中药有效成分在干扰素生物技术实验与临床研究中的应用

中草药是我国的宝贵财富,刺五加、茯苓、银耳、云芝等均具有抗菌、抗病毒、免疫调节和抗肿瘤作用。而干扰素(IFN)的三种类型(α、β、γ)也具有这种生物学效应,为了研究上述补气类中药有效成分这一药理效应的物质基础和分子介质,本文用刺五加甙及其多糖,羧甲基茯苓多糖、银耳多糖。

鼠抗人B7-1分子功能性单克隆抗体的制备及生物学特性

目的 :制备鼠抗人B7 1分子的功能性单克隆抗体 ,研究其对高表达相应配基分子细胞的生物学效应。方法 :用两株转人B7 1基因细胞株XG7 B7和L B7分别作为免疫原及检测细胞株 ,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。以快速定性试纸分析法鉴定单抗所属的小鼠IgG亚类 ,采用竞争抑制及间接免疫荧光法分析单抗的特异性和亲和力 ,以高表达B7 1分子的恶性淋巴瘤细胞Raji和Daudi为靶细胞 ,分析单抗对其生长的影响。以人多发性骨髓瘤细胞转入B7 1基因细胞株XG1 B7为刺激细胞 ,以人外周血单个核细胞 (PBLs)为反应细胞 ,用MTT法分析单抗的中和活性。结果 :成功地获得了 1株鼠抗人B7 1的功能性单克隆抗体 (克隆 4E5 ) ,属于小鼠IgG1亚类 ,经流式细胞仪分析 ,4E5与PBLs、体外人工诱导的树突状细胞(DCs)、Raji和Daudi的阳性结合率分别为 10 2 %、95 1%、92 7%及 89 2 % ;能完全阻断标准抗人B7 1单抗与相应抗原的结合。同时还发现 ,单抗 4E5能显著地抑制恶性淋巴瘤细胞Raji和Daudi的生长繁殖 ,并能阻断B7分子介导的协同刺激信号的传导。结论 :单克隆抗体 4E5是一株抗人B7 1分子的功能性单抗 ,具有重要的研究和应用价值。

人脑星形细胞瘤组织中低氧诱导因子1α与p53的生物学意义

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与p53在脑星形细胞瘤中表达的生物学意义。方法采用免疫组织化学SP法,检测HIF-1α、p53在59例不同病理分级脑星形细胞瘤组织中的表达情况。结果59例脑星形细胞瘤组织中,HIF-1α、p53表达的阳性率均为47·5%。其中,HIF-1α与病理分级有统计学意义(P<0·05);随肿瘤级别的升高,HIF-1α、p53蛋白的共表达率也有升高。结论HIF-1α蛋白的表达与脑星形细胞瘤的病理分级相关;HIF-1α、p53蛋白的共表达可能与肿瘤细胞恶性演进有关。

对苏州市部分医务工作者论文写作情况的调查

目的 了解医务工作者论文写作的基本情况和存在问题 ,以便有针对性开展继续教育。方法 设计“论文写作情况调查表” ,进行问卷调查。结果 被调查的医务工作者正式发表论文不多 ,以第一作者发表的论文尤少 ,约有 40 %～ 50 %的医务工作者迄今尚未发表过论文 ,其原因主要是尚未开展科学研究工作 ,对论文写作的要求和格式也不甚了解。结论 医务工作者在开展业务工作的过程中 ,应自觉开展科研工作 。

[A_(15)Asn,A_(17)Pro,A_(21)Ala]-胰岛素的体内外生物活性

A 15 Asn,A 17 Pro,A 21 Ala] insulin was synthesized by the Fmoc solid phase synthetic method to study the biological significance of the helix in the C terminal region of A chain of insulin.In order to make this helix unable to form,Asn and Pro were utilized to substitute A 15 Gln and A 17 Glu,respectively,according to the Chuo Fasman method.The biological activity assays showed that this insulin analogue held only 10% of the biological activities of native insulin.The results suggest that the loss of the A12 18 helix in A chain leads to a remarkable decrease of biological activities of insulin,and this helix is significant to the three dimensional structure and biological functions of insulin.

CD40分子及其介导的生物学效应

ＣＤ４０是分子量４８ｋｄ的细胞表面分子，表达于许多类型的细胞，包括Ｂ细胞和其他一些抗原递呈细胞如单核细胞、树突状细胞、内皮细胞及一些肿瘤细胞。ＣＤ４０分子是Ⅰ型跨膜糖蛋白，其基因定位于２０ｑ１１，属肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ）超家族［１］。该家族成员...

一株新的鼠抗人2IgB7-H3功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

研制功能性鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体。以人2IgB7-H3基因转染细胞1．929／2IGB7-H3为免疫原，常规免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠；利用B淋巴杂交瘤技术，将免疫小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞株SP2／0融合，1．929／2IGB7-H3细胞为抗原筛选阳性细胞；经间接免疫荧光标记法对杂交瘤细胞进行反复筛选和多次克隆化培养；采用快速定性试纸法鉴定单抗Ig亚类；利用竞争抑制性实验分析该单抗识别的抗原表位；采用MTT法分析该单抗在体外阻断DC对T细胞的促增殖效应。结果：获得了1株持续稳定分泌鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为7D7），该单抗可特异识别1．929／2IGB7-H3分子和介导有效的共刺激信号。该单抗的成功获得和其生物学特性的初步鉴定，为进一步研究B7-H3两个异构体在DC细胞及肿瘤细胞上的作用机制奠定了物质基础。

SDF-1、CXCR4在造血系统中的表达与生物学功能研究

趋化因子是血液学基础与临床研究的一个热点,近年来对趋化因子在造血干/祖细胞动员和归巢以及白血病细胞播散中的作用研究发现,基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)及其受体CXCR4在这些生理和病理过程中发挥关键的作用。本文就SDF-1/CXCR4趋化因子及受体的基本结构和在造血系统中的表达及其与干祖细胞、白血病细胞的作用进行综述。

小鼠腹水IgM型单抗的纯化

目的：为了建立一种从腹水中获得高纯度ＩｇＭ 抗体的纯化方法。方法：分别以硫酸铵沉淀或优球蛋白沉淀结合凝胶过滤法，从腹水中纯化ＩｇＭ 型单克隆抗体。结果：用优球蛋白沉淀结合凝胶过滤，纯化的ＩｇＭ 抗体纯度＞ ９０％ ，明显优于硫酸铵沉淀结合凝胶过滤法纯化的ＩｇＭ 抗体纯度（ ＜６０％ ）。结论：优球蛋白沉淀结合凝胶过滤是一种获得高纯度ＩｇＭ 抗体的方法。

羧甲基茯苓多糖和PHA诱导人外周血淋巴细胞产生GM-CSF的研究

健康人外周血淋巴细胞在羧甲基茯苓多糖与PHA等的刺激诱导下共同培养7d后可获高效价粒-巨噬细胞集落刺激因子。该制剂经特殊处理后可达到临床药用标准。

Fas/FasL系统在肿瘤细胞耐药中的作用

目的：探讨凋亡基因Ｆａｓ／ＦａｓＬ对肿瘤细胞耐药性的影响。方法：多发性骨髓瘤敏感株ＲＰＭＩ８２２６和耐药株ＲＰＭＩ８２２６／Ｄｏｘ４０分别和Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ、ＣＨ１１作用，在不同时间和浓度下观察二株细胞的Ｆａｓ／ＦａｓＬ的表达和死亡情况。结果：Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ能上调Ｆａｓ／ＦａｓＬ在敏感株肿瘤细胞表面的表达，从而激发ＰＣＤ，而耐药株则无此作用。结论：耐药细胞通过改变其Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统的表达拮抗化疗药物引起的ＰＣＤ。

恶性造血细胞表面Flt3受体的表达及其对Flt3配体的反应性研究

目的 :研究恶性造血细胞表面Flt3受体的表达 ,TNFα和地塞米松 (DXM )对Flt3受体表达的作用及重组人Flt3配体 (rhFL)对恶性造血细胞增殖的影响。方法 :用流式细胞仪测定 18株体外培养的恶性造血细胞株细胞表面Flt3受体 ,用MTT法测定rhFL对恶性造血细胞增殖的影响。结果 :5株细胞表面存在Flt3受体。B淋巴瘤细胞株Raji、Daudi及多发性骨髓瘤细胞株 82 6 6表达高水平Flt3受体 ;髓系白血病细胞株HL 6 0和多发性骨髓瘤细胞株XG 6表达低水平的Flt3受体。用 10 -6mol/LDXM培养 2 4h后 ,上述细胞Flt3受体表达降低 ;用2 0ng/mlTNFα培养 2 4h后 ,Raji和 82 6 6细胞Flt3受体表达降低 ,HL 6 0和XG 6细胞Flt3受体表达增高 ,Daudi细胞Flt3受体表达不受影响。rhFL在 10～ 10 0ng/ml浓度时 ,刺激Raji和HL 6 0细胞的增殖 (P <0 0 5 ) ,但对绝大多数的恶性造血细胞体外无刺激作用。结论 :多数恶性造血细胞不表达Flt3受体 ;rhFL也不引起此类细胞的增殖。地塞米松降低Flt3受体的表达 ,有可能用于防止或降低FL对部分恶性造血细胞的刺激作用 ,使FL的应用更为安全。

p53基因、Bcl-xL基因表达对淋巴性肿瘤细胞株辐射敏感性的影响

本文运用 PCR- SSCP银染法检测人淋巴细胞恶性肿瘤株 82 2 6、U2 66、Raji、Jurkat、Daudi p53基因状态 ,RT- PCR半定量检测 Bcl- x L的 m RNA的相对表达 ,DNA片段释放法检测细胞受照后 2 4 h的细胞 DNA链断裂量 ,探讨了 p53基因功能状态及 Bcl- x L基因表达对细胞株 82 2 6、U2 66、Raji、Jurkat、Daudi辐射敏感性的影响。结果表明 ,淋巴细胞恶性肿瘤株 82 2 6、U2 66、Raji、Jurkat、Daudi均存在 p53基因突变 ,高表达 Bcl- x

内皮抑制素抑制TNFα和IL-8介导的血管内皮细胞增殖及其表面粘附分子的表达

目的：探讨重组人内皮抑制素对 ＴＮＦα和ＩＬ－８介导的人血管内皮细胞株（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｏｆ ｖｅｓｓｅｌｓ，ＥＣＶ）细胞增殖的抑制作用，并观察内皮抑制素对ＥＣＶ表面粘附分子表达的影响。方法：用ＭＴＴ法测定ＥＣＶ的增殖；用间接免疫荧光法，在流式细胞仪上测定 ＥＣＶ表面粘附分子的表达。结果：内皮抑制素浓度在 １００～１００００ ｎｇ／ｍｌ时，能显著抑制ＥＣＶ的增殖（Ｐ＜０．０１），并抑制ＩＬ－８和ＴＮＦα介导的ＥＣＶ增殖，且呈剂量依赖性关系。内皮抑制素在 １００～１０００ ｎｇ／ｍｌ时可抑制内皮细胞表面ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ４０等粘附分子的表达。结论：内皮抑制素不但可抑制血管内皮细胞的增殖，控制肿瘤新生血管的形成，而且可抑制血管内皮细胞表面粘附分子的表达，对肿瘤的转移亦可能起抑制作用。

癌肿与氨基酸代谢的研究

研究了癌肿与氨基酸代谢的关系。这些癌肿包括喉癌HepⅡ细胞 ,急性非淋巴细胞白血病和急性淋巴细胞白血病 ,结果表明 :( 1 )喉癌细胞株培养过程中亮氨酸、赖氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、甘氨酸以及苏氨酸等水平明显降低 ,而色氨酸水平明显增加 ,说明喉癌细胞的生长繁殖必须依赖以上 7种氨基酸同时释放了色氨酸 ;( 2 )急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)患者血浆中的谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸等水平明显升高 ,而苏氨酸、组氨酸、丙氨酸等水平明显降低 ,这些结果与国际报道相一致 ;( 3)经治疗后 ,ANLL患者血浆中甘氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等水平明显降低 ,而丙氨酸、组氨酸等水平明显升高 ,表明肿瘤细胞处在无氧代谢。患者经治疗后色氨酸和苯丙氨酸水平降低和组氨酸水平的升高对患者预后是有益的 ;( 4)急性淋巴细胞白血病患者血浆中苯丙氨酸、赖氨酸、色氨酸和酪氨酸水平提高 ,这些氨基酸能促进肿瘤生长 ,而门冬酰胺、谷氨酰胺以及天冬氨酸水平降低 ,说明这 3种氨基酸为肿瘤生长所必须。此外还发现ALL患者外周淋巴细胞中精氨酸水平增加 ,精氨酸对癌肿细胞有直接杀伤作用。

CD40分子在树突状细胞抗人多发性骨髓瘤免疫应答中的作用及其机理

目的 :为研究CD40分子在人树突状细胞 (DC)抗多发性骨髓瘤 (MM)中的作用及其机制。方法 :采用CD40配体(CD40L)转基因细胞及抗CD40的激发型单克隆抗体在体外激发DC ,并通过DC细胞计数、形态学和细胞表型分析、IL 12定量检测、DC对MM抗原的摄取及混合淋巴细胞反应等手段对其进行研究。结果 :CD40分子配基化可促进DC的体外增殖和分化 ,使DC增加分泌IL 12 ,并下调DC摄取抗原的能力 ,促进DC的成熟 ,同时赋予DC激发自体CD8+细胞增殖的作用 ,使后者对MM细胞产生特异性的杀伤作用。结论 :CD40分子激发不仅有利于DC的增殖、分化和增强激发T细胞增殖 。

FL转基因细胞的构建及膜型FL对U937细胞的体外促增殖效应

目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。采用RT-PCR和流式细胞仪表型分析等方法进行鉴定。MTT法分析了L929/FL细胞和可溶性FL体外刺激U937细胞的增殖效应。结果成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞L929/FL,膜型FL在体外能够有效促进U937细胞增殖,而可溶性FL并不能有效促进U937细胞的体外增殖。结论成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞,并且提示膜型FL在白血病发病机理中可能具有重要作用。

酶联免疫吸附试验终止剂的比较研究

酶联免疫吸附试验终止剂的比较研究梁中琴，穆荣普（苏州医学院生物技术研究所，江苏苏州２１５００７）终止剂作为在ＥＬＩＳＡ试验中的影响因素之一至今未能引起人们足够的注意。为此我们选择６种常用的终止剂进行较为系统地比较研究。为终止剂的优化提供依据，兹将实验...