新形势下高校生物实验室安全教育体系构建

实验室安全教育作为实验室风险管理中最经济和最有效的方法,是加强生物实验室安全管理工作的重要方式之一,应贯穿实验室管理工作的始终。因此,建立健全高校生物实验室安全教育体系迫在眉睫。构建以安全文化素质形成为核心,以管理规范为“刚”、文化熏陶为“柔”,课堂内外相结合,保障措施并行,“四位一体”的高校生物实验室安全教育体系,搭建以教学为推手的实施框架,势必有较好的教学效果,对落实国家政策方针、保障各类科研平台与实验室的实验安全,有着不可替代的作用,值得在高校生物实验室范围内推广应用。

间充质干细胞外泌体联合ALR15mRNA减轻APAP引起的肝细胞凋亡

目的:探讨间充质干细胞外泌体(MSC-Exos)联合肝再生增强因子(ALR15)mRNA对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝细胞凋亡的影响。方法:通过NAT粒径检测、TEM电镜检测以及Western Blot鉴定提取的MSCExos。通过免疫荧光和Western Blot鉴定体外合成ALR15 mRNA。通过荧光染色、流式细胞术和Western Blot检测外泌体联合ALR15 mRNA对APAP引起的肝细胞凋亡的影响。结果:成功分离获得了MSC-Exos,并体外成功合成了ALR15 mRNA。外泌体联合ALR15 mRNA可进入肝细胞,通过抑制ROS的生成使APAP诱导的肝细胞凋亡减轻,且外泌体联合ALR15 mRNA比仅添加外泌体的抗凋亡效果更好。结论:MSC-Exos联合ALR mRNA可通过抑制ROS产生减轻APAP诱导的肝细胞凋亡,为干细胞外泌体联合ALR15 mRNA治疗APAP引起的肝细胞凋亡提供一个新的治疗思路。

脐带间充质干细胞条件培养液促进人胚胎干细胞分化为造血细胞

目的利用人脐带间充质干细胞造血支持的特性,优化人胚胎干细胞造血分化方案。方法利用组织块培养法分离扩增人脐带间充质干细胞,收集条件培养液。以小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层培养人胚胎干细胞,再用拟胚体培养液诱导拟胚体形成。分别用条件培养液和拟胚体培养液培养拟胚体,再用流式细胞术检测EB中造血标志CD45和CD34的表达。结果利用组织块培养法获得大量形态均一、增殖迅速的脐带间充质干细胞;间充质干细胞条件培养液诱导8d后,拟胚体中的CD45表达60%以上,CD34表达30%以上,远高于含有BMP4的拟胚体培养液的诱导率。结论人脐带间充质干细胞条件培养液可促进人胚胎干细胞的造血分化,并避免动物源污染,节约成本。

薄型子宫内膜大鼠95%乙醇造模法的实验研究

目的:探讨薄型子宫内膜大鼠三种造模法的应用价值,探索模型稳定性。方法:采用95%乙醇、脂多糖(LPS)、机械搔刮三种方法建立薄型子宫内膜大鼠模型,术后1周收取子宫内膜组织,HE及Masson染色检测子宫内膜厚度及纤维化面积,免疫组化检测细胞角蛋白CK19及波形蛋白Vimentin的表达以评估子宫内膜细胞的再生情况;通过线粒体凋亡诱导因子2的表达了解子宫内膜细胞线粒体凋亡情况。结果:三种方法均可使大鼠子宫内膜变薄,但光镜下机械组和LPS组子宫内膜结构紊乱,厚薄不均,不能均一地比较子宫内膜厚度,不利于后续实验的开展。与对照组相比,95%乙醇组化学损伤恒定、程度适合,子宫内膜变薄,纤维化面积增大;免疫组化染色95%乙醇组子宫内膜CK19和Vimentin表达均明显较少,线粒体凋亡诱导因子2显著增多。结论:95%乙醇造模法模拟薄型子宫内膜大鼠模型稳定且高效,可用于后续的科学研究。

白脂素抑制AMPK/SIRT1信号通路加重氧化应激诱导的骨髓间充质干细胞损伤

目的:探讨白脂素(asprosin,Asp)对双氧水(H_(2)O_(2))诱导的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)损伤的作用及机制。方法:建立H_(2)O_(2)诱导BMSC损伤模型。实验分为对照(Control,Ctrl)组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+Asp(2.5μg/mL)组和H_(2)O_(2)+Asp(5μg/mL)组。H_(2)O_(2)+Asp组细胞先用Asp预处理24 h,H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+Asp组均加入H_(2)O_(2)(200μmol/L)处理24 h。处理结束后收集细胞,CCK8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞内活性氧水平,荧光倒置显微镜观察线粒体膜电位,Western blotting检测各组细胞内p-AMPK、AMPK、SIRT1、caspase3蛋白的相对表达量。结果:与Ctrl组相比,H_(2)O_(2)组细胞活力下降,细胞凋亡率升高,细胞内ROS含量升高,线粒体膜电位降低,差异有统计学意义(P<0.05);p-AMPK、AMPK、SIRT1的表达无显著变化,caspase3的蛋白表达显著增加。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+Asp组的细胞活力降低,细胞凋亡率进一步增加,胞内ROS含量也显著增加且线粒体膜电位显著降低,呈浓度依赖趋势;p-AMPK和SIRT1的表达显著降低,caspase3的蛋白表达显著增加。结论:Asp通过抑制AMPK/SIRT1信号通路促进H_(2)O_(2)诱导BMSC凋亡,从而加重BMSC损伤。

蛋白磷酸酶PPM1F促进非小细胞肺癌的进展

目的:探讨蛋白磷酸酶PPM1F对非小细胞肺癌增殖和迁移的影响。方法:构建PPM1F敲低载体,通过Western blotting验证PPM1F的敲低效率。通过CCK-8实验、克隆形成实验、迁移实验、侵袭实验和流式细胞术检测PPM1F对非小细胞肺癌细胞功能的影响。结果:成功构建了PPM1F敲低质粒。敲低PPM1F抑制了非小细胞肺癌生长、增殖、迁移和侵袭能力。同时敲低PPM1F,非小细胞肺癌细胞凋亡率增加,细胞在G1期累积。结论:PPM1F在非小细胞肺癌中以癌基因的作用发挥功能。

水凝胶负载Erastin诱导子宫内膜癌细胞铁死亡的作用研究

目的:利用温敏性水凝胶泊洛沙姆407(P407)负载Erastin缓释系统诱导人子宫内膜癌细胞(Ishikawa)铁死亡。方法:构建并评估负载Erastin水凝胶复合物(P407^(Era))的物理表征、相变时间和缓释性能。实验分为对照(control,Ctrl)组、水凝胶(P407)组、Erastin处理(Erastin)组和水凝胶负载Erastin(P407^(Era))组。CCK-8检测细胞增殖情况,ROS试剂盒检测细胞内活性氧含量,TUNEL原位细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡,Mito-Tracker Red CMXRos检测细胞线粒体膜电位,Mito-FerroGreen检测线粒体内Fe2+含量,免疫荧光和RT-qPCR检测铁死亡相关分子的表达水平。结果:P407水凝胶的相变时间与浓度呈负相关,18%浓度的P407水凝胶复合物药物缓释性能较优。与对照组相比,P407组、Erastin组和P407^(Era)组的Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭均受明显抑制,且P407^(Era)组比Erastin组抑制增殖、迁移和侵袭作用更加明显;Erastin组及P407^(Era)组细胞活性氧水平、细胞凋亡相对数量显著升高;细胞线粒体膜电位和线粒体Fe^(2+)结果显示,Erastin组和P407^(Era)组细胞线粒体膜电位显著下降,且线粒体Fe2+含量显著升高;免疫荧光结果显示Erastin组及P407^(Era)组GPX4含量显著降低,NRF2含量无明显变化;Erastin组及P407^(Era)组TFR1、NCOA4和P53的mRNA表达水平显著升高。结论:温敏性水凝胶泊洛沙姆407负载Erastin缓释系统诱导人子宫内膜癌细胞发生铁死亡。

人胎盘源间充质干细胞与人脐血单个核细胞联合移植促进SCID鼠早期造血重建

目的:利用骨髓腔内注射(IBMI)技术初步探讨人胎盘源间充质干细胞(PMSC)联合脐血单个核细胞(MNC)共移植入SCID鼠体内后的早期造血重建效应。方法:将人胎盘组织经胶原酶消化、贴壁和传代培养获得人PMSC,运用流式细胞仪术(FCM)检测其表面标志,并将其诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,继而对其进行成骨分化、脂肪分化鉴定;以人PMSC和脐血MNC为供体,通过IBMI方法或结合静脉注射(IV)方法,将两种细胞联合或单独移植入经亚致死量辐照预处理的SCID受鼠体内,50只受鼠随机分为5组:联合移植A组(PMSC+脐血MNC,IBMI)、单独移植B组(脐血MNC,IBMI)、联合移植C组(PMSC经IBMI,脐血MNC经IV)、生理盐水对照D组(辐照后仅注射生理盐水,IBMI)、空白对照E组(不辐照仅注射生理盐水,IBMI),每组10只。在移植后14 d取各组SCID小鼠注射侧和对侧胫骨腔内骨髓细胞,并用FCM检测分析人CD34+、CD45+细胞的植入水平。结果:从人胎盘组织中成功分离和培养PMSC,FCM检测其表型正常,并成功向成骨和成脂肪细胞诱导分化;SCID小鼠移植后14 d,照射对照组小鼠仅剩4只存活,其他组小鼠全部存活,B组注射侧及对侧胫骨骨髓腔内的人CD34+、CD45+细胞的百分比均明显低于A组小鼠的注射侧和对侧。结论:人PM-SC可以提高脐血MNC的植入率,促进早期造血重建。

PTEN mRNA编辑的间充质干细胞对神经胶质瘤U251细胞杀伤作用研究

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有向肿瘤组织迁移趋化的特性,所以它被认为是一种携带特殊基因进行肿瘤的靶向治疗的理想载体。与不同形式的DNA载体相比,体外合成的mRNA更容易转染并且不会引入突变。利用间接共培养方法研究PTEN(gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)mRNA编辑的MSCs对U251-Luc细胞杀伤作用。体外转录合成PTEN mRNA,转染到MSCs,利用Western blot方法检测转染后PTEN蛋白表达情况,transwell共培养方法分析转染PTEN mRNA对MSCs肿瘤细胞迁移趋化性影响。利用活体成像仪和荧光显微镜检测在间接共培养条件下PTEN mRNA编辑的MSCs对U251-Luc细胞杀伤作用。体外成功合成PTEN mRNA,转染到U251-Luc细胞后能正确表达PTEN蛋白,并且在转染24 h表达最高。与对照组相比,转染PTEN mRNA后能一定程度提高MSCs细胞对肿瘤迁移能力(P<0.05)。PTEN mRNA编辑的MSCs培养上清能显著抑制U251-Luc细胞生长(P<0.05)。体外合成抑癌基因mRNA的方法为MSC介导的靶向基因治疗神经胶质瘤提供新思路。

体外合成EGFP的mRNA转染人脐带间充质干细胞的稳定性研究

目的鉴定人脐带间充质干细胞(hUCMSC),通过体外修饰增加体外合成mRNA转染hUCMSC的稳定性。方法流式细胞仪检测hUCMSC免疫表型,油红O和碱性磷酸酶染色分别进行成脂、成骨分化鉴定。体外合成EGFP的mRNA经polyA尾、帽子结构及碱基等方面的修饰转染hUCMSC,流式检测荧光强度。Trypan blue染色观察mRNA转染对细胞活性的影响。结果 hUCMSC高表达CD29、CD44、CD105,低表达CD34、CD45、HLA-DR,且向成脂、成骨方向分化。通过一系列修饰体外合成EGFP的修饰mRNA稳定性更好,且mRNA转染与DNA相比对细胞毒性更小。结论体外合成的mRNA经一系列的修饰后稳定性大大提高,可进入hUCMSC翻译成蛋白。

流体剪切应力对大鼠骨髓间充质干细胞MT1-MMP基因表达的影响

目的探讨流体剪切应力对大鼠骨髓间充质干细胞(ratbonemarrow-derived mesenchy malstem cells,rMSCs)中膜型基质金属蛋白酶1(Membrane type-1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)基因表达的影响,为阐明应力诱导rMSCs分化的分子机制提供一些实验依据。方法应用平行平板流动腔系统,给rMSCs施加不同大小和不同加载时间的层流剪切应力,用real-time PCR检测MT1-MMP基因mRNA的表达水平。结果 5,15,30 dynes/cm2剪切应力均能刺激rMSCs的MT1-MMP mRNA表达,且其作用呈时间依赖和强度依赖。p38抑制剂(SB202190)可以明显抑制这种作用,而PI3K抑制剂(wortmannin)却增强了这种效果。结论流体剪切应力可诱导rMSCs的MT1-MMP基因表达,其表达量与刺激时间和剪切应力的强度密切相关,这种作用可能通过p38MAPK和PI3K/Akt信号通路。

间充质干细胞条件培养基和细胞因子联合应用扩增造血干细胞

目的:优化造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)体外扩增方案,提高扩增效率。方法:从脐带血中通过免疫磁珠分选法获得CD34+HSCs;组织块贴壁法原代分离培养获得脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),扩增后收集条件培养基;将固定细胞因子组合与MSCs条件培养基联合应用于HSCs扩增培养,通过细胞计数、流式检测及集落分析来判定扩增效应。结果:联合培养方案的造血细胞的数量、CD34+HSCs的比例及集落形成的数量均明显多于单独利用细胞因子组合时。结论:MSCs条件培养基和细胞因子联合应用能明显提高HSCs扩增效率。

小鼠密质骨间充质干细胞的分离、培养及鉴定

目的：建立一种易操作的、高效的小鼠间充质干细胞（mMSC）的分离培养方法，并对其表面标志和多向分化潜能进行鉴定，为mMSC的获取提供了新的实验依据。方法：选取2～3周龄C57BL／6小鼠，取出双侧股骨、胫骨，冲出其内骨髓细胞并弃掉，将骨段剪成小块，胶原酶消化后用组织块培养法培养出MSC。倒置显微镜观察其生长过程，流式细胞术检测其表面标志，并对其进行成脂及成骨鉴定。结果：使用该方法分离培养的mMSC形态均一、生长良好，细胞形态呈成纤维细胞样，表达CD29和Scal-1，不表达CD34、CD45和CDllb，并具有成骨成脂潜能。结论：利用本操作方法，可以从小鼠密质骨中成功分离培养得到MSC，且高效易行。

HIV P55-gag蛋白促进骨髓间充质干细胞的老化

探索HIV P55-gag蛋白对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)老化的影响,进一步阐明HIV P55-gag蛋白抑制BMSC成骨分化的机理。原代分离、培养、纯化BMSC,再将其分两组进行处理,一组为常规培养对照组(BMSC_(con)),另一组为添加HIV P55-gag蛋白培养组(BMSC_(gag));通过计算培养5、10、15及20天的BMSC_(con)和BMSC_(gag)的群体倍增水平,比较增殖能力;将培养20天的BMSC_(con)和BMSC_(gag)分别标记Brdu,免疫荧光法检测Brdu掺入率,比较两组细胞的增殖水平;通过检测细胞衰老生物标记β-半乳糖苷酶,比较两组细胞的衰老程度;Western检测两组细胞衰老相关蛋白P21的表达强度;将两组细胞诱导成骨分化,比较其成骨分化能力。在培养15天和20天时,BMSC_(gag)群体倍增水平明显低于BMSC_(con);BMSC_(gag)的Brdu掺入率明显低于BMSC_(con),分别为(26±4.1)%和(45±3.7)%;β-半乳糖苷酶染色检测显示,BMSC_(gag)的衰老细胞数明显多于BMSC_(con),分别为(21±4.7)%和(8±2.1)%;BMSC_(gag)的P21的表达强度明显强于BMSC_(con);成骨诱导后,茜素红染色和ALP染色均显示,BMSC_(gag)的成骨分化能力明显弱于BMSC_(con)。HIV P55-gag蛋白促进BMSC老化,进而抑制其成骨分化能力。

不同浓度乙酰胆碱对骨骼肌干细胞增殖、分化的影响

目的探讨不同浓度乙酰胆碱对骨骼肌干细胞增殖和分化的影响及可能的机制。方法培养小鼠骨骼肌干细胞C2C12细胞。(1)采用实时定量PCR法及Western blotting法检测C2C12细胞毒蕈碱样乙酰胆碱受体M1~M5亚型表达情况。(2)将C2C12细胞分为对照组、乙酰胆碱1组、乙酰胆碱2组、乙酰胆碱3组、乙酰胆碱4组,分别加入乙酰胆碱0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L,分别培养24、48、72 h后,采用CCK8法检测细胞增殖情况,采用实时定量PCR法检测细胞增殖标志基因Pax7 mRNA表达。(3)取用诱导分化1 d后的C2C12细胞,分为对照2组、乙酰胆碱5组、乙酰胆碱6组、乙酰胆碱7组、乙酰胆碱8组,分别加入乙酰胆碱0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L,培养5 d,采用光学显微镜观察法观察各组肌管的形成情况,采用实时定量PCR法检测细胞分化相关基因生肌调节因子(MyoD)、肌细胞生成蛋白(MyoG)、生肌调节因子(MYf5)mRNA表达。结果 (1)M2受体mRNA及蛋白表达均为最高,M3受体mRNA及蛋白表达均为最低(P均<0.05)。(2)与对照组比较,乙酰胆碱1~4组各时点细胞增殖及Pax7 mRNA表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。(3)光镜下发现,与对照2组相比,乙酰胆碱5组C2C12细胞分化明显,且肌管数目略有增多;乙酰胆碱6~8组C2C12细胞分化被抑制,以乙酰胆碱8组分化为成熟肌管数目减少最明显。乙酰胆碱5、6组MyoG mRNA表达均高于对照2组(P均<0.05)。乙酰胆碱7、8组MyoG、MyoD、Myf5 mRNA表达均低于对照2组,且乙酰胆碱8组MyoG、MyoD、Myf5 mRNA表达均低于乙酰胆碱7组(P均<0.05)。结论高浓度乙酰胆碱可抑制C2C12细胞分化及其肌管形成,其机制可能与抑制分化相关基因MyoG、MyoD、Myf5的表达有关。

间充质干细胞通过旁分泌效应激活心脏干细胞迁移(英文)

目的:探索移植到心梗部位的间充质干细胞是否通过其旁分泌效应促进心脏干细胞迁移至心梗部位。方法:间充质干细胞(MSC)特征经流式细胞术鉴定其表面标志物特征及多向诱导分化实验确认其干性。经体外Transwell分析心脏干细胞迁移特征,利用VEGF,HGF及SDF-1α等受体特异阻断剂观察其在心脏干细胞迁移中的作用。在体利用左冠状动脉前降之结扎法复制心肌梗死模型。心梗后7 d,植入MSC到心梗及周边部位。细胞移植7 d后,流式细胞术分析其外周血中c-kit阳性的干细胞含量,免疫荧光组织化学技术分析心梗部位c-kit阳性的干细胞数目,同时行Western Blot分析心脏VEGF,HGF及SDF-1α的表达,一月后心导管技术测量心功能及胶原染色和HE染色确定梗死面积。结果:移植的MSC增加了心梗部位VEGF,HGF及SDF-1α的表达,并动员c-kit阳性的干细胞迁移至心梗部位。与对照组相比,MSC移植组明显降低了心梗面积,显著增加了血管密度,明显改善了左室心脏功能。体外迁移实验发现MSC条件培养基能够诱导心脏干细胞迁移,这个过程能被VEGFR、CXCR4及c-Met等受体特异阻断剂所阻断,且c-Met可能起主要作用。结论:移植的MSC通过其旁分泌效应激活c-kit阳性的干细胞迁移至心梗部位修复受损的心脏。

低强度脉冲式超声波上调细胞周期蛋白D1表达促进骨髓间充质干细胞增殖

背景:前期研究发现低强度脉冲式超声波可以促进人骨髓间充质干细胞增殖。目的:探讨FAK/PI3K/Akt信号通路在低强度脉冲式超声波促进人骨髓间充质干细胞增殖中的作用机制。方法:将购买的商品化人骨髓间充质干细胞复苏培养至第4代,分为0 mW/cm^(2)超声波组(对照组)、50 mW/cm^(2)超声波组、50 mW/cm^(2)超声波+PF-562271组,其中50 mW/cm^(2)超声波+PF-562271组在超声处理前加入1μL FAK/PI3K/Akt信号通路抑制剂PF-562271进行预处理。每隔24 h超声刺激1次,每次5 min,刺激3次后采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,Western blot法检测FAK及其下游靶基因和细胞周期蛋白D1的表达。结果与结论:①与对照组相比,50 mW/cm^(2)超声波组细胞增殖能力明显增强(P﹤0.05),使用PF-562271抑制FAK/PI3K/Akt信号通路后,细胞增殖能力明显降低(P﹤0.001);②与对照组相比,50 mW/cm^(2)超声波组FAK、p-FAK、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt和细胞周期蛋白D1的表达均上调(P﹤0.05);与50 mW/cm^(2)超声波组相比,50 mW/cm^(2)超声波+PF-562271组上述指标明显降低(P﹤0.05);③与对照组相比,50 mW/cm^(2)超声波组G_(1)期细胞比例减少(P=0.026),S期细胞比例增多(P=0.002);与50 mW/cm^(2)超声波组相比,50 mW/cm^(2)超声波+PF-562271组G_(1)期细胞比例升高(P=0.023),S期细胞比例降低(P=0.035);④结果表明,低强度脉冲式超声波可能通过FAK/PI3K/Akt信号通路上调细胞周期蛋白D1促进人骨髓间充质干细胞的增殖。

利用体外合成的mRNA编辑间充质干细胞对神经胶质瘤DBTRG细胞杀伤作用

目的探讨利用体外合成抑癌基因TRAIL-、PTEN-m RNA编辑的间充质干细胞(MSCs)对DBTRG细胞杀伤作用。方法利用体外反转录方法合成TRAIL-、PTEN-m RNA,转染MSC后用westernblotting方法检测TARIL及PTEN蛋白的表达情况,利用transwell共培养方法观察m RNA编辑的MSCs对DBTRG的迁移趋向性作用,利用荧光显微镜和活体成像仪检测在间接共培养条件下TRAIL-、PTEN-m RNA编辑的MSCs对DBTRG-LUC细胞的杀伤作用。结果体外合成的m RNA均能在MSCs中正确表达TRAIL、PTEN蛋白;与对照组对比两种m RNA编辑的MSCs对DBTRG细胞的趋向性均明显增强;TRAIL-、PTEN-m RNA编辑的MSCs培养上清(CM)均能显著抑制DBTRG细胞生长,并且TRAIL和PTEN共表达组存在着协同作用。结论利用体外合成抑癌基因m RNA的方法研究MSCs介导的双基因靶向对神经胶质瘤的杀伤作用,为今后临床利用人工合成的多基因m RNA靶向治疗肿瘤提供全新思路。

细胞上皮间充质转化转化态异质性及可塑性的最新研究进展

上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transi⁃tion,EMT)程序在上皮来源的恶性肿瘤转移过程中扮演着关键作用。EMT并不是简单地上皮态直接到间质态的二元过程,而是一种包含着中间过渡态的可动态编配的异质性生物学过程,包含着多种转化态(transition state):上皮态(epithelial state)、部分EMT(p-EMT state)状态和间质态(mesenchymal state)。本综述将从EMT转化态角度总结EMT异质性和可塑性在肿瘤转移中的最新研究进展。

ALYREF对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

目的探讨ALYREF在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法利用TCGA数据库分析ALYREF在肺腺癌中的表达及其与预后的关系;应用免疫组化验证肺腺癌及其癌旁组织中ALYREF的表达水平。构建沉默ALYREF的A549和H1299稳转细胞株;通过RTCA和克隆形成实验检测细胞增殖,采用Transwell实验评估细胞迁移,运用Western blot检测增殖、迁移及EMT相关蛋白的表达水平。RNA-seq测序沉默ALYREF的A549细胞及对照细胞,进行GO/KEGG通路富集分析,分析ALYREF可能参与的功能通路,并通过功能回复实验进行验证。结果TCGA数据库分析结果显示:ALYREF在肺腺癌组织中显著高表达(P<0.001);高表达ALYREF患者的总生存期(overall survival,OS)更短(P<0.05)。沉默ALYREF可以抑制A549和H1299细胞的增殖、迁移和EMT进程。RNA-seq测序显示:差异表达基因在TGF-β通路富集最明显;Western blot检测显示沉默ALYREF可抑制肺腺癌细胞中TGF-β的表达;功能回复实验显示激活TGF-β可以逆转沉默ALYREF引起的细胞迁移能力下降。结论ALYREF在肺腺癌组织中高表达,且与不良预后相关,可能通过TGF-β通路促进肺腺癌细胞的增殖、迁移和EMT。