中美解剖教学的对照与比较——美国芝加哥大学人类形态学课程的解析与思考

详细介绍在美国芝加哥大学医学院亲身经历的医学科目人类形态学课程的构造,详细介绍教学的目的、内容和方法,通过对比来阐明目前我国大多数医科院校解剖学教学存在的差距,为今后的解剖学教学改革提供依据。

从芝加哥大学精神科专业住院医师培训基地了解美国精神科专业住院医师规范化培训体系

美国的住院医师规范化培训(住培)被认为是世界上最完善的毕业后医学教育体系,是美国医学毕业生成为独立执业医师的必经之路,其发展已经历了半个世纪的不断改革与完善。美国毕业后医学教育认证委员会(ACGME)提出了住院医师6大核心能力培养要求和里程碑(Milestone)评价体系,这对全美住院医师培训的同质化起着非常重要的作用。美国的住培基地统一受ACGME监管以保证培训质量,因此对住培基地资质的认证、培训科目和考评标准的制定以及住院医师完成培训目标的资质认证都完全按照ACGME的标准和程序执行。精神科专业住院医师培训对住院医师能力及培训基地的要求也同样受ACGME监管,但也有自己的ABPN(美国精神病学和神经病学委员会)评估体系。中国的住培起步较晚,尤其是精神科专业培训体系还处于建立与完善阶段。本文以美国芝加哥大学精神科专业住培项目为参考,对美国精神科专业规范化培训基地的要求、人员配备、培训科目和课程等做简要概述,以期对中国精神科专业住培体系的发展提供借鉴。

胃腺癌中抗原处理相关转运蛋白1的表达和临床意义

目的探讨胃腺癌(stomach adenocarcinoma,STAD)中抗原处理相关转运蛋白1(transporter associated with antigen processing 1,TAP1)表达与临床病理特征的关系及其预后意义。方法通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库收集TAP1在STAD组织中的mRNA表达水平和患者临床资料。采用GraphPad Prism软件分析TAP1表达与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier曲线分析其与患者总生存期的关系。采用蛋白质印迹法检测STAD细胞株MKN45和AGS以及人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中TAP1的蛋白表达。收集2020年1月1日至12月31日武汉大学中南医院病理科的STAD组织标本122例和2020年10月1日至12月31日武汉大学中南医院病理科的正常胃切除标本24例,采用免疫组织化学法检测组织中的TAP1表达,分析其与患者临床病理特征的关系。结果TCGA数据库分析和组织标本的免疫组织化学分析均显示,TAP1在STAD组织中较正常胃组织高表达(均P<0.05)。TAP1在STAD细胞株MKN45中的表达较正常胃黏膜上皮细胞株GES-1高(P<0.01),而人STAD细胞株AGS与GES-1中TAP1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在STAD组织中,TAP1蛋白表达水平在STAD的Laurén分型方面比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。TCGA数据库分析发现,TAP1表达水平随肿瘤组织分级的增加而升高(P<0.05)。TCGA数据库中STAD患者按TAP1表达中位数6.82分为TAP1高表达组和低表达组。TAP1高表达组中位总生存期更长(57.1个月vs 25.1个月,P<0.05)。结论TAP1在STAD组织中高表达,且与Laurén分型和组织分级相关,为预后保护因素,可作为STAD预后的潜在标志物。

幽门螺杆菌:胃炎和消化性溃疡的致病菌——2005年诺贝尔生理学或医学奖成果介绍

长期以来,医学界普遍认为,精神压力和生活方式等因素是慢性胃炎和消化性溃疡发病的主要原因。2名澳大利亚科学家不受主流医学思想的限制,开创性地证明了一种新发现的细菌——幽门螺杆菌才是胃炎和消化性溃疡的致病原因,从而改变了人们对这种疾病的认识和治疗手段,使胃炎和消化性溃疡成为一种可治愈、不再反复发作的慢性疾病。为表彰两人的贡献,瑞典皇家Karolinska医学院诺贝尔奖评审委员会决定授予他们2005年诺贝尔生理学或医学奖。

信使RNA药物修饰及其递送系统研究进展

信使RNA(mRNA)药物在多种疾病的预防和治疗中展现了巨大的应用价值。最大程度提高mRNA的稳定性和翻译效率,保证mRNA免受核酸酶的降解并靶向特定组织和细胞是临床转化的要求。通过修饰核苷酸降低mRNA免疫原性,密码子优化增加mRNA翻译效率,5'帽结构和3'多聚腺苷酸尾结构增加mRNA稳定性,以及添加5'和3'非翻译区功能调控mRNA稳定性和翻译效率。通过纳米粒递送系统保护mRNA不被核酸酶降解,增加mRNA血液循环,并帮助mRNA进入细胞质发挥治疗和预防作用。本文综述了mRNA药物的制剂工程技术进展,讨论了提高mRNA稳定性和翻译效率的方法及设计原理,总结了具有产业转换潜力的mRNA递送系统的设计要求及其临床应用,并展望了mRNA药物未来可能的研究方向,以满足实现个性化精准医疗的需求。

双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞株143B增殖和凋亡的作用

目的观察双氢青蒿素(dihydroarteminin,DHA)对人骨肉瘤细胞143B的增殖和凋亡的影响以及可能的机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞株143B;MTT比色法和克隆形成实验检测不同浓度DHA对骨肉瘤细胞存活与克隆形成能力的影响。Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态变化。构建β-Catenin荧光素酶报告基因(β-Catenin-Luc,p-Top)检测DHA作用143B后细胞内β-Catenin活性变化。不同浓度的DHA作用后,Western blot检测与细胞增殖(如PC-NA、Cyclin D1、c-Myc)、凋亡(如Bad、Bcl-2、Caspase-3)密切相关的标志物蛋白质表达变化。结果 DHA作用于143B细胞24 h后,MTT结果显示143B细胞的增殖活性受到明显抑制,且其克隆形成能力减弱(P<0.05),在DHA浓度达35μmol.L-1时,抑制效率最明显。Western blot结果显示PC-NA表达下调;而促凋亡蛋白Bad和Caspase-3表达上调,Bcl-2蛋白表达明显减弱。结论双氢青蒿素具有较明显的抑制人骨肉瘤细胞的增殖且促进其凋亡的作用,可能通过下调细胞增殖相关蛋白PCNA、Bcl-2和上调促凋亡蛋白Bad和Caspase-3,启动凋亡程序,致143B细胞发生凋亡。

人S100A6-GST融合蛋白的原核表达和纯化

目的:制备人S100A6-GST融合蛋白,为研究人S100A6((hS100A6)蛋白的功能奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A6中双酶切获取hS100A6基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A6,转化BL21后,IPTG诱导重组菌表达hS100A6蛋白,SDS-PAGE及WesternBlot鉴定表达产物,Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化。结果:重组菌株表达出与理论预测值相符的一个约36ku的hS100A6融合蛋白,纯化后的融合蛋白的产量为3mg/L菌液,纯度约92%。结论:成功构建了hS100A6-GST原核表达质粒,在大肠杆菌中表达纯化后得到较高浓度的hS100A6-GST融合蛋白,为hS100A6蛋白功能的研究打下了基础。

外源性S100A6对人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖、凋亡及β-catenin表达的影响

目的:探讨外源性S100A6对骨肉瘤细胞株U2OS的生物学作用及其可能机制。方法:MTT法检测S100A6对U2OS细胞增殖的影响及浓度依赖性,台盼蓝拒染法计数活细胞检测S100A6对U2OS增殖作用的时间依赖性,Hoechst染色检测细胞凋亡,Westernblot法及免疫细胞化学法检测细胞内β-catenin的表达变化。结果:S100A6作用3d时,浓度为30、100、300和1000μg/ml的重组S100A6(GST-S100A6)组的OD值分别比相应浓度的GST对照组的OD值减少20.5%、23.7%、32.2%和36.8%,P<0.05;蛋白浓度为100μg/ml时,GST-S100A6组的细胞数在前2d与GST组相似,第3、4、5d的细胞数分别降低到GST组的59%、46%、48%,P<0.05;GST-S100A6干预3d后细胞凋亡率增高3.16倍,P<0.01;免疫细胞化学法测得经GST-S100A6处理3d后β-catenin的平均光密度值比GST组增加22.9%,P<0.01;经携带S100A6基因的重组腺病毒(Ad-S100A6)处理3d后,Westernblot法检测细胞中β-catenin的校正灰度值为1.4204±0.1999,比对照组(Ad-GFP组,0.9996±0.1000)显著增高,P<0.01。结论:外源性S100A6能够抑制U2OS细胞的增殖、促进其凋亡和增加U2OS细胞中β-catenin水平。

槲皮素下调hTERT表达对肝癌HepG2细胞生长影响研究

目的观察槲皮素对肝癌HepG2细胞生长及对hTERT基因表达的影响。方法以台盼蓝拒染法计数肝癌细胞的生长抑制率,透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化,western-blot、RT-PCR检测hTERT基因表达改变,PCR-TRAP法检测端粒酶活性。结果台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48h后的Ic50为25.5μm。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,流式细胞仪检测表明经10～20μm/L的槲皮素处理,肝癌HepG2细胞周期阻滞于G0/G1期,且HepG2细胞hTERT蛋白和mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制。结论槲皮素能抑制肝癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导HepG2细胞发生凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。

HBX基因重组腺病毒载体的构建

目的 :构建携HBX基因的腺病毒载体 ,为进一步研究HBX基因的功能 ,为阐明HBV感染导致肝癌的机制研究建立基础。方法 :采用PCR技术从HBV全基因组DNA中扩增HBX基因 ;将HBX基因亚克隆至质粒 pHAHA ,构建质粒 pHAHA-HBX ,酶切pHAHA -HBX质粒 ,将HAHA -HBX片段克隆到腺病毒载体 pAd -Track -CMV中 ,得到 pAdTrack -CMV -HBX ,同时与 pAdEasy - 1共转染 2 93细胞 ,确定转染效率。检测培养上清病毒中HBX的存在。结果 :将PCR扩增HBX片段成功克隆到腺病毒载体中 ,并经序列分析证实 ;建立了产病毒细胞株 ,证实重组病毒中含有HBX基因。结论

RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子表达

目的:应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达。方法:将VEGF基因作为RNA干扰的靶区,通过E-RNAi网上提供的服务,设计两个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6启动子的载体上,构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA(shRNA)表达载体,再转染人胚肾细胞HEK293、结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela和肝癌细胞HepG2,通过RT-PCR、Northern杂交和免疫荧光观察VEGF表达受抑的程度。结果:成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达载体,RT-PCR发现其在HEK293和HT29细胞系中,能明显抑制VEGF基因的表达,抑制率分别为72%和42%,但在Hela和HepG2细胞中的抑制率仅为28%和13%;Northern杂交显示,在HEK293细胞和HT29细胞中,VEGFmRNA明显受抑,抑制率达88%和89%;免疫荧光显示,在HT29细胞中,VEGF蛋白表达的受抑制率为73%。结论:针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制VEGF基因的表达,但在不同细胞系中的作用强度存在差别。

过表达外源性CCN1对人骨肉瘤细胞系143B生长和迁移的影响

采用AdEasy系统构建带有标记基因GFP和FC的重组腺病毒AdCCN1,并感染人骨肉瘤细胞,观察外源性CCN1对肿瘤细胞生长和迁移的影响.PCR扩增FC编码序列标记的人CCN1,克隆到pAdTrack-TO4中获得重组穿梭载体pAdTrack-CCN1.PmeⅠ线性化该质粒并电转到有腺病毒骨架质粒的BJ/AdEasy-1菌中,同源重组获得腺病毒质粒pAdCCN1,PacⅠ线性化并转染293细胞,包装制备AdCCN1.卡那霉素抗性筛选、XbaⅠ与KpnⅠ酶切鉴定,荧光显微镜和Western印迹检测标记基因GFP和FC表达,鉴定获得的复制缺陷型重组腺病毒AdCCN1.AdCCN1与AdGFP分别感染人骨肉瘤细胞143B,通过MTT实验、胶原集落形成实验、划痕愈合和室移动实验,观察CCN1对143B增殖和迁移的影响.酶切鉴定表明,带有FC标记的CCN1被成功克隆到穿梭载体pAdTrack中.卡那霉素抗性筛选并酶切鉴定,获得重组腺病毒质粒pAdCCN1.Western印迹和荧光显微镜观察,确定与CCN1共表达的FC和GFP表达.AdCCN1感染骨肉瘤细胞,与对照比较细胞数量增多,集落形成增加,细胞划痕逐渐愈合,迁移至膜上的细胞数量明显增加.应用AdEasy系统高效快速构建了带有标记GFP和FC的重组腺病毒AdCCN1,为监控腺病毒转基因的效果提供了便捷的工具.AdCCN1感染骨肉瘤细胞后可促进细胞增殖和迁移,提示CCN1在肿瘤发生和转移中可能起到重要作用.

人S100A2-GST融合蛋白原核表达和纯化

目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量。结果:XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300bp和5kb,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36kD的蛋白,产率达5mg/L菌液;Glutathion-Sepharose4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92%;Western Blot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白。结论:成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose4B球珠可获得纯度达92%的该蛋白。为后续有关hS100A2的研究打下了基础。

外源性FrzB拮抗Wnt信号转导并抑制人骨肉瘤细胞143B增殖

目的 Wnt信号异常激活与肿瘤发生有关,观察Wnt信号的天然拮抗剂FrzB对Wnt信号转导的影响和对肿瘤细胞增殖抑制。方法采用AdEasy系统构建重组腺病毒AdFrzB;卡那霉素抗性筛选、酶切鉴定及荧光显微镜和Western blot检测标记基因GFP和His表达等方法鉴定AdFrzB。AdFrzB与AdWnt3A共感染人骨肉瘤细胞株143B,AdGFP与AdWnt3A共感染为对照,β-catenin/Tcf荧光素酶反应系统检测FrzB对Wnt信号转导的影响;MTT实验检测FrzB对细胞增殖的抑制。结果卡那霉素抗性筛选及酶切鉴定获得pAdFrzB-His;检测到报告基因GFP和His表达,确证AdFrzB构建成功。FrzB抑制了Wnt信号转导并抑制了143B细胞增殖。结论 AdEasy系统有效构建了AdFrzB;外源性FrzB拮抗Wnt信号转导并抑制143B细胞增殖,FrzB可能是一种天然抗肿瘤因子。

人S100A6对人骨肉瘤细胞系β-catenin的作用

目的研究人S100A6对人骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中β-catenin的作用。方法分别用携带人S100A6及其siRNA基因的重组腺病毒AdS100A6和AdSiS100A6感染MG63和U2OS,分别使细胞中S100A6表达上调和下调;RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测细胞中β-catenin mRNA和蛋白表达。结果上调骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中S100A6后,β-catenin mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05),蛋白的增加以胞核更明显。下调S100A6则使细胞中β-catenin mRNA及蛋白表达减少(P<0.05),蛋白的减少也以胞核更甚。结论增加Wnt信号途径活性可能是S100A6参与肿瘤发生发展的机制之一。

Cyr61在单纯及放创复合伤愈合过程中的表达及其临床意义

目的研究Cyr61在单纯和放创复合伤愈合过程中的表达变化,对伤口愈合和组织改建的影响,及其在创伤实验室诊断中的意义。方法制备单纯及放创复合伤动物模型,采用光镜、免疫组化、RT-PCR等方法,动态观察伤口愈合过程中Cyr61mRNA及蛋白表达变化规律。结果5Gy(γ射线)全身照射后对伤口愈合有明显的损害作用。在伤后第3、6、9、15天,Cyr61表达量均随创伤愈合时间延长而增加;但在同一时间点,放创复合伤组Cyr61蛋白和mRNA的表达量均低于单纯创伤组,第21天放创复合伤组表达继续升高,而单纯创伤组表达下降。Cyr61表达时相拖后与辐射所致伤口愈合延迟一致。结论Cyr61在放创复合伤肉芽组织中表达较单纯创伤组明显降低,影响细胞迁移、新生血管形成和组织改建等重要过程,这可能是辐射所致伤口难愈的重要原因之一,认识Cyr61在创伤愈合过程的表达规律有助于创伤的预后判断和治疗。

过表达外源性CCN1对大鼠放创复合伤愈合的影响

目的观察过表达外源性CCN1对大鼠放创复合伤愈合的影响,并初步探讨其机制。方法利用AdCCN1感染CHO细胞及放创复合伤大鼠创面,Western blot法鉴定CCN1在CHO细胞的分泌和创面组织细胞中的表达,感染后7d取创面组织制作石蜡切片,HE染色观察创面愈合情况,免疫组化检测MMP1、TIMP1、bFGF等创伤愈合相关因子表达。结果 CCN1在CHO细胞和创面组织中均高表达,与AdRFP组相比,AdCCN1组创面成纤维细胞增多,微血管密度增高,MMP1、TIMP1、bFGF等创伤愈合相关因子表达均升高。结论 CCN1具有促进放创复合伤愈合的作用,其机制可能与CCN1促进成纤维细胞增殖和迁移,促进血管形成,并且调控创伤修复相关因子表达有关。

Wnt/β-连环蛋白信号途径活性的分析系统的建立

目的 :建立Wnt/ β -连环蛋白信号途径功能活性的分析系统。 方法 :首先构建一个表达 β -连环蛋白 -绿色荧光蛋白的融合蛋白的载体 ,pCMV -bcGFP ;再用之转染HEK2 93细胞 ,用G4 18和LiCl筛选出稳定表达该融合蛋白的细胞 ,克隆建株并鉴定。结果 :成功获得稳定表达该融合蛋白的细胞株 ,即 2 93-bc -GFP细胞株 ;在荧光显微镜下以及蛋白质印迹分析证实 :所获得的 2 93-bc -GFP细胞株表达该融合蛋白的基础水平极低 ;用Wnt1和LiCl处理后可以明显地使该融合蛋白在细胞内的水平升高。结论 :上述结果提示该分析系统是以Wnt依赖的方式、受 β -连环蛋白调节的。该分析系统可以用作一个功能报告系统 ,以鉴定肿瘤发生中导致 β-连环蛋白信号途径失调的潜在的上游因子 ,也同样可以用于筛选那些特异抑制人类肿瘤中

武汉大学临床医学专业教育改革的探索与实践

为了提高医学人才培养质量,武汉大学与芝加哥大学合作进行临床医学专业教育改革,以临床为导向有机整合课程,开展早临床、多临床实践和社区医学教育,加强医学生人文及伦理与职业道德教育,改革教学方法,推行小组病案讨论式、参与式学习,实施形成性评价.密切跟踪教改试点班的教学效果,多方大量问卷调查结果综合提示,初步构建的新课程体系和教学模式符合当前我国教育体制和医疗卫生体制改革的方向,有利于临床医学专业学生综合能力的培养.