多药耐药基因在白血病细胞的高效转移与表达研究

目的 研究逆转录病毒介导多药耐药基因 MDR1的转移与表达。方法 用 MDR病毒转导人类白血病细胞K5 6 2和 NB4,获得耐药细胞系 ;外源性 MDR1基因的转移和表达用聚合酶链反应 (PCR)、流式细胞术 (FCM)和半固体集落培养法分析。结果 MDR病毒转导使白血病细胞获得经典多药耐药表型 ,78.0 %～ 98.7%的细胞表达 P-糖蛋白 ;PCR分析证实耐药细胞整合有 MDR原病毒 ,并共表达全长和异常剪切 MDR1转录本。以 K5 6 2细胞为模型 ,FCM和集落培养法发现共培养法的基因转导率 (6 7.9%～72 .5 % )明显高于上清法 (33.1%～ 46 .8% ) ,加入生长因子可提高基因转导率约 2 3%。结论 逆转录病毒可介导MDR1基因在髓系白血病细胞进行有效的转移与表达 ;

丁酸类衍生物联合维甲酸对APL原代培养细胞的诱导分化作用

目的 研究丁酸类衍生物联合维甲酸对急性早幼粒细胞白血病 (APL )患者原代培养细胞的诱导分化作用。方法 采集 2 8例 APL患者骨髓单个核细胞体外培养 ,将各种诱导剂稀释后加入培养体系达到所需的效应浓度 ,台盼兰拒染率判断细胞存活率 ,离心甩片制片瑞氏染色后光镜下观察细胞形态 ,检测 NBT还原率及 CD11b评价细胞分化程度。结果 各组诱导剂对细胞存活力与对照组之间无明显差异 ,加入 ATRA、BA/ATRA、TB/ATRA组 ,细胞形态向终末期分化成熟、NBT还原率、CD11b表达升高 ,以 BA/ATRA、TB/ATRA组成熟细胞所占比例、NBT还原率高于单用 A-TRA组 ,而且 ATRA用量减少至单用时的 10 %。结论 丁酸类衍生物联合维甲酸对 APL

急性髓细胞白血病细胞CD34抗原表达的临床及生物学意义

为研究CD34在急性髓细胞白血病（AML）中的临床及生物学意义．用流式细胞术检测了107例AMLCD34表达。结果显示48．5％的患者CD34阳性表达．M3（15．8％）低于其他亚型（P＜0．05）。CD34+者肝脾肿大常见．CD34表达在t（8；21）、正常核型及t（15；17）组分别为72．0％、40．7％及17．6％。CD34+者的完全缓解率（41．9％）明显低于CD34-者的59．6％（P＜0．05）。结果提示CD34抗原可能是成人初治AML预后差的一个标志．

抗人尿激酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人尿激酶受体单克隆抗体，为今后ｕＰＡＲ 病理生理作用及临床意义的研究提供新的手段。方法 利用杂交瘤技术，用经ＰＭＡ刺激的Ｕ９３７ 细胞与可溶性尿激酶受体（ｓｕＰＡＲ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠，与ＳＰ２／０ 细胞融合。结果 获得国内第１ 组４ 株抗人尿激酶受体（ｕＰＡＲ）单抗，分别命名为ＳＺ－ ９８、ＳＺ－ ９９ 、ＳＺ－ １００ 、ＳＺ－ １０１。结论 ４ 株单抗均能与ｕＰＡＲ 特异性结合，能与Ｕ９３７ 细胞及经ＰＭＡ作用的Ｋ５６２ 细胞反应。ＳＺ－ １０１ 与国外抗ｕＰＡＲ单抗３９３６ 有相同的ｕＰＡＲ 结合位点；而ＳＺ－９８、ＳＺ－ ９９ 与ＳＺ－ １００

T-载体在聚合酶链反应扩增产物克隆中的应用

目的 探讨克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增产物的简便方法。方法 用PCR方法分别特异性扩增Wilms瘤基因wt1和尿激酶受体 (UPAR)基因 ,并利用Taq聚合酶具有的延伸酶活性将扩增产物直接克隆入T -载体 ,EcoRⅠ酶切鉴定阳性重组子。结果 设计的引物可分别扩增wt1基因锌指区 (34 3bp)和UPAR基因编码区全长 (10 83bp) ;未经修饰的常规PCR和高保真PCR扩增产物可被直接克隆入pGEM -TEasy载体 ,其中正确重组率为 6 2 .5 %～ 87.5 % ;克隆的wt1基因和UPAR基因已被成功用于竞争性PCR或表达。结论 T -载体法是克隆PCR产物通用而有效的方法。

细胞遗传学和RT-PCR对APL诊断的临床意义

目的：探讨细胞遗传学及ＲＴ-ＰＣＲ检测对ＡＰＬ诊断的临床意义。方法：直接法或 ２４ ｈ培养法处理骨髓标本，采用Ｒ带或Ｇ带方法显带检测ｔ（１５；１７）易位，ＲＴ－ＰＣＲ检测ＰＭＬ－ＲＡＲａ融合基因。结果：形态诊断Ｍ３５５例，３例疑诊Ｍ３或Ｍ２；染色体检测５０例发现ｔ（１５；１７），敏感率９０．９１％，３例形态不能肯定诊断者染色体发现ｔ（１５；１７），诊断为Ｍ３Ｖ型；有ｔ（１５；１７）易位者均检测到ＰＭＬ－ＲＡＲａ融合基因，３例无ｔ（１５；１７）易位者，ＲＭＬ－ＲＡＲａ检测阳性。３例误诊者均经染色体及融合基因检测排除。结论：细胞遗传学ｔ（１５；１７）及融合基因ＲＭＬ－ＲＡＲａ检测是诊断ＡＰＬ的可靠指标，ＲＴ－ＰＣＲ融合基因检测更为敏感。

hGM-CSF受体β亚单位胞浆域在配体胞吞过程中的作用

目的 探索人粒－ 巨噬细胞集落刺激因子受体（ｈＧＭ－ Ｒ）β亚单位胞浆域在配体诱导的胞吞过程中的作用。方法 通过ＰＣＲ 扩增技术，构建β亚单位胞浆域缺失突变子（１４４１、１５８２、１７２６ 、２３５４ 和Ｓｍａ），然后将野生型或突变型β亚单位和ＧＭ－ Ｒα亚单位ｃＤＮＡ共转染入ＣＯＳ－７ 细胞，并对转染细胞的配体胞吞进行检测。结果 以低亲和力方式与配体结合的ＣＯＳ－ ＧＭ－ Ｒα胞吞水平仅为结合配体的７％ ，而以高亲和力方式与配体结合的ＣＯＳ－ ＧＭ－ Ｒα／β胞吞水平则达３７％ ，为前者的５ 倍，这种胞吞现象可被丝氨酸／苏氨酸激酶抑制剂Ｈ－ ７ 和星形孢菌素抑制，但不被酪氨酸激酶抑制剂木黄酮和制表菌所抑制；从β亚单位胞浆域结构与胞吞关系可见，Ｃ 末端１２２ 个氨基酸缺失可使胞吞受抑，而该１２２ 个氨基酸上游的３００ 个氨基酸区域缺失则可使胞吞水平显著提高。结论 有效的胞吞需要高亲和结合力的功能受体存在，且胞吞过程不涉及酪氨酸激酶磷酸化；而β亚单位胞浆域对胞吞有正性或负性调节作用。

髓细胞白血病的分子遗传学监测

肿瘤发生是多种基因异常的共同结果,因而检测基因改变可用于肿瘤监测。约1/3急性髓细胞白血病(AML)可发生N-ras原癌基因点突变。随着简便、灵敏的半固相微测序法的建立,它将用于监测AML早期复发和定量检测残留白血病细胞;此外,髓细胞白血病患者降钙素基因高甲基化可作为判定疾病进展的分子标记,且特别有助于慢性髓细胞白血病(CML)分期。

血红蛋白H病15例实验室检查分析

采用溶血性贫血系列检测法对 15例血红蛋白H病患者进行检查分析 ,结果显示 80 %者有轻～中度血管内溶血 ,6 0 %以上者红细胞脆性明显降低 ,所有患者均有Hp量下降及异丙醇试验阳性 ;其中 70 %以上者可测得高铁血红素白蛋白。在 pH8.6电泳中均可见 1条快速区带 ,在pH6 .5电泳中均可见向阳极移动的Hb区带。

RT-PCR检测BCR-ABL基因中的几个问题

ＲＴ－ＰＣＲ是检测ＢＣＲ－ＡＢＬ蠹合基因的主要手段。本文阐述了不同临床表型的ＢＣＲ－ＡＢＬ 蠹合基因及其ＲＴ－ＰＣＲ检测常遇到的几个问题（即结果的正确评估和质量控制）。