从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区

目的从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列。方法首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,最终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型。结果共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列。没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5’端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率最高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03。33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次)。18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次)。Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异。结论利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因。

脑梗死患者单核细胞CD14^+CD16^+亚群及单核细胞-血小板聚集水平的检测及其意义

目的:通过检测脑梗死患者外周血单核细胞各亚群分布情况以及单核细胞-血小板聚集水平,探讨脑梗死患者外周血单核细胞状态、单核细胞-血小板聚集情况及其临床意义。方法:利用流式细胞仪(FCM)检测48例脑梗死患者及31例正常人外周血CD14、CD16、CD41的表达。结果:脑梗死组的CD14+CD16+亚群、单核细胞-血小板聚集比率与正常对照组比较显著增高(P<0.001);脑梗死组间的CD14+CD16+亚群、单核细胞-血小板聚集比率的差别不大(P>0.05)。结论:脑梗死患者单核细胞、血小板活性增高,因此检测单核细胞CD14+CD16+亚群及单核细胞-血小板聚集对于脑梗死患者早期诊断具有重要的临床应用价值。

肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移的危险因素分析

目的探究肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移的相关危险因素,为评估淋巴结转移风险提供重要参考。方法回顾性分析浙江省舟山医院胸心外科2015年1月~2020年4月收治的192例肺鳞癌患者的病例资料,根据有无淋巴结转移将患者分为观察组(n=43)和对照组(n=149),观察组患者有淋巴结转移,对照组患者无淋巴结转移。对比两组患者的临床病理特征,即性别、年龄、吸烟史、原发灶直径、病灶位置分布、病灶肺叶分布、CT征象、病灶CT值、病灶同侧纵隔最大淋巴结短径和长径、肿大的淋巴结数量及术前血清肿瘤标志物[包括癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCC)]的差异。采用单因素和多因素Logistic回归模型分析肺鳞癌纵隔淋巴结转移的相关危险因素。结果单因素Logistic回归分析结果显示,性别(P=0.041)、原发灶直径(P=0.018)、病灶位置分布(P=0.005)、病灶同侧纵隔最大淋巴结短径(P=0.019)、病灶同侧纵隔最大淋巴结长径(P=0.015)可能与肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移有关;多因素Logistic回归分析结果显示,性别(P=0.002)、病灶位置(P=0.003)和病灶同侧纵隔最大淋巴结短径(P=0.009)是肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移的独立危险因素。结论性别、病灶位置及病灶同侧纵隔最大淋巴结短径可能是肺鳞癌患者纵隔淋巴结转移最直接的危险因素。进一步分析得出,男性、中央型、病灶同侧纵隔最大淋巴结短径≥0.6cm的肺鳞癌发生纵隔淋巴结转移的可能性更大。

酰基辅酶A合成酶中链家族在肿瘤中的作用及机制研究进展

越来越多的研究发现,脂代谢失调在癌症中扮演着重要的角色。其中,脂肪酸代谢异常是脂代谢失调中极为重要的一环。酰基辅酶A合成酶(ACSs)激活脂肪酸是脂肪酸代谢的第一步,研究发现ACSs也与多种癌症发病有关。ACSs根据底物的碳链长度可以分为6个亚家族。本文就ACSs中链家族在多种肿瘤中的作用机制和靶点作一综述。

从兔外周血直接克隆IgG重链可变区

目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,最后将序列用Bioedit软件的Local Blast功能比对出Cγ的基因型,同时提交到IMGT/V-QUEST分析出所属的VH、D和JH胚系基因。结果获得25个克隆的插入子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的VH、D、JH胚系基因片段,以及Cγ基因第1个外显子(CH1)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同。37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个。VH-D-JH组合方式共出现18种,即使VH-D-JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异。结论从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性。

浸润性肺腺癌患者预后危险因素分析

目的分析影响浸润性肺腺癌患者预后的独立危险因素。方法选取2012年1月至2015年12月经舟山医院手术病理检查结果确诊为浸润性肺腺癌的患者368例,按随访截至时间生存情况分为死亡组(71例)和存活组(297例)。采用Kaplan-Meier法绘制所有患者术后5年生存曲线,并采用χ^(2)检验对所有患者的相关临床病理因素进行单因素分析,将单因素分析筛选出与患者术后生存有关的变量,纳入Cox回归比例风险模型进行多因素分析、建立回归方程,判定影响预后的独立危险因素。结果两组患者在Ki-67、肿瘤病理亚型、肿瘤类型、肿瘤大小、有无淋巴结转移方面比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而在性别、年龄、肿瘤生长部位方面比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。Ki-67指数、肿瘤大小均与患者的5年生存率呈显著相关(均P<0.05)。无淋巴结转移的患者5年生存率(91.1%)明显优于有淋巴结转移的患者(31.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。在不同的病理亚型中,以微乳头为主的肺腺癌患者5年生存率明显低于以附壁生长为主的患者(P<0.05)。而肿瘤类型为周围型患者的5年生存率明显优于中央型患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明,Ki-67指数和有无淋巴结转移均是影响浸润性肺腺癌患者预后的独立危险因素(均P<0.01),且高Ki-67指数与死亡的风险呈正相关(P<0.01)。而肿瘤大小、肿瘤类型以及肿瘤病理亚型与浸润性肺腺癌患者预后无明显相关性(均P>0.05)。结论较高的Ki-67指数与淋巴结转移是影响浸润性肺腺癌患者预后的独立危险因素。

肝细胞肝癌患者ZHX2、GPC3、H19基因表达水平及其相关关系

目的研究舟山海岛地区肝细胞肝癌(HCC)组织与相应癌旁肝组织新型转录抑制因子锌指和同源框2(ZHX2)基因、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)mRNA和长链非编码RNA(IncRNA)H19基因的表达差异及其与临床病理特征的关系。方法收集17例原发性肝癌患者手术切除肿瘤组织及相应癌旁肝组织,反转录实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测ZHX2、GPC3 mRNA和H19基因表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 ZHX2基因mRNA在HCC中表达明显低于癌旁肝组织,而GPC3基因mRNA在HCC中表达则明显高于癌旁肝组织,差异有统计学意义(P<0.05)。HCC患者ZHX2 mRNA表达与GPC3呈负相关,GPC3mRNA表达与血清AFP水平呈正相关,差异有统计学意义(r=-0.626 8,r=0.536 7,P<0.05),而且GPC3 mRNA表达增高患者多伴有乙型肝炎病毒感染(P<0.05)。结论肝细胞肝癌组织中ZHX2与GPC3具有明显相关性,ZHX2可能通过调控GPC3参与肝细胞肝癌的发生发展。

腺相关病毒载体在视网膜色素变性基因治疗中的应用研究进展

基因治疗是视网膜色素变性（RP）治疗研究的热点之一.经动物实验及临床试验证实,腺相关病毒（AAV）载体因其无致病性、宿主范围广、转染和表达效率高、目的基因长期表达等优点成为视网膜疾病基因治疗的重要载体.但如何建立安全有效的基因治疗导入系统是目前临床需要首要解决的问题.此外,由于基因的导向性和表达的调控性较为局限,也限制了AAV载体介导的基因治疗在临床的广泛应用.进一步深入研究AAV的病毒生物学基础,设计更多的组织特异性启动子以提高AAV载体的转染效率、靶向能力和安全性将为RP基因治疗带来新的曙光.

胃癌患者中PARP1、eIF4E、cyclinE与FOXO3a基因表达水平及其与HER2表达的相关性

目的 研究舟山海岛地区胃癌组织中人表皮生长因子受体2 （HER2）表达水平与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）,真核起始因子4E（e IF4E）,细胞周期蛋白E（cyclin E）,叉头转录因子O亚型（FOXO） 3a的基因表达情况关系,并研究PARP1、e IF4E、cyclin E,FOXO3a与胃癌临床病理特征的相互关联。方法 收集18例原发性胃癌患者手术切除的肿瘤组织及相应的癌旁组织,利用反转录与实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测PARP1、e IF4E、cyclin E和FOXO3a的mRNA表达情况,分析其与HER2免疫组化结果及临床病理特征的关系。结果 FOXO3a与cyclin E基因在胃癌组织中的表达量明显高于癌旁组织,差异均具有统计学意义（P 〈0. 05）。EIF4E、FOXO3a与cyclin E基因在HER2阳性胃癌患者组织中的表达量明显高于HER2阴性患者,差异均具有统计学意义（P 〈0. 05）。PARP1 mRNA表达与胃癌肿瘤大小呈负相关,e IF4E mRNA表达与临床病理分级呈相关（P 〈0. 05）。结论 胃癌组织中PARP1、e IF4E、cyclin E,FOXO3a与HER2具有明显相关性,参与胃癌的发生发展过程。