基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析苯系物在贻贝体内的代谢物

由于苯系物对海洋生态系统的毒性作用,且在生物体内的代谢存在物种差异,为探索典型苯系物在贻贝体内潜在的代谢解毒途径及其代谢物,本文通过室内模拟苯系物暴露实验,采用UPLC-Q-TOF-MS技术,结合Waters UNIFI数据信息系统,对苯、甲苯和二甲苯研究在贻贝体内产生的代谢物进行质谱分析。结果表明,苯、甲苯和二甲苯在贻贝体内分别产生了6种苯代谢物、9种甲苯代谢和8种二甲苯代谢物,代谢途径有水合、还原、去饱和、氧化、硫酸化、二氢二醇、甲基化、葡醛酸结合反应等。其中二甲苯代谢物X-7是DPMA的同分异构体,其他苯系物的代谢产物为首次报道。本研究获得的苯系物在贻贝体内的代谢解毒途径和产生的代谢产物信息、开发的苯系物代谢物UPLC-Q-TOF-MS分析方法,丰富了海洋生态环境监测体系,并为我国近岸海洋生态环境安全评估提供理论依据和数据参考。

编码器测距技术在航运船舶压载水测量中的应用

为解决航运船舶水尺计重过程中压载水测量人工投尺存在耗时长、准确度低,以及工作强度大等问题,利用旋转增量式编码器以转动输出脉冲信号,通过计数设备确定位移原理,结合电路系统,研发一套数显式船舶压载水自动测量装置并优化其算法。选择15船次国际航运船舶用该装置开展与传统测量尺检测的对比试验,数据结果表明,测量差异范围和平均差异率很小,符合对船舶压载水测量精度的要求,同时测量效能有大幅提高。

基于神经网络模型及遗传算法的贝莱斯芽孢杆菌发酵沙丁鱼下脚料抗氧化活性的条件优化

微生物发酵技术是提升海洋鱼产品加工副产物价值的一种重要而有效的途径,而作为沙丁鱼加工副产物的鱼头是一种优质蛋白质和生物活性物质的绝佳来源.本文拟利用从传统鱼露中分离筛选的具有多种蛋白酶活性的贝莱斯芽孢杆菌SW5发酵沙丁鱼下脚料鱼头制备抗氧化活性物质,采用人工神经网络与遗传算法(ANN-GA)相结合方法,以DPPH自由基清除率和蛋白水解度(DH)为考察指标,确定最佳发酵条件.结果表明,沙丁鱼下脚料抗氧化物质最佳发酵条件为发酵时间42 h,发酵温度37℃,接种量3%,并在此条件下通过实验验证DPPH自由基清除率为91.26%.研究结果可为SW5菌株在海洋蛋白质资源的有效利用及功能性海洋食品生产应用上提供数据参考.

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肾中安普霉素的残留量

建立了猪肾中安普霉素残留量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定方法。猪肾样品以磷酸二氢钾溶液提取,经HLB固相萃取柱净化后,采用CAPCELL PAK MGⅡC_(18)(2.0 mm×150 mm,5μm)色谱柱分离,以0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源正离子模式扫描,多反应监测(MRM)模式进行检测,基质匹配同位素内标法定量。安普霉素在20~200μg/L质量浓度范围内线性良好,相关系数(r^(2))为0.9993,方法定量下限为10.0μg/kg。在10、20、100μg/kg加标水平下的平均回收率为85.5%~94.6%,相对标准偏差(RSD)不大于5.9%。该方法基于HLB固相萃取柱净化,基质匹配同位素内标法定量,具有操作简单、定性准确、灵敏度高的特点,适用于猪肾中安普霉素残留量的测定。

散货船水尺计重所用无人船设计

针对散货船传统水尺计重中存在准确度低、工作强度大、安全性无法保障等问题,根据激光雷达避障、卡尔曼滤波器、图像传输等技术和原理,结合港口实际情况,研制水尺计重所用无人船,选择某国际散货船进行10船次无人船和传统人工目测水尺对比试验,试验结果表明,该无人船设计符合水尺计重精度要求,可大幅提升工作效率。

计及船体干扰的首尾侧推器粘性水动力数值计算

本文运用以雷诺平均N-S方程(RANS)为基础的粘性流CFD方法,结合MRF多重参考系模型,对某LNG运输及加注船的首尾侧推器粘性流场和水动力进行数值计算,在多种不同航速条件下,研究了在低速航行时船速对侧推器推力性能的影响规律。通过对比分析得出,首尾侧推器的侧推性能及其对船体水动力性能存在很大差别,并且这2个方面的性能对航速的敏感性也存在很大差异;采用独立尾侧推器舱室布局设计的尾侧推装置效率比独立首侧推器高。

海洋鱼类异尖科线虫虫种质资源实物库与DNA数据库建立

异尖科线虫是食源性寄生虫,成虫寄生在海洋哺乳动物体内,幼虫寄生于鱼类或者软体动物中,人类通过食用含有活的异尖线虫幼虫的海鱼或海产软体动物感染,特别是生食或半生食此类海鲜时更容易感染,并可能产生肠道症状甚至过敏反应。同时也是我国禁止入境的二类寄生虫。1992年我国首次从进境海鱼中检出异尖线虫,直至目前,异尖线虫在我国入境口岸时有发现。舟山渔场是重要的渔业生产基地,鱼类种类相对较丰富,可收集到的异尖科线虫也相对丰富,为舟山本地特色,笔者从舟山捕捞海鱼中收集异尖科线虫,进行系统分类整理,包括线虫实物标本库和线虫资源信息库,目前标本库中已经收集到9种异尖科线虫,按照护照信息、物种标记、个性特征、图像信息、生物材料信息等7个模块建立资源信息数据库,并且对资源信息数据库不断补充、修改与完善,该数据库建立可以更好、全面收集异尖科线虫资源,对我国异尖科线虫物种研究提供基础材料。

进口植物油混舱分卸比例分割偏差因素分析

为最大程度节省运输成本和适应贸易发展需要,提高远洋油轮载重利用率,多家国内收货人经常拼船混舱装运同品种进口植物油,分别在国内不同港口或码头分割卸货,可能造成分卸比例分割偏差。通过对张家港口岸5批远洋油轮进口植物油混舱分卸比例分割产生的偏差分析发现,分割偏差受人为误差、舱容误差、密度误差、方法误差、外在环境、船舱卸货不净、油泵等因素影响较大,据此提出了改进措施与建议,为规范混舱装运进口植物油分割计量和卸货作业提供参考。

分光光度法测定海捕虾中4-己基间苯二酚

目的 基于分光光度法建立检测海捕虾中4-己基间苯二酚(4-hexylresorcinol,4HR)的分析方法。方法 用乙腈-二氯甲烷溶液提取4HR,经Sep-Pak NH2固相萃取柱净化, 4HR与固蓝RR盐(fast blue RR salt,FBRR)在碱性介质中反应生成红色偶合产物,进行比色定量。结果 本方法在0~90μg/mL范围内具有良好的线性,相关系数r^(2)=0.9998,其检出限和定量限分别是1.019μg/mL和3.087μg/mL。3个不同加标水平(0.5、1.0、2.0μg/g)的平均回收率为86.30%~93.25%,相对标准偏差为1.57%~5.54%。本方法与现行标准GB5009.280—2020《食品安全国家标准食品中4-己基间苯二酚残留量的测定》进行比对,两种方法检测结果无显著性差异(P>0.05)。结论 本法灵敏、准确可靠,可用于海捕虾中4HR的分析检测。

基于气相色谱三重四极杆质谱法分析5种苯系物在贻贝体内的分布、蓄积和消除规律

采用气相色谱三重四极杆质谱(GC-MS/MS)技术,研究了5种苯系物暴露后在贻贝各组织中的分布、蓄积和消除规律.结果表明,贻贝不同组织中对5种苯系物的生物蓄积具有一定的差异,且分布呈组织特异性.暴露试验结束后,贻贝各组织中5种苯系物分布及其含量变化趋势基本相同,消化腺和性腺中的苯系物含量增加比其他组织快,且消化腺和性腺中的峰值比其他4种组织中的峰值较高.消化腺和性腺中的苯系物含量相对较高,有明显的吸收和富集作用.足、鳃、闭壳肌和外套膜中5种苯系物的含量相对较低,约为消化腺中的20%左右.消除阶段贻贝各组织中5种苯系物的含量符合一阶非线性衰减模型,相关系数范围为0.9948~0.9999.暴露组净化1 d后,贻贝对苯、甲苯、间二甲苯、对二甲苯和邻二甲苯的净化率范围分别为98.4%~99.2%、97.3%~98.8%、86.1%~95.8%、90.8%~97.0%和92.1%~96.6%.净化5 d后,暴露组贻贝各组织中苯系物的含量虽趋于空白组水平,但仍有一定的残留.

基于静态模型的五种苯系物在海水和厚壳贻贝中的消除规律

对静态模型中的苯(BZ)、甲苯(TU)、对二甲苯(PX)、邻二甲苯(MX)和间二甲苯(OX)5种苯系物在海水和厚壳贻贝(Mytilus coruscus)中的消除规律进行研究,在(20±0.5)℃环境温度下,以海水和厚壳贻贝为研究对象,分别添加一定浓度的5种苯系物,用顶空进样-气相色谱氢火焰离子化检测器法(HS-GCFID)分析不同时间点的5种苯系物在海水和厚壳贻贝中的残留浓度。结果表明,海水和厚壳贻贝中苯系物各组分浓度随时间变化规律基本相同,海水中5种苯系物的消除速率由大到小依次为MX、PX、TU、BZ、OX,厚壳贻贝中5种苯系物的消除速率由大到小依次为TU、BZ、MX、OX、PX,厚壳贻贝与海水的消除速率不同,其原因可能是厚壳贻贝富含脂肪、蛋白质等复杂基质,苯系物与厚壳贻贝基质的结合程度较强。

响应面优化香辣即食鱿鱼配方工艺

为丰富鱿鱼休闲食品市场品种,以秘鲁鱿鱼胴体为原料,开发了一种香辣风味的即食鱿鱼。通过单因素试验和响应面分析并辅以感官评分作为评定标准确定了香辣即食鱿鱼的辅料用量,并对产品主要营养成分进行测定。结果表明:烧烤辣酱添加量2.16%,海鲜酱添加量0.84%,芝麻酱添加量0.88%时,产品感官评分最高,且产品的脂肪、蛋白质含量和热量均低于市售商品,适宜投入市场销售,对即食鱿鱼生产加工具有一定参考价值。

检测产单核细胞李氏杆菌溶血素的胶体金试纸条制备及初步应用

产单核细胞李氏杆菌为重要的食源性病原菌,本研究旨在建立快速、灵敏、特异的检测方法,提高检测效率和检测通量。李氏杆菌溶血素(LLO)蛋白经原核表达后,制备单克隆抗体,测定单克隆抗体的亚型、效价及亲和力。柠檬酸钠法研制LLO胶体金试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性、重复性、稳定性及模拟样品进行检测,并初步应用于实际海产品的检测。结果发现,制备的LLO单克隆抗体特异性强、稳定性高、重复性佳、灵敏度较高,亲和力好,亲和力常数为4.25×10^(8) L·mol^(-1)。人工污染样品试验表明灵敏度与纯细菌培养物基本一致,为3.0×10^(5)CFU·mL^(-1)。将LLO胶体金试纸条应用于500份海产品的实际检测中,产单核细胞李氏杆菌的阳性检出率为2.20%(11/500),略低于国标检测方法(GB4789.30—2010)的2.40%(12/500)和PCR检测方法的2.40%(12/500),三者之间符合率为91.67%。另外缩短检测时间至15 min,检测效率大幅度提高。本研究建立的LLO胶体金检测方法可用于产单核细胞李氏杆菌的快速检测。

同位素稀释气相色谱-串联质谱法测定动物源食品中克霉唑残留量

建立了动物源食品(猪肉、鸡肉、猪脂肪、猪心、猪肝、猪肾)中克霉唑残留量的同位素稀释气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)测定方法。样品经加速溶剂提取后,用凝胶渗透色谱净化。采用HP-5 MS色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)进行分离,多反应监测(MRM)模式检测,同位素内标法定量。实验结果表明,克霉唑在1~100μg/L浓度范围内线性良好,决定系数(R 2)为0.9995,定量限(LOQ,S/N≥10)为2.0μg/kg。在2.0、5.0、20.0μg/kg加标水平下,回收率在82.6%~116.5%之间,相对标准偏差为5.2%~13.5%。该方法灵敏度高、准确性好,能够满足动物源食品中克霉唑残留量的确证和定量分析。

4种海产品冷藏期间挥发性盐基氮和生物胺含量变化

目的 研究4种海产品[大管鞭虾(Solenocera melantho)、鮸鱼(Miichthvs miiuy)、鲭鱼(Pneumatophorus japonicus)和海鲈鱼(Lateolabrax japonicas)]在4℃冷藏过程中的品质变化,并对其新鲜度和安全性进行评估。方法 以4种海捕水产品为研究对象,测定4℃贮藏过程中海产品的主要新鲜度指标[挥发性盐基氮(total volatile basic nitroge, TVB-N)]和9种生物胺(苯乙胺、酪胺、组胺、色胺、尸胺、腐胺、章鱼胺、精胺和亚精胺)含量,分析贮藏时间对含量变化的影响,并在此基础上对海产品的新鲜度和安全性进行评估。结果 4种海产品在4℃贮藏条件下, TVB-N含量和生物胺含量均存在一定差异。4种海产品TVB-N含量随着贮藏时间的延长而逐渐增加且与时间存在明显的相关性,大管鞭虾的增长速度在2 d后显著高于其余3种海产品(P<0.05);在相同条件下,生物胺的含量和变化在不同海产品中差异显著,其中鲭鱼可产生种类较多且高含量的生物胺,尤其在短时间内可产生对人体健康存在危害的组胺和酪胺,且有随贮藏时间延长含量显著增高的趋势,需引起消费者的关注。亚精胺、精胺含量在海产品中含量较低且均无明显变化;章鱼胺在4种海产品中均未检测到。结论 4种海产品中TVB-N、尸胺和腐胺含量与贮藏时间有显著的相关性(P<0.01);海产品产生的生物胺种类及含量与海产品品种密切相关,贮藏过程中生物胺含量因海产品种类、生物胺种类和贮存时间不同而存在差异。即使在同样的贮藏条件下不同海产品的新鲜度和食用安全性均需独立评估。

玉米细菌性枯萎病菌荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立与应用

【目的】建立一种快速、灵敏、特异的玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewarii)重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)检测方法。【方法】以玉米细菌性枯萎病菌pstS-glmS基因序列作为靶标序列,设计、合成荧光RAA检测引物和探针,并进行灵敏性测定、特异性验证;使用建立的荧光RAA检测方法检测玉米模拟样本和玉米真实样本,参照标准SN/T 1375-2004方法同步复核,评估荧光RAA检测方法的可靠性。【结果】成功建立了玉米细菌性枯萎病菌荧光RAA检测方法。该方法反应快速,在39℃条件下20 min内即可完成检测反应,特异性好,且灵敏度为280 fg/μL;利用该方法检测6份模拟样本结果阳性,24份真实样本结果呈阴性,与参照标准SN/T 1375-2004检测结果一致。【结论】成功建立了玉米细菌性枯萎病菌快速、灵敏和特异的荧光RAA检测方法,可用于玉米细菌性枯萎病菌的现场检测。

基于肝脏代谢组分析研究低聚硒化氨基多糖对黑鲷的免疫调节作用

采用基于液相色谱-飞行时间质谱联用(LC-TOF-MS)技术的代谢组学方法,分析黑鲷肝脏内源性代谢物的变化,研究硒化氨基多糖增强黑鲷的免疫调节机制。采用XCMS plus 软件非靶向分析质谱采集数据,筛选潜在生物标志物,并通过MetaboAnalyst3.0网站分析相关代谢通路。结果表明,饲喂硒化氨基多糖组中的代谢物明显区分于空白组,发现并鉴定了32个有差异的生物标志物。代谢通路分析结果表明,硒化氨基多糖可通过氨基酰基-转运脱氧核糖核苷酸(tRNA)生物合成、氨基酸代谢、核苷酸代谢、氮代谢等代谢通路增强黑鲷自身的免疫机能。该研究为阐明硒化氨基多糖的免疫增强机制提供了科学依据。

运用固体进样-自动测汞仪测定铜精矿中汞含量的研究与应用

采用固体进样-自动测汞仪方法测定进口铜精矿中汞含量的方法,检出限为0.7 ng/g,测试不同样品的相对标准偏差(RSD)在1.01%~2.77%,回收率在92.04%~97.26%。用该方法对铜精矿有害元素能力验证样品进行测定,结果与指定值相符。与电感耦合等离子原子发射光谱仪法相比,该方法在低含量汞元素测定中的效果更好,且快速、准确、操作简便。

基于脾脏代谢组学方法研究低聚硒化氨基多糖对黑鲷的免疫调节作用

以冷冻甲醇提取,C18色谱柱和HILIC色谱柱分别分离黑鲷脾脏中的内源性代谢物,采用基于超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-TOF-MS)的非靶向代谢组学研究方法,分析了黑鲷饲喂低聚硒化氨基多糖后脾脏中内源性代谢物的变化差异,揭示了低聚硒化氨基多糖调节黑鲷免疫功能的潜在机制。采用XCMS^plus软件结合高分辨二级质谱数据库处理质谱原始数据,筛选出潜在生物标志物,并通过Metabo Analyst 4.0网站分析相关代谢通路。结果表明,黑鲷饲喂低聚硒化氨基多糖后脾脏中的36个代谢物发生显著变化;低聚硒化氨基多糖可通过9条代谢通路增强黑鲷的免疫机能。该研究结果为阐明低聚硒化氨基多糖的免疫增强机制提供了科学依据。

玉米内州萎蔫病菌荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立

玉米内州萎蔫病菌(Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis)是进境玉米重要检疫性病原物之一。通过分析比较玉米内州萎蔫病菌的纤维素酶基因cel B,筛选出独特和保守的基因序列用于设计引物和探针,利用重组酶介导等温扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)建立玉米内州萎蔫病菌的荧光RAA检测方法。以cel B基因序列作为靶标序列设计出引物2F、6R和探针P,建立了玉米内州萎蔫病菌荧光RAA检测方法,该方法在39℃恒温条件下,20 min内可完成检测反应,特异性好,且灵敏度高达130 fg·μL^(-1),利用该方法检测4份玉米模拟样本阳性,8份玉米真实样品阴性,检测结果与参照国家标准GB/T 36840—2018一致。结果表明,建立的荧光RAA检测方法快速、特异、灵敏,能够满足现场检测要求。