究

目的:利用免疫组织化学染色法(IHC)检测肝细胞肝癌(HCC)中神经降压素(NTS)的表达,并探讨HCC中NTS/IL-8通路的激活与炎性微环境形成和肿瘤上皮间质转化(EMT)及临床预后的关系。方法:收集本院2007年11月至2009年7月期间进行部分肝切除术后确诊为肝细胞癌(HCC)、随访资料完整的肝癌患者64例。采用IHC法检测肝癌及相应癌旁正常组织中NTS,多种炎症因子和EMT相关蛋白的表达情况,包括IL-8、VEGF、MMP-9、CD68、E-cadherin,β-Catenin和Vimentin的表达水平,并比较不同NTS表达对HCC患者总生存时间(OS)的影响。结果:NTS在HCC中表达率为17.19%(11/64),NTS阳性HCC标本中IL-8阳性率较NTS阴性标本明显增加(90.91%vs.41.17%),二者表达呈正相关(R2=0.298,P=0.006)。NTS和IL-8双阳性(NTS+IL-8+)HCC标本中,VEGF和MMP-9表达显著增加。同时,NTS+IL-8+HCC细胞EMT特征明显,表现为E-Cadherin表达降低和Vi mentin表达升高。在肿瘤中NTS和IL-8共表达与患者的临床疗效呈正相关,术后NTS+IL-8+HCC患者的死亡率比非NTS和IL-8共表达的患者高2.5倍(P=0.022)。NTS+IL-8+HCC患者的OS显著缩短[(24.65±4.45)个月vs.(75.79±16.32)个月,P=0.013)],而死亡风险明显升高,其预期危险比(HR)为3.457。结论:在部分HCC中存在NTS/IL-8炎症通路的异常活化,NTS的高表达与炎症微环境形成和肿瘤EMT与肝癌患者预后较差密切相关。

上皮间充质转化与肿瘤干细胞的研究进展

上皮细胞间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在胚胎发育和肿瘤发生中具有重要作用,EMT可使上皮性肿瘤细胞获得间充质细胞表型,在增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力的同时,也使得肿瘤细胞具有自我更新能力等干细胞样特性。多种转录因子、信号转导通路、microRNAs及细胞微环境等因素共同调控此过程。EMT与肿瘤干细胞之间有密不可分的联系,EMT可以促进肿瘤细胞获得干细胞特征,具有干细胞特征的肿瘤细胞高表达EMT标记分子,microRNA可同时调控EMT和细胞干性。阐明EMT与肿瘤干细胞的相互关系及其调控机制,有望为肿瘤转移与复发的靶向治疗开辟新思路。

生物信息学一致性相关系数法预测非小细胞肺癌的NP化疗方案药物敏感性基因

目的用生物信息学一致性相关系数(CCC)法预测非小细胞肺癌一线化疗方案NP方案(长春瑞滨+顺铂)药物敏感性基因。方法使用5种统计学方法:Pearson相关分析、Spearman相关分析、Welch's t-test、ANCOVA和rank-based ANCOVA,从NCI 60数据库筛选药物敏感性基因,通过CCC筛选非小细胞肺癌患者化疗药物敏感性基因。利用在线数据库DAVID进行KEGG通路富集分析。结果筛选出可能应用于预测非小细胞肺癌化疗药物敏感性基因:顺铂的药物敏感性基因主要富集在蛋白聚糖、细菌侵袭上皮细胞通路中;长春瑞滨的药物敏感性基因主要与癌症信号通路、蛋白聚糖有关。结论生物信息学CCC法可应用于筛选出预测非小细胞肺癌化疗药物敏感性的基因,可能为将来构建NP方案精准化疗模型提供研究基础。

影像组学在免疫治疗方面的应用现状

影像组学在医学图像中挖掘信息,对癌症的诊断、预后和治疗疗效预测具有极为重要的地位。当前,免疫治疗成为癌症治疗的热点,极大地推动了肿瘤学领域的发展。影像组学特征具备无创、可重复、常规获取以及量化肿瘤异质性等优点,因此可作为免疫治疗疗效的生物标志物。本文将阐述影像组学的特征提取及其数据分析,将其作为生物标志物在免疫治疗中的研究进展,包括预测治疗反应和不良事件,为影像组学在个体化治疗中的应用提供了新的见解。

经典Wnt信号通路与人类肿瘤

近年来,随着对肿瘤的深入研究,Wnt信号的研究也受到了高度的关注.Wnt信号通路是一条在进化上保守的信号途径,在控制胚胎发育,调节细胞生长、迁移、分化,调控正常组织重建等生命活动中发挥重要的作用,其异常活化与众多人类肿瘤的发生、发展密切相关.Wnt信号途径异常的核心是β-catenin在细胞内累积,并通过其下游途径引起特异靶基因的转录.本文着重介绍Wnt/β-catenin信号转导通路的研究进展及其与肿瘤的关系,了解该通路在肿瘤发生过程中的具体分子机制有助于为临床诊断提供依据,为早期干预治疗提供方法.

黄酮类化合物抗肿瘤作用研究进展

黄酮类化合物是一类存在于多种植物中的多酚化合物 ,研究发现它们具有许多潜在的药用价值 ,其中抗肿瘤作用是一个研究热点。其抗肿瘤作用主要表现在抗细胞增殖、诱导细胞凋亡、干预细胞信号转导和增强抑癌基因活性及抑制癌基因表达等功效。本文就黄酮类化合物抗肿瘤作用的研究进展进行综述。

基于3D细胞培养系统的肺癌类干细胞的分离和鉴定

目的:本研究建立三维细胞培养方法(3D)以分离和鉴定肺癌类干细胞,并与二维细胞培养方法(2D)比较,初步探讨该方法在评价肺癌体外增殖、凋亡、侵袭和药物反应性方面的应用。方法:将人肺腺癌细胞系A549以1×104个/孔的细胞与RPMI1640和伊格尔基础培养基(basal medium of eagle,BME)制成细胞悬液,培养7 d,收集细胞采用流式细胞仪进行类干细胞表型检测,以及体外成球、耐药性、体内成瘤等干细胞功能鉴定,并将3D与2D细胞培养的A549细胞进行比较。结果:细胞表型检测证明3D系统培养的A549细胞中CD44和CD326阳性比例升高,CD24阳性比例下降,细胞体外成球率显著升高(28.50%±1.17%vs.8.67%±0.80%,P<0.01)对顺铂耐药性显著提高。加药后48 h为58.17%±2.19%vs.33.27%±5.76%(P<0.01),加药后72 h为41.70%±5.81%vs.27.30%±4.25%(P<0.01),体内成瘤时间显著缩短[(20.75±0.85)d vs.(60.25±1.49)d,P<0.01]。结论:3D培养的肺癌细胞中获得更高比例的类干细胞样细胞,具有体内成瘤快、体外成克隆团率高、耐药性提高的特征。

磷酸钙法转染瘤细胞效率的优化

为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数：转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细胞传代次数等.以荧光显微镜观察GFP表达、半定量RT-PCR和western blotting评估转染效率.结果显示,转染前细胞50%~60%汇合率、8μg质粒用量（直径30 mm培养皿）、20~30 min沉淀形成时间及6 h孵育时间转染效率较高;细胞传代次数及抗生素有无对转染效率影响不显著,但血清在实验条件下是必不可少的.转染48 h后,GFP表达进入高峰期、ANXA2 mRNA和蛋白水平下调（P〈0.05）.

ITSN1-S的SH3功能域对恶性胶质瘤细胞U87增殖能力的影响

目的:观察ITSN1-S的SH3功能域对恶性胶质瘤细胞U87增殖能力的影响,并探讨其相关分子机制。方法:构建标记mGFP荧光的慢病毒表达质粒PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro。将ITSN1-S的不同片段的PCR产物:EH1-EH2、EH1-EH2-CC、ITSN1-S,分别连接到慢病毒表达质粒载体中。用HEK-293T细胞分别包装上述四种质粒的慢病毒后感染U87细胞,嘌呤霉素(puro)筛选出稳定表达的细胞,分别命名为vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87、ITSN1-S/U87。Western blot检测目的蛋白的表达,增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测各组胶质瘤细胞的增殖能力。结果:增殖实验和软琼脂克隆形成实验显示与vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87细胞相比较,ITSN1-S/U87细胞的增殖能力显著增强(P<0.05),但vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87三组细胞之间的增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。增殖实验结果显示第6天时,ITSN1-S/U87、EH1-EH2-CC/U87、EH1-EH2/U87、vector/U87细胞数分别为(29.16±1.19)×104、(22.82±0.94)×104、(22.17±0.90)×104、(21.93±1.15)×104个;软琼脂克隆形成实验表明第21d时,ITSN1-S/U87克隆形成数高达(6.37±0.41)×103个,而EH1-EH2-CC/U87、EH1-EH2/U87和vector/U87克隆形成数分别为(2.65±0.34)×103、(2.23±0.31)×103和(2.1±0.29)×103个。结论:过表达ITSN1-S能显著提高胶质瘤细胞U87的增殖能力,这种促进细胞增殖的作用可能是通过SH3功能域来实现的。

EHD2负向调控前列腺癌细胞的增殖与转化能力

目的:研究EHD2在前列腺癌中的表达以及EHD2表达水平对前列腺癌细胞系增殖与转化能力的影响。方法:免疫组织化学方法检测EHD2在14例前列腺癌组织及7例前列腺增生组织中的表达。用EHD2干扰表达质粒、过表达质粒和对照载体分别转染293T细胞,制备慢病毒,感染DU145细胞,建立稳定细胞系。用Western blot技术检测EHD2表达情况。采用细胞计数法、二维克隆形成实验、Soft Agar实验分别检测EHD2沉默或过表达对前列腺癌细胞增殖能力、克隆形成能力和转化特性的影响。结果:免疫组织化学显示EHD2在前列腺癌组织中表达量明显低于前列腺增生组织。EHD2干扰表达后DU145细胞的增殖能力、二维克隆形成能力、三维克隆形成能力均明显增强(P<0.01);EHD2过表达后DU145细胞的增殖能力和三维克隆形成能力均减弱(P<0.01和P<0.05)。结论:EHD2的表达水平对DU145前列腺癌细胞的增殖与转化特性具有明显的调节作用,EHD2可能是前列腺癌的新抑癌基因。

cMyc抑制剂10058-F4诱导白血病THP1细胞凋亡和DNA损伤的机制

目的研究cMyc抑制剂10058-F4对白血病THP1细胞的抑制作用及分子机制。方法体外培养人白血病THP1细胞,加入不同浓度(1、5、10、50、100μmol/L)的cMyc抑制剂10058-F4处理THP1细胞,CCK-8分析药物对细胞生长抑制作用;Calcein/PI和JC-1荧光染色分别检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot分析凋亡相关蛋白(Cleaved-Caspase-3、Bax)和DNA损伤应答相关蛋白(pATM和γH2AX)表达。结果不同浓度10058-F4处理THP1细胞后明显抑制细胞的增殖,并呈浓度依赖和时间依赖性;10058-F4呈浓度依赖地诱导THP1细胞凋亡,并且降低线粒体膜电位水平,差异具有统计学意义(P<0.05);10058-F4可诱导THP1细胞发生G2/M期阻滞,上调促凋亡蛋白(Cleaved-Caspase-3和Bax)以及DNA损伤应答相关蛋白(pATM和γH2AX)的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论cMyc抑制剂10058-F4对白血病THP1细胞具有凋亡诱导作用,可能与其诱导细胞DNA损伤并激活相关信号途径有关。

miR-448通过抑制上皮间质转化抑制肺癌细胞增殖和运动能力

探讨mi R-448对肺癌细胞增殖和运动的影响及其分子机制。采用实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction)检测原发肺癌组织和癌旁正常组织mi R-448表达水平。转染mi R-448 mimic和inhibitor至肺癌A549细胞系,通过MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)、平板克隆形成和Transwell实验观察mi R-448表达对A549增殖和运动能力的影响;利用Western blot检测EMT(epithelial-mesenchymal transition)标志物蛋白表达水平,通过实时荧光定量PCR检测EMT相关转录因子m RNA表达水平。实时荧光定量PCR显示较癌旁正常组织相比,mi R-448在原发肺癌组织中表达降低。MTT和平板克隆形成实验显示,过表达mi R-448抑制A549细胞增殖和运动能力;降表达mi R-448增强A549细胞增殖和运动能力。Western blot显示降表达mi R-448能下调上皮标志物E-cadherin,上调间质标志物Vimentin表达水平。实时荧光定量PCR显示降表达mi R-448能上调EMT相关转录因子Twist1和ZEB1 m RNA表达水平。mi R-448可通过抑制EMT抑制肺癌进展。

顺铂诱导耐药蛋白BCRP与EHD2表达上调并在细胞表面的富集

目的:建立顺铂耐受的人肺腺癌A549/DDP细胞株,研究EHD2(EH domain-containing protein-2)与肿瘤细胞药物耐受的潜在关系。方法:以DDP为诱导剂,采用低浓度逐步增量诱导方法建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,采用MTT法测定药物敏感性,免疫印迹法检测耐药蛋白BCRP及EHD2蛋白的表达水平,免疫荧光方法检测BCRP及EHD2的细胞定位。结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为7.6;免疫印迹结果显示BCRP在耐药细胞系A549/DDP中的表达明显高于其亲本细胞A549,EHD2蛋白在耐药细胞系的表达略有增高;免疫荧光成像显示EHD2蛋白在细胞膜表面富集,并与BCRP耐药蛋白共定位。结论:BCRP和EHD2在获得性耐药细胞中富集,并于细胞膜表面共定位,提示内吞蛋白EHD2可能调控耐药蛋白BCRP的膜稳定性,从而介导肿瘤细胞耐药。

联合检测血清miR-125b和AFP对原发性肝细胞癌的诊断价值

目的：探讨血清中miR-125b作为原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的血清标志物的可能性和联合检测miR-125b和AFP对HCC的诊断价值。方法：通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测65例HCC患者和30例健康对照组的血清miR-125b表达量，分析其对HCC的诊断价值，以及与HCC临床病理资料参数间的关系。结果：HCC患者组血清miR-125b表达与对照组相比较低，且两者的差异有统计学意义（P0.05）。miR-125b的表达与患者肝硬化、肿瘤大小和TNM分期有关，且差异有统计学意义（P〈0.05）。单独检测miR-125b的ROC曲线下的AUC为0.917（95%CI：0.851～0.960，P〈0.001），灵敏性为85.9%，特异性为93.5%，联合miR-125b和AFP检测的ROC曲线下的AUC为0.951（95%CI：0.894～0.982，P〈0.001），灵敏性为92.9%，特异性为93.5%，检测AFP〈20μg/L的HCC患者血清miR-125b的ROC曲线下的AUC为0.889（95%CI：0.776～0.957，P〈0.001），灵敏性为84.0%，特异性为87.1%。结论：联合检测血清miR-125b和AFP对早期诊断原发性HCC具有重要的临床价值。

空间转录组学的发展及其应用进展

空间转录组学是一项颠覆性的生物学技术,融合了分子生物学和空间成像技术,旨在揭示组织或细胞中基因表达的空间分布。其通过对转录组数据进行分析,可以全面理解基因在组织或细胞水平上的空间表达规律,从而深入揭示生物系统中基因调控的时空特征及其在生物学过程中的功能和意义。该技术为发育生物学、免疫学、医学以及农业等领域的研究提供了前所未有的帮助,为理解细胞分化、农作物发育等关键过程提供了支撑。详细介绍了空间转录组技术的发展进程、数据分析及其在医学以及农业领域中的主要应用,提出了该领域所存在的问题并对未来发展趋势进行展望。

上皮型钙粘蛋白与肿瘤的关系及其血清学检测

上皮型钙粘蛋白 (E Cadherin)是一种重要的细胞粘附分子和信号转导分子 ,参与组织形态发生、胚胎发育和细胞命运过程 ,其作为细胞粘附分子的功能是控制细胞移动。已发现E cadherin与肿瘤的发生发展有密切关系 ,并已有一些资料报道血清可溶性E Cadherin与恶性肿瘤的病情有一定关系 ,并试图探讨其作为一种新的诊断标志和治疗效果、预后判断的一个指标。本文就近几年有关E Cadherin与肿瘤的关系及其血清学检测进行综述。

血清可溶性钙粘蛋白作为一种新的肿瘤标志物研究进展

上皮型钙粘蛋白是重要的细胞粘附分子和传导分子 ,它在组织形态发生、胚胎发育和细胞凋亡等过程中均起重要作用。作为细胞间粘附分子上皮型钙粘蛋白是通过控制细胞转移来实现其功能的。最近的研究提示 :肿瘤的发生和发展与上皮型钙粘蛋白的功能失调有关 ,而且 ,临床上血清可溶性上皮型钙粘蛋白与肿瘤的分级及预后有一定的相关关系。本文就这种新的标志物与肿瘤的诊断、治疗及预后的关系研究进展进行综述。

急性髓系白血病中垂体肿瘤转化基因-1的表达及临床意义

目的研究垂体肿瘤转化基因-1(PTTG1)在急性髓系白血病(AML)中表达水平及其临床意义。方法收集初治和复发的AML患者骨髓标本,对照组收集非恶性血液肿瘤患者骨髓标本,荧光定量PCR方法检测PTTG1基因的表达水平,并分析其在不同临床特征、FAB分型和疾病分层的AML患者间的表达差异;根据AML患者外周血血细胞进行分类计数和骨髓幼稚细胞比例分组,分析不同组别间PTTG1的表达差异。结果PTTG1基因在AML患者骨髓细胞中表达水平明显高于对照组(P<0.05),初治AML和复发AML之间表达差异不具有统计学意义;不同FAB诊断分型中,M2型AML中PTTG1的表达水平最高,M1型中表达最低,但是差异无统计学意义(P>0.05);根据疾病危险分层分析,低危组中PTTG1的表达水平最高,高危组中PTTG1的表达水平最低,但组间差异无统计学意义(P>0.05);重度贫血和中度贫血AML患者中PTTG1的表达水平明显低于轻度贫血和正常AML患者,差异有统计学意义(P<0.05);根据外周血白细胞和血小板计数以及骨髓幼稚细胞比例设定的不同组别中,PTTG1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论PTTG1在AML患者骨髓细胞中表达水平明显高于对照组,其表达水平可能与患者的贫血程度有关。

雷公藤红素诱导多发性骨髓瘤H929细胞凋亡

目的:研究雷公藤红素对人多发性骨髓瘤H929细胞凋亡的诱导作用及分子机制。方法:体外培养H929细胞,加入不同浓度(0.5、1、5和10 mg/L)的雷公藤红素处理细胞,CCK8法分析药物对细胞活力的抑制率;annexin V-PE/7-AAD双染法检测雷公藤红素对H929细胞凋亡的影响;流式细胞术分析雷公藤红素处理的H929细胞中线粒体膜电位水平;彗星电泳实验分析雷公藤红素对细胞DNA损伤的诱导作用;Western blot分析不同浓度的雷公藤红素对H929细胞中凋亡相关分子P53、XIAP、cleaved PARP-1和cleaved caspase-3的蛋白水平以及线粒体细胞色素C释放的影响。结果:不同浓度雷公藤红素处理H929细胞后明显抑制细胞的活力,并呈浓度依赖和时间依赖性。雷公藤红素呈浓度依赖地诱导H929细胞凋亡,并且降低线粒体膜电位水平(P<0.05)。彗星电泳实验结果显示雷公藤红素可以诱导H929细胞的DNA损伤。Western blot实验结果显示雷公藤红素处理的H929细胞中,促凋亡蛋白P53、cleaved PARP-1和cleaved caspase-3的蛋白水平明显升高,而抗凋亡蛋白XIAP的表达水平明显降低(P<0.05)。雷公藤红素可以促进线粒体中细胞色素C的释放,并依赖于caspase-9而激活caspase-3。结论:雷公藤红素对多发性骨髓瘤H929细胞具有凋亡诱导作用,其机制可能与诱导DNA损伤、激活线粒体凋亡途径有关。

协同致死效应在肿瘤研究中的现状

包括导致基因功能缺失在内的大部分致癌突变均不是传统的小分子抑制剂的直接作用靶点。尽管对致癌相关突变的了解越来越多,但目前肿瘤的靶向治疗依然存在问题,协同致死效应(synthetic lethality effects)的应用有望成为肿瘤靶向治疗中的新突破。因此,寻找能够产生协同致死效应的基因突变组合对于肿瘤靶向治疗有着重大的作用,本文就协同致死效应概念的提出与演变、相互作用形式、相关筛选技术以及临床治疗策略、意义和挑战等方面进行综述。