Yes相关蛋白在脂多糖诱导肺癌A549细胞增殖中的作用研究

目的慢性炎症与肿瘤的发生发展密切相关,但具体机制不详。文章旨在探讨脂多糖对肺腺癌A549细胞增殖的影响,并阐明YAP在其中所发挥的作用。方法培养人肺腺癌A549细胞,应用CCK-8法检测不同浓度LPS对A549增殖的影响,用Western blot、免疫荧光技术检测LPS处理后A549中YAP定量及定位的变化;实验设空白组、NCsiRNA组、YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组细胞,分别提取RNA及蛋白,通过siRNA抑制YAP表达,Western blot、RT-PCR检测siRNA抑制率;实验设对照组、LPS组、YAP siRNA组、YAP siRNA+LPS组,用CCK-8再次检测抑制YAP表达后LPS对A549细胞增殖影响。结果 LPS处理72 h后,与0μg/m L LPS处理后A值比较,0.01、0.1、1μg/m L处理后A值明显增大(P<0.05),0.1μg/m L LPS处理后细胞增殖能力仍最强。Western blot检测发现,与0μg/m L浓度比较,其他浓度的LPS处理A549细胞48 h后,均能上调YAP总蛋白的表达(P<0.05),其中以0.1μg/m L浓度最明显。RT-PCR检测结果显示,与空白组比较,YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组YAP mRNA的表达明显降低(P<0.05);与NC siRNA组比较,YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组YAP mRNA的表达明显降低(P<0.05)。Western blot检测结果与RT-PCR一致,转染YAP siRNA后能够显著抑制A549细胞中YAP蛋白的表达,其中以YAP siRNA1的抑制率最高(P<0.05)。与对照组比较,LPS组24、48、72 h A549细胞均明显增殖(1.17±0.08 vs 1.47±0.08、1.95±0.16 vs 2.35±0.07、2.46±0.07 vs 3.01±0.08,P<0.05);与LPS组比较,YAP siRNA+LPS组48、72 h A549细胞增殖能力(1.92±0.15、2.38±0.07)明显减弱(P<0.05)。结论低浓度的LPS能够通过上调核内YAP的表达来促进A549细胞的增殖,这为LPS诱导的肺癌细胞增殖机制提供了新的理论依据。