细胞凋亡在糖尿病大鼠牙周炎中参与牙槽骨吸收的实验研究

目的研究糖尿病伴牙周炎牙槽骨破坏机制,初步探讨牙周组织细胞凋亡在该类疾病中所起的作用。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)制备SD大鼠糖尿病模型,并利用0.2mm不锈钢丝环扎大鼠磨牙颈部制备牙周炎动物模型。观察牙周组织细胞在高血糖状态及正常血糖状态下的组织形态并检测细胞凋亡情况。结果高血糖状态下大鼠牙周炎发病程度明显高于血糖正常大鼠。牙周组织中成骨细胞及牙周膜成纤维细胞凋亡数量高血糖组高于血糖正常组,而破骨细胞数量则相反。结论高血糖状态下牙周炎病损程度较正常血糖状态下严重,牙周组织细胞凋亡参与和加重病程。

白血病细胞系NK细胞配体表达及其对NK-92细胞杀伤敏感性的研究

目的:检测白血病细胞系NK配体表达情况以及对NK-92细胞的敏感性,探讨NK配体表达与NK杀伤敏感性的关系。方法:通过半定量RT-PCR的方法,以β-actin为内参基因,分别检测U937、CEM、KG-1a、HL-60、NB4、Reh和LCL等7种细胞表面MICA、MICB、ULBP1、PVR、Nectin-2、LFA-3、LLT-1、HLA-E、HLA-F和HLA-G等10种NK配体的表达情况。通过流式细胞术,用CFSE和PI双染法,检测NK-92细胞对以上7种白血病细胞系的杀伤效应。结果:根据NK-92细胞对靶细胞的杀伤效应强弱,将以上7种白血病细胞系分成NK敏感组(U937,CEM,KG-1a)、中度敏感组(HL-60、NB4)和不敏感组(Reh,LcL)三组。NK配体PVR和HLA-F在组间的差异具有统计学意义(P值分别为0.017和0.016),不敏感组的PVR转录水平最低而HLA-F水平最高,其他配体间则无显著性差别。结论:本研究初步表明PVR和HLA-F是人为干预肿瘤细胞耐受NK细胞的两个靶点分子。

解脲支原体大鼠感染模型的建立

目的观察解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)感染对大鼠睾丸形态学的影响。方法在大鼠膀胱内接种Uu(105ccU/mL),在大鼠的睾丸组织中培养出Uu,用聚合酶链反应(PCR)检测Uu,并用光镜观察睾丸组织。结果模型组检测出Uu阳性8只,检测阳性率为66.7%,正常组均未检测出Uu;模型组睾丸重量明显低于正常组(P<0.01),正常组睾丸曲细精管正常,生精细胞排列有序,管腔中常可见到精子,模型组光镜可见曲细精管变性,生精细胞减少,部分区域间质呈渗出、水肿。结论提示Uu感染可干扰精子发生,是造成男性不育的因素之一。

持续性高正加速度对大鼠舌横纹肌组织结构、HSP70 mRNA表达的影响及丹参多酚酸盐的作用研究

目的探讨持续性高正加速度(+G_z)对大鼠舌横纹肌组织结构、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)m RNA表达的影响,以及对丹参多酚酸盐的作用。方法将27只SD大鼠随机分为9组:阴性对照组、+5 G_z阳性对照组、+5 G_z药物组(低、中、高剂量)、+10 G_z阳性对照组、+10 G_z药物组(低、中、高剂量),每组3只。阳性对照组和药物组在+5 G_z、+10 G_z条件下离心,给药组于每次离心前30 min腹腔注射不同浓度的丹参多酚酸盐溶液,其余组注射等体积生理盐水。观察舌横纹肌组织形态,荧光定量PCR法测定HSP70 m RNA表达情况。结果相对于阴性对照组,其他组舌横纹肌组织纤维基本正常,偶见细胞间质稀疏,细胞排列紊乱及横纹不清或消失;阳性对照组HSP70 m RNA的表达高于阴性对照组,且随+G_z值的增加而增加;药物组HSP70 m RNA的表达低于阳性对照组。结论 +G_z对大鼠舌横纹肌可造成一定的损伤,损伤程度与+G_z值相关;丹参多酚酸盐可抑制+G_z作用下HSP70 m RNA的表达,对+G_z暴露下舌组织可能有一定保护作用。

c-Jun氨基末端激酶1和2在角质形成细胞系Hacat细胞中的作用

目的研究同工酶JNK1和JNK2在Hacat细胞中的功能差异,探讨其在皮肤肿瘤治疗中的潜在价值。方法分别将JNK1和JNK2的siRNA导入Hacat细胞,通过Western Blot技术在蛋白质水平对其敲低效果进行鉴定。CCK-8法检测细胞增殖曲线,流式细胞术检测细胞周期,不同剂量的Taxol进行凋亡诱导实验,分析正常Hacat细胞与JNK1/2敲低细胞的区别。结果细胞增殖实验表明,JNK1或JNK2敲低均可导致增殖变缓,JNK1敲低效果更明显。细胞周期结果显示,JNK1敲低可导致S期细胞减少,G2/M期升高。Taxol凋亡诱导实验表明,JNK2敲低组凋亡显著增加,而对照组和JNK1敲低组凋亡变化不明显。结论在细胞增殖方面,JNK1作用强于JNK2;而在抗凋亡方面,JNK2作用强于JNK1。

一种新型自体NK细胞扩增培养方法的建立和初步临床应用

目的应用一种新型的自体NK细胞扩增培养方法,并进行初步的临床试验。方法采集患者静脉血30ml,用Ficoll法分离外周血单核细胞,用NKGM培养体系培养两周,收集细胞后回输患者。实验全程在GMP实验室进行,并做好质量控制。结果通过14 d的细胞培养,淋巴细胞总数扩增了约200～300倍,其中NK细胞和CD8+T细胞均扩增了约500倍,最终NK细胞和CD8+T细胞的比例约为36%～53%、38%～51%。对1例处于化疗后部分缓解的肺癌且伴多发转移的患者进行两个疗程的细胞治疗,患者血清肿瘤标志物糖类抗原(CA)19-9呈进行性降低。而且在NK细胞输注后的2～6周,仍可检测出患者外周血淋巴细胞中NK细胞的比例高达约31%。结论 NKGM培养体系可通过两周的培养使外周血单核细胞扩增约250倍,而且NK细胞的纯度可高达53%。同时,该细胞疗法具有很好的安全性和便捷性,应用于肿瘤患者可通过维持外周血NK细胞的高比例而发挥积极的临床疗效。

丹参多酚酸对持续性+Gz导致大鼠咬肌损伤的影响

目的:观察持续性高正加速度暴露下大鼠咬肌的变化,并探讨丹参多酚酸对持续性高正加速度导致咬肌损伤的影响。方法:27只雄性SD大鼠随机分为阴性对照组、+5 Gz、+10 Gz阳性对照组、3个+5 Gz合并给药(低、中、高剂量)组、3个+10 Gz合并给药(低、中、高剂量)组,每组3只。阳性对照组和药物组分别在+5 Gz、+10 Gz的条件下(+5 Gz、+10 Gz峰值持续30 s,间隔时峰值1 Gz、60 s)离心5 min,每周4 d,每天重复5次,共3周;实验期间给药组于每次离心前30 min按低、中、高给药剂量(分别为2、6、18 mg/kg)腹腔注射丹参多酚酸盐溶液,阴性及阳性对照组注射等体积生理盐水。实验结束后取所有大鼠的咬肌组织,HE染色观察其形态学变化;Real time qPCR法测定咬肌中HSP70mRNA的表达水平。结果:与阴性对照组相比,+5 Gz即可使大鼠咬肌中HSP70mRNA的相对表达升高,+10 Gz时升高更明显,各组间差异均有统计学意义(P<0.05);+5 Gz、+10 Gz合并不同剂量丹参多酚酸均可明显抑制咬肌中HSP70mRNA的表达水平(P<0.05),且呈显著的剂量依赖性。结论:+Gz值的增加对大鼠咬肌的损伤也相应增大;丹参多酚酸盐对+Gz造成的大鼠咬肌损伤有一定的保护作用。

实时定量PCR检测急性白血病细胞系自然杀伤细胞配体的表达

目的利用实时定量PCR方法检测急性白血病细胞系的NK配体表达，探讨不同来源白血病的NK配体差异表达规律。方法通过实时定量PCR方法，以p—actin为内参基因，分别检测急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞系（CEM、JurkatT、Reh）和急性髓系白血病（AML）细胞系（HL-60、KG-1a、NtM）表面23种NK配体（MICA、MICB、ULBP-1、ULBP-2、ULBP-3、ULBP-4、HLA—E、HLA—G、CD48、NBTA、HLA—F、LLT-1、PVR、Nectin2、CD72、CD80、ICAM-1、LFA-3、CRACC、Fas、DR4、DR5、TNFRl）的表达情况，利用独立样本t检验进行组问比较。结果有4种NK配体的表达水平在ALL组和AML组间差异具有统计学意义。其中，ULBP-2ALL组（CEM细胞：1，JurkatT细胞：0．617，Reh细胞：0．246）高于AML组（HL-60细胞：0．000，KG-1a细胞：0．003，NB4细胞：0．000）（P=0．047），CD48、PVR（PVR一1、PVR一2）和DR4AML组（HL-60细胞分别为13．987、4．403、i0．334、8．71I，KG—la细胞分别为5．387、2．900、7．315、4．512，NB4细胞分别为7．763、3．248、7．049、6．127）高于ALL组（CEM细胞均为1，JurkatT细胞分别为2．035、1．553、3．888、0．449，Reh细胞分别为1．559、0．000、0．000、1．304）（P=0．044、0．014、0．014、0．011），而其余配体表达水平组间差异无统计学意义。结论ULBP-2、CD48、PVR和DR4可能是ALL和AML的差异表达基因，为应用基于NK细胞的过继免疫治疗打下基础。

丹参多酚酸对持续性正加速度暴露下大鼠牙龈组织的保护作用

目的 探讨持续性正加速度（＋Gz）暴露对大鼠牙龈组织的影响以及丹参多酚酸的保护作用. 方法 采用随机区组法将27只雄性SD大鼠分为阴性对照组、＋5Gz阳性对照组、＋5Gz药物组（低、中、高剂量）、＋10 Gz阳性对照组、＋10 Gz药物组（低、中、高剂量）,共9组,每组3只.除阴性对照组外,其余各组动物分别在＋5Gz和＋10 Gz的条件下各离心30 s,每天重复5次,间隔以＋1Gz持续60 s,每周4d,共3周.实验期间给药组于每次离心前30 min按剂量腹腔注射丹参多酚酸溶液（低、中、高给药剂量分别为2、6、18 mg/kg）,3个对照组均注射等体积生理盐水.观察大鼠行为活动的变化.光镜观察各组大鼠牙龈组织形态学变化,并采用PCR法测定牙龈组织中热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70） mRNA相对含量. 结果 持续性正加速度对大鼠的行为活动有一定程度的影响,采用丹参多酚酸干预后,大鼠的活动程度有逐渐恢复的趋势.各组大鼠牙龈组织呈红色,有光泽,质地坚韧,未见明显肿胀和出血.对照组牙龈组织上皮基本完整;＋5 Gz阳性对照组和药物组的牙龈组织上皮过度角化,粒层明显;＋10 Gz阳性对照组和药物组牙龈组织上皮角化程度更高,粒层更明显.随着正加速度G值的增加,大鼠牙龈组织HSP70 mRNA相对表达量亦增加（F=169.22、650.69,P＜0.01）,随着丹参多酚酸给药浓度的增加,HSP70 mRNA的相对表达量受到明显抑制（F=68.73,P＜0.01）. 结论 HSP70 mRNA相对表达量与＋Gz值的增加呈正相关,＋Gz值越大对大鼠牙龈组织的损伤也越大;丹参多酚酸对＋Gz暴露下的牙龈组织损伤具有一定的保护作用.

UVB诱导凋亡时MAPK和Mst1/caspase-3信号通路调节H2B磷酸化作用

凋亡是真核细胞执行的高度协调的程序性自杀机制.细胞凋亡时,组蛋白的修饰与核内事件有关.尤其H2B被Mst1激酶磷酸化后,参与调节核内凋亡事件染色质凝聚作用.本研究发现,UVB诱导细胞凋亡时,H2B发生磷酸化作用,并且受MAPK家族(ERK1/2,JNK1/2和p38),Mst1和caspase-3信号通路调控.UVB能够以时间依赖方式激活MAPK家族激酶,进而介导H2B磷酸化,但是H2B乙酰化作用不受影响.分别阻断ERK1/2,JNK1/2或p38任何一种激酶,均能抑制H2B磷酸化作用.而且,UVB也能激活caspase-3,活化的caspase-3激活下游Mst1.受到激活的Mst1直接磷酸化H2B,导致染色质凝聚.但是caspase-3和Mst1信号通路被完全阻断时,只能部分抑制H2B磷酸化作用,同时MAPK家族激酶的活化不受影响.因此,细胞在受到UVB诱导发生凋亡时,MAPK和caspase-3/Mst1信号途径分别独立调节H2B磷酸化和染色质凝聚作用.

单次强脉冲光照射对豚鼠皮肤屏障功能和表皮组织学的影响

目的研究强脉冲光(intense pulsed light,IPL)照射对豚鼠皮肤屏障功能和表皮组织学的影响,探讨其在IPL嫩肤过程中的作用和机制。方法采用临床光子嫩肤剂量的IPL照射豚鼠背部皮肤,分别检测对照组未照射皮肤、照射后1、7、15 d皮肤的经皮水分丢失(transepidermal water loss,TEWL)、角质层含水量、皮肤弹性和表皮组织学变化。结果照射后1 d较对照组TEWL增加,角质层含水量减少。照射后7 d较照射后1 d TEWL减少的同时,角质层含水量开始增加。照射后15 d较照射后7 d TEWL减少,角质层含水量进一步增加,且照射后15 d TEWL低于对照组,角质层含水量高于对照组。皮肤弹性至照射后15 d较对照组开始增加。与对照组相比,照射后1 d角质层变薄,层数减少,角质层发生了皱缩、融合。照射后7 d较照射后1 d角质层增厚,角质层层数增多,但角质层排列松散,呈席纹状。照射后15 d与照射后7 d相比角质层厚度和层数差异无统计学意义,但角质层排列趋于规整、致密,呈网篮状。IPL照射各组与对照组间表皮层形态及厚度差异无统计学意义。结论IPL照射可引起表皮组织学的损伤-修复过程和豚鼠皮肤屏障功能变化,表现为照射后短暂的角质层变薄和皮肤屏障功能受损,随后角质增厚、结构重排、皮肤屏障功能增强参与IPL嫩肤机制。