脐血免疫细胞与脐血干细胞移植的关系

脐血干细胞移植已广泛应用于多种恶性和非恶性疾病的治疗,结果令人鼓舞.脐血免疫功能相对不成熟,其T、B淋巴细胞在表型、功能和免疫调控因子及膜受体的表达等方面,与成人外周血细胞存在着诸多差异,这是脐血干细胞移植后GVHD发生率较低的重要原因.脐血NK和LAK具有较强的杀伤活性,可能在移植物抗白血病效应(CVL)中发挥重要作用,这尚有待大宗病例证实.

脐血免疫细胞与脐血干细胞移植的关系

脐血临床应用的不断深入,极大地促进了脐血免疫细胞生物学特性的研究。脐血造血和免疫功能在发育上相对不成熟。脐血T、B淋巴细胞在表型、功能和免疫活性分子及许多膜受体的表达等方面,与成人外周血存在着诸多差异。这是脐血干细胞移植后移植物抗宿主病发生率较低的主要原因。脐血自然杀伤细胞和淋巴因子活化的杀伤细胞活性正常,有望成为脐血过继免疫疗法的主力军。

人β-NGF基因在COS-7细胞中的表达及其生物学活性的研究

目的研究人β-神经生长因子(β-NGF)cDNA在真核细胞中的表达及其表达产物的活性。方法将质粒pGEM-β-NGF进行酶切并回收β-NGF cDNA片段，构建重组真核表达载体pcDNA3-β-NGF。利用脂质体Lipofectamine方法转染COS-7细胞，对阳性克隆COS-7细胞的mRNA和培养上清分别进行Northern blot分析和观察对PC12细胞突起生长的作用。结果β-NGF基因在COS-7细胞中获得表达。阳性克隆COS-7细胞培养上清能够促进PC12细胞突起生长。结论目的基因在COS-7细胞中成功表达β-NGF蛋白，并具有良好的生物学活性。

热疗和顺铂对放射治疗人卵巢癌细胞的增强作用研究

目的 观察热疗和顺铂对放射治疗的增强作用，以探索一种临床更为有效的肿瘤治疗方法。方法 采用Ｘ线照射前或后的人卵巢癌细胞Ａ２７８０Ｓ（ 对顺铂敏感） 和Ａ２７８０ＣＰ（ 抗顺铂） 用顺铂和热疗处理，观察两者对亚致死剂量辐射损伤修复（ＳＬＤＲ） 的抑制作用。结果 热疗（４０℃，１ 小时） 或顺铂处理１ 小时均不能抑制这一修复，但两者联合应用则对两个细胞系均有明显效果。ＳＬＤＲ 的受抑程度取决于处理的时机。对于抗顺铂的Ａ２７８０ＣＰ，可观察到ＳＬＤＲ的抑制，而在敏感细胞Ａ２７８０Ｓ，除此之外还能观察到放疗敏感性的提高。结论 单独应用作用有限的热疗和低浓度顺铂联合应用可明显增强放疗疗效。

SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞移植研究中的应用

严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠是研究人造血干细胞增殖分化的一个理想的体内试验模型 ,近年来脐血造血干 /祖细胞体外扩增的研究成为干细胞移植领域备受关注的课题 ,通过采用有效的体内试验模型来进一步深入了解扩增后脐血造血细胞的移植潜能和造血活性。本文就SCID小鼠在脐血造血干

结核性与肿瘤性胸膜渗液中T淋巴细胞亚群分布比较研究

用单克隆抗体（ＯＫＴ３、ＯＫＴ４、ＯＫＴ５ ）经间接免疫荧光法分别检测１４例结核性胸膜炎及１２例肿瘤性胸膜炎患者胸腔积液中Ｔ淋巴细胞及其亚群。结果表明：结核性胸膜渗液中ＣＤ＋３、ＣＤ＋４Ｔ淋巴细胞群体均高于肿瘤性胸膜渗液，且后者ＣＤ＋４／ＣＤ＋４比率倒置。

3种疗法对人卵巢癌细胞的联合应用实验研究

为了观察低剂量率放疗、热疗和顺铂联合应用对人卵巢癌细胞的疗效，对１ 对人卵巢癌细胞系Ａ２７８０Ｓ（ 对辐射和顺铂敏感）和Ａ２７８０ＣＰ（抗辐射和顺铂） ，采用低剂量率（０．８８ｃＧｙ／ｍｉｎ） 放疗、热疗（４０ ℃）和顺铂（０ ．５～３．０ μｇ／ｍｌ）同时处理，观察３者联合应用的效果。结果Ａ２７８０ＣＰ对放疗和对顺铂均有较强的抵抗力，细胞存活率为６ ．０％ （１０ Ｇｙ） 和４５．０ ％（１．０ μｇ／ｍｌ，８ ｈ） ，但对热疗则比Ａ２７８０Ｓ稍敏感。如果３ 种处理方法同时应用，结果显示为很明显的协同作用。这一效果在Ａ２７８０ＣＰ更为明显，Ａ２７８０ＣＰ的存活率为３．８ ％（８ Ｇｙ，４０ ℃，１．０ μｇ／ｍｌ） 。结果显示，热疗、顺铂和低剂量率放疗３ 者联合应用有很好的临床应用前景，值得进一步深入研究。

IL-3体外促进脐血造血细胞增殖分化的效应

采用连续２次ＦｉｃｏｌＨｙｐａｑｕｅ分离，初步纯化脐血造血细胞，将其单个核细胞接种于经γ射线预处理的成人骨髓基质细胞层上，加入适量ＩＬ－３，并设不加ＩＬ－３的对照组，持续培养６周，定期检测非粘附细胞和集落形成细胞（ＣＦＣ）。结果：ＩＬ－３组３～６周非粘附细胞数和ＣＦＣ产率显著高于对照组，分别为对照组的２．７～４．５倍和１．６～２．３倍。

脐血LAK与CIK细胞杀伤活性研究

目的 寻求一种可用于过继免疫疗法的高效免疫活性细胞。方法 用多种细胞因子诱生CIK细胞 ,用MTT法测定LAK和CIK细胞杀伤活性。结果 在峰值期CIK细胞杀伤活性均显著高于LAK细胞 (P <0 .0 5 )。结论 CIK细胞与LAK细胞属不同的细胞毒性细胞 ,脐血CIK细胞的高杀伤活性提示其可能成为过继免疫疗法的生力军。

超低温冻存前后胎儿脐血中NK细胞活性的研究

目的 探讨影响胎儿脐血NK细胞活性的因素。方法 采用台盼蓝染色法检测NK细胞活性 ,脐血MNC用Ficoll分离液离心获得。结果 经液氮 (- 196℃ )冻存后脐血NK活性比冻存前显著提高。

人β-NGF基因的体外扩增、克隆及其序列的分析

目的 对人β－ ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析，为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法 本实验设计并合成一对特异性引物，采用聚合酶链反应分别从人脑ｃＤＮＡ 和人睾丸ｃＤＮＡ 以及人脑基因组ＤＮＡ中扩增出β－ 神经生长因子（β－ ＮＧＦ）基因，并和Ｔ４ 载体相连接，经筛选得到人β－ ＮＧＦ克隆，并用Ｓａｎｇｅｒ 双脱氧末端终止法进行序列分析。结果 凝胶电泳显示在预期的位置出现阳性条带。

人脑神经生长因子的分离和纯化及其生物学活性的鉴定

人胎脑经离心、透析和离子交换纤维素层析等方法，分离纯化２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）。根据７ＳＮＧＦ和其活性亚单位β－ＮＧＦ的等电点的不同，分离得到２．５Ｓ的ＮＧＦ。用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电脉测得其分子量约１３．３。用等电聚焦电泳测得其等电点分别为９．０、９．２和９．３５。在ＰＣ１２细胞的培养过程中，加入ＮＧＦ的提取物可以促进ＰＣ１２细胞的突起生长。

IL-3体外造血支持效应的初步研究

目的 :探讨IL 3体外促进脐血造血细胞增殖分化的效应。方法 :连续 2次Ficoll Hypaque分离 ,初步纯化脐血造血细胞 ,将其单个核细胞接种于经γ射线预处理的成人骨髓基质细胞层上 ,加入适量IL 3,并设不加IL 3的对照组 ,持续培养 6w ,定期检测非粘附细胞和集落形成细胞 (CFC)。结果 :IL 3组 3～ 6w非粘附细胞数和CFC产率显著高于对照组 ,分别为对照组的 2 .7～4.5倍和 1.6～ 2 .3倍。结论 :IL

结核性与肿瘤性胸腔积液IFN—γ活性的比较研究

用ｒ－干扰素（ＩＦＮ—ｒ）单克隆抗体经ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测结核性与肿瘤性胸膜炎胸腔积液２６例ＩＦＮ－ｒ含量。结果显示：结核性显著高于肿瘤性（Ｐ＜０．０１）。

人β-神经生长因子基因重组真核表达载体的构建

目的 构建 β 神经生长因子 (β NGF)基因重组真核表达载体 ,为 β NGF基因治疗和临床实验诊断研究打下良好的基础。方法 将质粒PGEM β NGF进行酶切获得 β NGF基因片段 ,用T4连接酶将其插入真核表达载体PcDNA3;以T7、P2为引物进行PCR ,论证插入片段的方向 ;经测序和酶切对插入片段进行分析和进一步鉴定。结果 PCR产物琼脂糖电泳结果显示 :在预期位置有阳性条带 ;序列分析和酶切结果证实插入片段序列正确。结论 β NGF基因重组真核表达载体PcDNA3 β NGF构建成功 ,为进一步开展 β NGF基因治疗神经系统疾病和临床实验诊断奠定了基础。

低剂量照射对LAK细胞体外杀伤肿瘤靶细胞的影响

作者采用３Ｈ－ＴｄＲ释放实验，观察了低剂量γ射线照射对ＬＡＫ细胞体外杀伤肿瘤靶细胞的影响。来自健康献血员的外周血淋巴细胞，用重组白介素２培养９６小时获取ＬＡＫ效应细胞，在细胞培养的不同时期（分别为２４，４８，７２小时）给予培养中的细胞一次不同剂量（分别为０．６６，１．３１，２．６２，５．２４ｍＧｙ）的γ射线照射。实验显示低剂量照射能够提高ＬＡＫ细胞体外杀伤肿瘤靶细胞的细胞毒活性，细胞培养７２小时给予照射的实验组细胞毒活性提高最为显著，与对照组相比有统计学差异。基于本实验结果，我们认为低剂量照射对ＬＡＫ细胞的杀伤活性具有辐射刺激作用。

胸膜渗液中IFN-γ、IL-2及NKCF活性的研究

有实验证明，结核性胸膜炎是研究局部细胞免疫的一个很好模型。因在结核性胸膜液中有多种免疫细胞聚集，势必也含有许多与免疫有关的细胞因子。本文对１４例结核性胸膜炎及１２例肿瘤性胸腔积液病人胸膜渗液中的细胞免疫成分进行了研究。测定其主要细胞因子的含量，以比较迟发型变态反应性的结核性胸水与免疫反应减弱的肿瘤性胸水中细胞因子含量的异同，进一步阐明两种疾病局部免疫的不同机制。我们所研究的细胞因子有γ-干扰素（ＩＦＮ-γ）、白细胞介素２（ＩＬ-２）和自然杀伤细胞毒因子（ＮＫＣＦ）。结果显示：结核性胸膜液中ＩＦＮ-γ、ＩＬ-２及ＮＫＣＦ活性均比肿瘤性渗液为高，以ＩＦＮ-γ含量为最高。