脑肿瘤组织中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶表达的研究

探讨Ｏ６┐甲基鸟嘌呤┐ＤＮＡ甲基转移酶（ＭＧＭＴ）表达与脑肿瘤对氯乙基亚硝脲（ＣＥＮＵｓ）耐药的关系。方法采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测５９例不同类型脑肿瘤组织ＭＧＭＴ蛋白表达水平，对其中３０例胶质瘤同时采用ＲＴ┐ＰＣＲ检测其ＭＧＭＴｍＲＮＡ表达水平，ＭＧＭＴｍＲＮＡ表达水平与ＭＧＭＴ活性进行相关分析。结果ＭＧＭＴｍＲＮＡ表达水平与ＭＧＭＴ活性正相关（ｒ＝０．９１１，Ｐ＜０．０１），非胶质瘤及转移癌ＭＧＭＴ蛋白表达阳性率明显较胶质瘤高，分别为９０％，７８％，７％（Ｐ＜０．０５）；不同个体胶质瘤ＭＧＭＴｍＲＮＡ表达有较大异质性，范围为０～１．２９，平均为０．５±０．３７，Ｍｅｒ－率为３７％；高、低级别星形细胞瘤ＭＧＭＴｍＲＮＡ表达无差异（０．４７±０．３６和０．４４±０．３４）；髓母细胞瘤有较高的ＭＧＭＴｍＲＮＡ表达水平（０．８０）。结论胶质瘤ＭＧＭＴ总体水平较低，为此ＣＥＮＵｓ作为化疗首选药提供了新的理论依据；但半数以上胶质瘤为Ｍｅｒ＋表型，提示对ＣＥＮＵｓ耐药，因而化疗前检测Ｍｅｒ表型以筛选Ｍｅｒ－个体进行化疗将进一步提高疗效。

神经干细胞和脑肿瘤干细胞相关性研究

1992年Reynolds从小鼠纹状体分离到神经干细胞(NSC),2003年Sing从脑肿瘤组织中分离到脑肿瘤干细胞(BTSC),这是神经科学领域发生的具有里程碑意义的两次突破性进展,其中NSC和BTSC之间的关系是当今神经肿瘤学界的热门话题。本文结合笔者近年的研究,介绍两者的相似性和不同点、BTSC是否起源于NSC,旨在为脑肿瘤起源细胞和分子病因研究提供新思路,为分子外科治疗寻找新靶点。

［3］Ⅰ标记胶质瘤单克隆抗体SZ39在脑肿瘤患者体内分布及药代动力学研究

１１例脑胶质瘤和其它颅内占位者，经静脉注射［３］标记抗人脑胶质瘤单克隆抗体ＳＺ３９２５．９～１０７．３ＭＢｑ／１００～３００μｇ蛋白．然后通过手术组织标本放射性强度测定，肿瘤ＳＰＥＣＴ扫描及血、尿标本分析，研究ＳＺ３９在脑胶质瘤患者体内分布及药代动力学参数。结果提示，ＳＺ３９可在人脑胶质瘤内浓集，为脑组织的１．９～４．８倍，平均３．２倍．ＳＰＢＣＦＴ可清晰显示肿瘤图像，而非胶质瘤性颅内占位，未见肿们显像。抗体在肿瘤内浓度可持续２周以上。血液中的半清除期快相为１·６ｈ，使相为３９ｈ。临床观察无明显不良反应。提示ＳＺ３９。可进一步应用临床导向诊断与治疗．

细胞周期蛋白依赖性激酶cdc2与恶性肿瘤发生发展的研究

cdc2在细胞周期调控中起着调控G2至M期的作用。在G2期后期,cyclinB与cdc2结合,形成有丝分裂促进因子(MPF),再由cdc25、cyclin H、cdk7等一些磷酸酶和激酶作用,使其激活,活化的MPF通过cdc2对细胞核内组蛋白H1、核纤维层蛋白A、B、C、核仁蛋白nucleolin等蛋白发生直接或间接磷酸化作用,从而诱导产生一系列变化,使细胞发生有丝分裂。cdc2的过度表达或缺乏,可使细胞周期进程发生紊乱,不能正常生长、分化。cdc2过表达往往导致细胞恶性增殖,形成肿瘤。现已证明cdc2过度表达与许多恶性肿瘤的发生、发展、预后有关,但与神经干细胞、胶质瘤干细胞之间的关系尚待阐明。

肿瘤拟态血管的发现与研究进展

肿瘤血管生成对于肿瘤的发生、发展是至关重要的,因此肿瘤血管生成模式的研究意义重大。Maniotis等提出了一种全新的肿瘤血管生成模式——拟态血管生成,他们利用CD34-PAS双重染色等方法来区分拟态血管和传统的肿瘤血管。拟态血管发生的分子调控涉及许多与内皮细胞和造血干细胞表型相关基因的异常表达。目前研究认为恶性程度高的肿瘤中才有拟态血管,所以对其研究可以更好地指导临床治疗和判断预后。肿瘤学界对拟态血管生成现象还存在许多争论,焦点集中在拟态血管是否是一种假象,以及其鉴定的可靠方法。拟态血管生成现象对目前单纯针对传统的肿瘤血管的治疗策略提出了挑战,它可能成为未来治疗高度恶性肿瘤的一个新的靶点。

建立脑肿瘤裸小鼠原位移植模型的方法探讨

目的探讨建立脑肿瘤裸小鼠原位移植模型的方法。方法于脑立体定向仪辅助定位下,分别将经体外培养的脑肿瘤干细胞球(SU-1和SU-2)和人多形性胶质母细胞瘤细胞系单细胞悬液缓慢注射至裸小鼠右侧尾状核;徒手将SHG44细胞皮下移植瘤组织块、人多形性胶质母细胞瘤体外细胞系移植成功获得的颅内肿瘤组织块和肺癌脑转移瘤组织块接种于裸小鼠右侧尾状核,HE染色检测不同来源肿瘤细胞致瘤率。结果细胞悬液注射法致瘤率为100%(45/45)。肿瘤组织块直接移植法致瘤率分别为:SHG44细胞皮下移植瘤为93.33%(14/15),人多形性胶质母细胞瘤体外细胞系移植瘤为98.46%(128/130),肺癌脑转移瘤为72.31%(47/65);裸小鼠死亡率为1.41%(3/213)。形成的可移植性肿瘤分为侵袭性明显和不明显两种类型,与亲本肿瘤特征一致。结论两种移植方法均可成功制备包括脑肿瘤干细胞在内的人胶质瘤裸小鼠原位移植模型,反映了亲本肿瘤最基本的致瘤性和侵袭性特征。细胞悬液注射法操作时间较长,但为体外培养的单个细胞和细胞球移植所必须;肿瘤组织块直接移植法可用于临床肿瘤、可移植性肿瘤的直接接种,操作时间短、效率高,适用于批量实验。

组织芯片技术与神经肿瘤研究

基因芯片技术在神经肿瘤研究中具有高通量分析分子变化的特点,因而正受到广泛关注。但因其检测到的仅是cNDA变化,因而其可靠性仍不肯定。本文介绍的组织芯片技术是在蛋白质甚至染色体水平对基因芯片结果加以验证的一种方法,与传统病理学相比,亦具有高通量特点。

转基因完全人抗体的制备及其抗肿瘤作用研究

肿瘤导向治疗中,由于所用鼠源性抗体的分子量大、免疫原性强、半衰期长及反复应用易产生人抗鼠抗体(human anti-murine antibody, HAMA)反应等弊端,使其在临床的应用受到很大限制.而采用基因工程技术改造的大部分小分子人源化抗体,由于亲和力较弱、产量低、制备费时和纯化费用高等原因,难以在临床上取得较好的疗效.1994年,美国Abgenix和Genpham两公司报告了利用转基因小鼠制备完全人抗体,从而解决了人体不能被随意免疫这一人抗体制备研究的难题.此后完全人抗体制备技术的不断发展成熟,所获人单克隆抗体(mAb)已具有较强的抗肿瘤活性.

脑肿瘤患者血液流变学指标变化的分析

本文对３６例恶性脑肿瘤、２５例良性脑肿瘤和９０例正常人进行了血液流变学指标的检测，对照研究发现：恶性脑肿瘤的高低切变率全血粘度和还原粘度、血浆粘度、血沉、Ｋ值、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数、纤维蛋白原及红细胞电泳时间等显著增高（Ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１）．良性脑肿瘤的各项指标与正常对照组比较均无明显改变（Ｐ＞０．０５），而良性和恶性脑肿瘤之间存在着血液流变学指标的不同变化，揭示良恶性脑肿瘤具有不同的血液流变性特点．

自噬及其在肿瘤中的作用研究

自噬(autophagy)是由Ashford和Porter在1962年发现细胞内有"自己吃自己"的现象后提出的,是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体(autophagosome),并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物,以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新[1].自噬在机体的生理和病理过程中都能见到,其所起的作用是正面还是负面的尚未完全阐明,对肿瘤的研究尤其如此,值得关注.……

肿瘤抑制基因p53表达与人脑肿瘤对氯乙基亚硝脲耐药

目的：探讨人脑肿瘤p53表达与对亚硝脲类抗癌药耐药的关系。方法：采用WesternBlot分析，对10株人脑肿瘤细胞的p53、ERCC2表达进行检测，并与肿瘤对二氯乙基亚硝脲（BCNU）及二氯乙基肉芥子亚硝脲（SarCNU）耐药性进行比较。结果：ERCC2表达与肿瘤对BCNU和SarCNU耐药相关。p53与BCNU和SarCNU耐药相关。多元回归分析，ERCC2＋p53与BCNU和SarCNU间的相关性明显提高。结论：ERCC2和p53基因表达在人脑肿瘤对亚硝脲类抗癌药耐药中起重要作用。

转基因人抗体的制备及其抗肿瘤研究进展

鼠源抗体及基因工程技术改造的各类人源化小分子抗体在肿瘤的导向治疗中虽然已显示出强大的抗肿瘤活性 ,但仍有许多不尽人意之处 ,直接限制了其临床疗效的提高。转基因人抗体制备技术的不断成熟 ,由仅转移较少部分人Ig发展为可转移大部分人Ig全套胚系基因 ,以产生高亲和力、高特异性的完全人抗体。应用该技术制备的抗体已进入肿瘤的动物实验阶段 ,并获得可喜的抗肿瘤效果 ,具有很大的发展潜力。

生物信息学及其在肿瘤研究中的应用

生物信息学是利用计算机对于生物大分子的结构和功能信息进行整理、储存和分析的技术 ,它目前已经成为生命科学的一个重要研究手段。在肿瘤研究领域的应用主要包括构建肿瘤相关的数据库、开发肿瘤治疗药物以及系统分析肿瘤基因表达谱。

白花蛇舌草在裸鼠胶质瘤间质化疗的实验研究

目的 探讨白花蛇舌草在可移植性人脑胶质瘤间质化疗的剂量及疗效 ,并探讨其作用机制。方法 将低分化人脑胶质瘤体外细胞系SHG 4 4移植于裸小鼠 ,制作成可移植性实体瘤模型 ,用不同剂量的白花蛇舌草及以博莱霉素为对照组 ,肿瘤间质内注射药物 ,观察实体瘤的瘤重及组织细胞形态的变化。结果 将白花蛇舌草每 1ml含总黄酮以芦丁计算不少于 0 2 5mg时 ,每日 1次 ,间质注射 0 5ml持续 12日后 ,肿瘤生长有明显抑制作用 (P <0 0 5 )。结论 白花蛇舌草有明显抑制肿瘤生长的作用。

神经干细胞分化与神经节细胞胶质瘤恶化相关分子研究

目的 神经干细胞分化障碍是否是神经胶质瘤发生的原因尚未定论,主要是分子变化规律还未阐明。本研究旨在探讨神经干细胞与神经节细胞胶质瘤分化的相关基因,为阐明胶质瘤起源的细胞分子病因创造条件。方法 对自建的神经节细胞胶质瘤恶变为多形性胶质母细胞瘤基因表达谱中的分化发育相关基因进行生物信息学聚类筛选,所得基因用RT PCR方法检测其在体外培养神经干细胞分化过程中的表达变化。结果 基因谱中的CXCR4、TN C、GLT1、IL1 RI、EGFR 8、CDC2、Ndr3和MAPKK4共8条基因的表达变化与神经干细胞分化相关,其中GLT1、CDC2和MAPKK4基因随神经干细胞分化而表达量下降,随神经节细胞胶质瘤恶性进展而表达量增高。结论 源于神经干细胞分化障碍所致的神经节细胞胶质瘤的进一步恶变(去分化)与神经干细胞分化过程中的基因GLT1、CDC2和MAPKK4等表达量呈负相关,在延伸研究中可作为胶质瘤起源细胞的分子病因的目标基因作诸如RNA干扰、基因转染或敲除等功能研究。

人胚胎神经干细胞体外培养及其增殖与分化的研究

目的 建立神经干细胞分离、培养及分化的鉴定技术 ,观察神经干细胞增殖、分化的特点。方法 从人胚胎海马区分离神经干细胞 ,采用无血清培养基 ,进行体外扩增培养、传代。采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化的神经细胞 ;利用流式细胞仪和细胞生长曲线检测神经干细胞的增殖能力。结果 从人胚胎脑海马区分离的细胞具有增殖和多向分化潜能 ,可进行传代培养 ,获得的细胞团中大部分为nestin表达阳性细胞。贴壁分化后可以出现NSE、GFAP表达阳性的细胞。结论 用上述方法分离培养的细胞能表达nestin蛋白 ,具有自我更新和增殖能力 ,并具有向神经元、星形胶质细胞分化的潜能 ,具备神经干细胞的特征 。

肿瘤起源细胞学说与争论

肿瘤干细胞学说认为大部分肿瘤来源于已转化成肿瘤起源细胞的单个细胞(肿瘤干细胞),只有肿瘤干细胞具有无限增殖、多向分化和体内外形成肿瘤的能力。然而对于肿瘤干细胞的起源仍有争论。肿瘤干细胞与正常干细胞具有许多相似的特征和信号通路,因而认为正常干细胞是肿瘤干细胞起源的最佳候选细胞。此外,细胞融合是发育和组织修复中必需的生理过程,它与肿瘤的基本特征有着紧密的联系,可能在肿瘤干细胞的发生过程中也起着重要的作用。

人脑胶质瘤细胞对诱导分化药物敏感性的研究

目的 优选人脑胶质瘤细胞诱导分化剂。方法 应用MTT法、形态学、GFAP免疫荧光等方法鉴定环已亚甲基二乙酰胺、二甲基甲酰胺、丁酸钠、二丁酰杯AMP、苯乙酸钠、苯丁酸钠、亚砷酸钠等7种诱导剂对人脑胶质瘤细胞系SHG-44的诱导分化效果。结果 亚砷酸钠、苯乙酸钠抑制肿瘤细胞增殖效果较差,苯丁酸钠、二丁酰环AMP、丁酸钠在1-2mM即可明显诱导人脑胶质瘤细胞多分化,表现为增殖抑制,胞突增长,GFAP表达升高现象。结论 人脑胶质瘤细胞对诱导分化剂苯丁酸钠、二丁酰环AMP和丁酸钠较为敏感,值得深入研究。

榄香烯在HuPBL-SCID小鼠体内对人脑胶质瘤协同免疫治疗作用的研究

榄香烯（Elemene）是从中药莪术中提取的抗癌新药,早期的实验研究表明它对肿瘤细胞有直接杀伤作用,是细胞毒类抗癌药;最近研究提示,它还有可能是一种免疫功能调节剂.本研究旨在阐明其在抗肿瘤免疫调节中的作用.取健康人外周血,分离单核细胞,加入含IL-2500U/ml的RPMI1640培养液,体外扩增4d,收集活化的HuPBL,尾静脉注射1.5×107·（0.5 ml）-1/只鼠,第14天重复注射1次.取指数增殖期的人脑胶质瘤体外细胞系SHG-44细胞（1）1.5×105·（0.5ml）-1/只鼠,于HuPBL 2次转输后次日,直接注射于SCID鼠右腋皮下.从接种日至皮下扪及微结节的时间为肿瘤增殖的潜伏期,尔后局部剃毛,用卡尺测肿瘤短径（a）,长径（b）,并根据公式计算肿瘤体积W=a2 X b/2.取肿瘤组织制备单细胞悬液,沿管壁加入到置有淋巴细胞分离液的试管内,常规收集淋巴细胞,按流式细胞计数仪和间接荧光原位杂交法鉴定.实验分组:（A）Lx+BsAb（抗 CD3-抗胶质瘤双特异性抗体）+IL-2+HuPBL;（B）BsAb+IL-2+HuP-BL;（C）IL-2+HuPBL;（D）HuPBL;（E）RPMI 1940.Lx1.5mg/只鼠,IL-2 500 U/只鼠,BsAb 200μg/只鼠均从腹腔给药,每天1次,至宰杀前1d,共观察28d.