PCR技术在检验医学中的应用

聚合酶链反应（Polymerase chaim rection，PCR）作为一项较新的科学技术检测方法，在检验医学领域中的发展及临床应用是有广阔前景的。为适应不同项目研究开发目的、不同的临床诊断对象需求，通过改变组成和反应条件及与其它先进技术相结合，PCR技术越来越被临床所重视。目前已有多种PCR技术，如多重PCR、不对称PCR、莹光标记PCR、

季节性时间序列分析在医院感染中的应用

目的为了研究医院感染人数与不同季节的关系.方法利用季节性时间序列的线性模型对1996～2002年的数据建模,并比较各个模型对2003年的数据预测能力,从而总结出最佳模型.结果最后得到4个模型,各模型的P值均＜0.0001,说明新建立的模型是可靠的;预测的结果表明最后一个模型的效果最好.结论季节性时间序列的线性模型能较好的模拟医院感染人数同季节的关系,并有较强的预测能力,从而为医院感染人数的预测提供了有效的工具.

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G2／M期检查点Chk1与Chk2的影响

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞术分析显示,30 mg.L-1DADS呈时间依赖性阻滞MGC803细胞在G2/M期(P<0.05);Northern blot检测表明,DADS不同时间作用MGC803细胞后,Chk1与Chk2 mRNA表达与未处理组差异无显著性(P>0.05);免疫细胞化学发现Chk1与Chk2表达与未处理组无明显改变(P>0.05);Western blot DADS在不同时间对MGC803细胞Chk1与Chk2总蛋白表达无改变(P>0.05),而磷酸化的Chk1表达呈时间依赖性增加(P<0.05),但磷酸化的Chk2无明显改变(P>0.05)。结论 DADS阻滞MGC803细胞G2/M期与磷酸化Chk1有关。

MCL1蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:MCL1(myeloid cell leukemia-1)与多种恶性肿瘤的发生、发展及转移相关。本文从临床样本和细胞水平检测胃癌组织中MCL1蛋白的表达水平,探讨MCL1蛋白在胃癌发生、发展中的作用。方法:采用S-P免疫组化法检测正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌组织芯片中MCL1蛋白的表达,Western blot检测MCL1蛋白在人胃癌BGC823、SGC7901、MKN28细胞中的表达。结果:免疫组化结果显示,MCL1蛋白表达定位于细胞的胞浆,着色呈黄色至棕黄色;正常胃黏膜、癌旁胃黏膜、胃癌中MCL1蛋白阳性表达率分别为18.18%(4/22)、54.17%(26/48)、83.33%(75/90);MCL1蛋白在胃癌中的表达高于癌旁胃黏膜及正常胃粘膜,癌旁胃黏膜与正常胃粘膜MCL1蛋白表达亦具有明显差异(P<0.05);MCL1蛋白阳性表达率在伴淋巴结转移组为93.48%(43/46),无淋巴结转移组为72.72%(32/44),两者差异有显著性意义(P<0.05);而与性别、年龄和肿瘤大小无关。S-P免疫组化法与Western blot结果显示MCL1蛋白表达与胃癌分化程度呈负相关。结论:MCL1蛋白表达与胃癌发生、分化程度和淋巴结转移相关。

Chk1/2转基因MGC803细胞系的建立与鉴定

目的构建Chk1/2基因的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌MGC803细胞,为研究Chk1/2功能奠定基础。方法参照野生型Chk1/2基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序法对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染入MGC803细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果菌液特异性PCR结果表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,测序分别证实为Chk1和Chk2基因,经NCBIBLAST分析与Genbank中Chk1基因的同源性为100%,编码的氨基酸同源性为100%,Chk2基因的同源性为99%,编码的氨基酸同源性为100%。G418筛选转染细胞4周后获得稳定转染空载体pcD-NA3.1(+)的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的MGC803细胞。经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在MGC803细胞中的表达比对照组明显增加。结论成功构建Chk1/2基因真核表达载体与Chk1/2高表达MGC803细胞,为研究二烯丙基二硫诱导MGC803细胞G2/M期阻滞的机制奠定了基础。

针刺补泻治疗面肌痉挛52例

目的:观察针刺补泻治疗面肌痉挛的疗效。方法:对52例面肌痉挛患者,采用针刺补虚泻实疗法治疗,并与常规针刺治疗43例进行对照观察。结果:针刺补泻治疗组在治愈率方面优于对照组(P<0.05)。结论:采用针刺补泻疗法治疗面肌痉挛具有治愈率高、操作简便安全的优点。

普通骨水泥假体柄置换治疗高龄股骨转子间粉碎性骨折治疗中的临床护理

目的:探讨普通骨水泥假体柄置换在高龄股骨转子间粉碎性骨折治疗中的临床护理。方法:2007年6月～2010年6月选用普通假体柄人工股骨头置换术治疗高龄股骨转子间粉碎性骨折36例,术前积极处理内科合并症以提高高龄患者的手术耐受性,尽可能早期手术。在保留0.8～1.0cm股骨矩下,转子间粉碎骨块在维持复位下经前后壁全皮质全螺纹钉固定,深放塑料栓子2～3cm,以增加假体柄在骨水泥中的固定量和长度,术后配合医生按时叩背、翻身、按摩骶尾部、膀胱冲洗、抗凝,防止骨科四大并发症。结果:36例术后均获6～36个月随访,平均住院14d,4周下地负重行走。2例并发心脑血管病而死亡,3例行走时轻度疼痛,31例活动良好,无感染、柄下沉或松动并发症、无压疮、泌尿系感染发生;2例肺炎,3例亚急性脑性脂肪栓塞治疗后痊愈。结论:普通假体柄用于高龄股骨转子间粉碎性骨折,转子间骨块采用全皮质全螺纹钉固定,同时以增加骨水泥固定量,能提高假体柄的固定强度和长度,积极护理,术后恢复快,可早期下地活动,并发症少,是一种较好的治疗方法。

TGF-β_1在哮喘小鼠气道组织中的表达及吡非尼酮的干预作用

目的观察TGF-β1致支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道黏液高分泌的机制及吡非尼酮的干预作用。方法选择45只BALB/c雌性小鼠,按随机数字法分为5组:正常对照组(A组,9只)、哮喘组(B组,9只)、哮喘/强的松干预组(C组,9只)、哮喘/吡非尼酮干预组(D组,9只)、哮喘/羧甲基纤维素钠组(E组,9只)。除A组用生理盐水致敏和激发外,其余各组均于第0、10天用0.1 mL鸡卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝凝胶混合液致敏,第14天开始每天用1%OVA激发30 min,连续激发7 d。每次激发前1 h用药物干预,给药途径灌胃给药。测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞总数和细胞分类计数,以及IL-4和TNF-α水平;采用AB-PAS对气道杯状细胞进行染色,用免疫组织化学法检测气道Muc5ac和肺组织中的TGF-β1蛋白表达。结果 C组BALF中的炎症细胞总数、嗜酸细胞和淋巴细胞分类组、IL-4、TNF-α水平,气道杯状细胞及气道Muc5ac蛋白较B组明显减低(P均<0.01),但两组肺组织中的TGF-β1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。D组BALF中的TNF-α、IL-4水平,气道杯状细胞及Muc5ac和TGF-β1蛋白表达显著低于A组(P均<0.01)。结论 TGF-β1在哮喘小鼠肺组织中的表达明显增加,其变化与气道Muc5ac蛋白表达密切相关;吡非尼酮能有效抑制肺组织TGF-β1表达而降低气道黏液高分泌;提示TGF-β1在哮喘气道黏液高分泌中可能起重要作用。

急性脑血管病时心肌酶谱的变化

目的 观察急性脑血管病时心肌酶的变化。方法 对７８例急性脑血管病患者和３６例健康查体者静 脉血清ＧＯＴ、ＬＤＨ、ＣＫ、α－ＨＢＤＨ于发病３天内进行检测。结果 血清ＧＯＴ、ＬＤＨ、ＣＫ、α－ＨＢＤＨ水平急性脑血管 病组明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），而脑出血组与脑梗死组患者之间心肌酶水平无明显差异（Ｐ＜０．０５），有意识障碍 与无意识障碍患者血清ＧＯＴ、ＬＤＨ、α－ＨＢＤＨ有显著性差异（Ｐ＜０．０５），ＣＫ有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论 急性脑血管患者有心肌酶谱的变化，其程度与病变范围及意识障碍程度相一致，与病变的性质无关。

婴幼儿骶管注用咪唑安定术后镇痛的研究

目的评价骶管注入咪唑安定用于婴幼儿下腹部手术后镇痛的临床效果。方法选择婴幼儿下腹部手术患儿 120例。随机分为4组。A组为1％利多卡因(1ml／kg)行骶管阻滞,B组为1％利多卡因+0．25％罗哌卡因(1ml／kg),C组为 1％利多卡因+50ug／kg咪唑安定(1ml／kg),D组1％利多卡因+0．25％罗哌卡因+50ug／kg咪唑安定(1ml／kg)。观察术后 24小时各时点镇痛、镇静效果及副作用。结果术后6小时B,C,D组疼痛减轻度明显优于A组(P<0．05)。两组术后疼痛客观评价B,C,D组明显优于A组(P<0．05)。镇静效果C、D组明显优于A,B组,4组不良反应无明显差异。结论骶管注入50ug／kg咪唑安定在婴幼儿下腹部手术时可产生良好的术后镇痛效果。

MMP-9和TIMP-1在肝门胆管癌中的表达和临床意义

目的 研究肝门胆管癌组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的表达特征及临床病理意义.方法 应用免疫组化S-P法检测MMP-9,TIMP-1在54例肝门胆管癌组织及15例正常胆管组织中的表达,对MMP-9和TIMP-1的表达与肝门胆管癌的临床病理参数进行分析.结果 MMP-9和TIMP-1的表达阳性率分别是79.6%和72.2%,均高于正常胆管组织中的表达（P〈0.01）.MMP-9和TIMP-1的表达与肝门胆管癌患者性别、年龄、肿瘤大小无关（P〉0.05）,而与分化程度、有无转移、手术方式、生存期相关（P〈0.05）.MMP-9在肝门胆管癌中的表达与TIMP-1的表达呈密切正相关.结论 MMP-9和TIMP-1 表达可以反映肝门胆管癌的临床病理特征、生物学行为、侵袭、转移及预后,可以作为判断肝门胆管癌恶性程度、转移及预后的重要参考指标.

彩超引导介入治疗腘窝囊肿23例

目的探讨彩超引导下腘窝囊肿介入治疗的价值。方法在彩超引导下穿刺囊肿并抽尽囊液，生理盐水反复冲洗囊腔后注入无水乙醇，5min后抽出，反复2～3次。结果23例中22例穿刺一次治愈，1例穿刺2次治愈。23例随访6个月，无复发。结论彩超引导下介入治疗腘窝囊肿操作简便，创伤轻微，安全可靠，效果显著，可重复操作。

维生素B6治疗原发性痛经的临床应用

目的临床观察维生素B6治疗原发性痛经的效果。方法2006年6月至2007年6月对确诊患有原发性痛经的门诊病人99例用单方维生素B6治疗12个周期。结果应用维生素B6治疗原发性痛经均取得了较好的效果,治疗效率高。结论维生素B6治疗原发性痛经,方法简单,副作用少,治疗效率高,价格较低,复发率亦低,不失为基层卫生机构简便易行有效的治疗方法。

食管鳞状细胞癌Fas、FasL蛋白表达及意义

采用免疫组织化学技术检测50例手术切除、病理证实的食管鳞状细胞癌组织F as及F asL蛋白表达。结果26.0%的标本有F as蛋白表达,68.0%的标本有F asL蛋白表达。F as蛋白表达与食管癌的病理分级有关,与临床分期和淋巴结转移无关;F asL蛋白表达与食管癌的病理分级、临床分期和淋巴结转移有关。

CT对壶腹旁憩室综合征诊断价值的探讨

目的探讨壶腹旁憩室综合征(Periampullary diverticula syndrome,PADS)的CT表现、诊断价值及分型。方法回顾性分析经内镜或手术证实的22例PADS患者的CT表现,所有患者均行螺旋CT扫描,并提出本病的CT分型。结果22例患者中,共22个憩室。表现为十二指肠降段内侧囊状含气影者13例,含气液平面7例,表现为液性囊状影2例。合并胆管结石11例(其中4例合并胆囊结石),胆囊结石5例,仅表现为肝外胆管轻度扩张4例,胆源性胰腺炎1例,胆管细胞癌1例。结论CT能清楚显示憩室及其胆胰系统并发症,是诊断PADS有效的影像检查方法。

探讨消除溶血对CKMB检测的影响

目的探讨在两种检测参数下标本溶血对CKMB检测的干扰。方法在Olympus AU400全自动生化分析仪上,利用速率法分别测定48份血样溶血前后在两种检测参数(参数A、参数B)条件下的CKMB值,并用统计学软件作相应的比较分析。结果参数A条件下溶血标本的CKMB值显著高于溶血前,溶血对CKMB的影响随着溶血程度的增加而增加。参数B条件下标本溶血(Hb<10g/L)前后的CKMB值无显著性差异。结论溶血对CKMB的检测有干扰,改变检测参数,可以极大得消除干扰,而不影响临床对结果的判断。