大鼠骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程脂肪的实验研究

目的探讨采用聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)生物支架及骨髓间充质干细胞,构建组织工程化脂肪组织的可行性。方法将雄性大鼠骨髓间充质干细胞接种于PLGA支架上,成脂诱导培养1周,扫描电镜观察细胞在支架上的生长及黏附情况;同时,将细胞-支架复合体异体移植于雌性大鼠体内,观察其成脂情况,并使用原位杂交技术鉴定。结果在生物支架上大量成脂细胞呈簇状生长;1个月时可见脂肪组织形成,3个月时脂肪组织成熟。结论PLGA生物支架是一种理想的生物可降解支架,骨髓间充质干细胞接种于PLGA生物支架可用于组织工程化脂肪的研究。

RhoA／Rho激酶信号通路在TGF—β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用

目的 观察TGF—β1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA／Rho激酶信号通路的影响，以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法原代培养人皮肤成纤维细胞，将第4代细胞用TGF—β1（10ng／ml）刺激后，分不同作用时间（0、3、6、24h）提取细胞内总蛋白。BCA法测定总蛋白浓度，Western—blot检测a—SMA的表达水平；并用相同的方法检测不同浓度TGF—β1（0、2、10、50ng／ml）刺激人皮肤成纤维细胞后，a-平滑肌肌动蛋白（d—smoothmuscleactin，a—SMA）的表达水平。用RhoA／Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后，再用TGF—β1刺激，作为实验组，将未作处理的正常细胞作为空白对照组，Y-27632（10μmol／L）组作为阴性对照组，只用TGF-β（10ng／ml）刺激组作为阳性对照组，分别检测a-SMA的表达差异。使用ANOVA对蛋白表达量进行统计学分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果10ng／mlTGF-β按不同作用时间刺激人皮肤成纤维细胞后，a—SMA的表达量分别为：0h为1．0，3h为1．9±0．2、6h为2．1±0．1，24h为3．1±0．1。24h较其他3个时间点a-SMA表达量明显上升（n=4，P〈0．05）。不同浓度TGF—β1刺激人皮肤成纤维细胞后，a—SMA的表达量分别为：0ng／ml为1．0，2ng／ml为1．4±0．2，10ng／ml为3．2±0．1，50ng／ml为3．1±0．2。10ng／ml表达量明显高于0ng／ml和2ng／ml（n=4，P〈0．05），较50ng／ml差异无统计学意义（n=4，P〉0．05）。用Y-27632（10μmol／L）处理后，再用TGF—β1刺激，细胞的表型转化明显受到抑制，实验组a—SMA的表达量（1．2±0．2）较阳性对照组（2．9±0．1）明显降低（n=5，P〈0．05），与空白对照组（1．0）和阴性对照组（1．1±0．1）相比差异均无统计学意义（n=5，P〉0．05）。结论RhoA／Rho激酶信号通路参与了TGF—B。诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化过程。

几种常用生长因子的基因工程与创面修复

创伤会引发一系列的反应、包括炎症反应、细胞增殖，新组织的形成，最终导致伤口区域的重建。整个损伤过程都存在着各类生长因子对各个过程调控。生长因子（growth factor，GF）是一类具有诱导和刺激细胞增殖、维持细胞存活等生物效应的蛋白类物质，对促进细胞增殖、组织或器官修复和再生都具有重要的促进作用，是组织工程的重要影响因素之一。作为具有多种生物学功能的GF，