三氧化二砷联合木黄酮抑制CML细胞增殖的研究

目的 探索三氧化二砷 (As2 O3)联合酪氨酸激酶抑制剂木黄酮抑制慢性粒细胞性白血病 (CML)细胞增殖的效应及可能机制 ,为临床应用提供理论依据。方法 以CML细胞系K5 6 2为模型 ,通过细胞增殖检测、形态学观察、肿瘤集落形成和琼脂糖凝胶电泳手段 ,观察比较As2 O3 与木黄酮对CML细胞的增殖抑制效应。结果 经≥ 2 5 μmol/LAs2 O3 和 5mg/L木黄酮处理 2天后的K5 6 2细胞可出现增殖受抑和凋亡的形态学改变及DNA片段化 ,二者具有协同抑制作用。结论 As2 O3 与木黄酮能分别或协同抑制K5 6 2细胞生长 。

一种新型重组抗体导向溶栓剂的体外溶栓研究

目的 :探讨一种新型重组融合基因抗体导向溶栓剂SZ5 1Hu scuPA的体外溶栓效力。方法 :通过转瓶扩大生产获得的大量基因重组融合蛋白SZ5 1Hu scuPA ,通过抗体竞争结合实验确定融合蛋白的抗体亲和力 ;进而与尿激酶进行不同浓度血小板血浆凝块体外溶栓比较。结果 :该融合蛋白体外纤溶活性为 390 0 0U mg ;其抗体亲和力是鼠源性单抗的 6 7% ;体外溶栓效力较uPA提高 4.1～ 8.4倍。结论 :体外溶栓结果证明 ,融合蛋白SZ5 1Hu scuPA既兼有与人活化血小板结合特性又有纤溶酶原激活剂特性的双功能分子 。

多药耐药基因在白血病细胞的高效转移与表达研究

目的 研究逆转录病毒介导多药耐药基因 MDR1的转移与表达。方法 用 MDR病毒转导人类白血病细胞K5 6 2和 NB4,获得耐药细胞系 ;外源性 MDR1基因的转移和表达用聚合酶链反应 (PCR)、流式细胞术 (FCM)和半固体集落培养法分析。结果 MDR病毒转导使白血病细胞获得经典多药耐药表型 ,78.0 %～ 98.7%的细胞表达 P-糖蛋白 ;PCR分析证实耐药细胞整合有 MDR原病毒 ,并共表达全长和异常剪切 MDR1转录本。以 K5 6 2细胞为模型 ,FCM和集落培养法发现共培养法的基因转导率 (6 7.9%～72 .5 % )明显高于上清法 (33.1%～ 46 .8% ) ,加入生长因子可提高基因转导率约 2 3%。结论 逆转录病毒可介导MDR1基因在髓系白血病细胞进行有效的转移与表达 ;

中国汉族人群vWF基因G2805A多态性研究

为研究中国汉族人群vWF基因G2805A多态性特点,应用PCR-DGGE技术结合Nla Ⅳ酶切分析,研究了60名中国汉族人120条染色体vWF基因G2805A的等位基因发生频率及杂合情况,并对28例DGGE电泳行为异常中的4例进行了DNA序列分析。结果发现,在中国汉族人群中存在vWF基因G2805A多态性,其等位基因发生频率分别为0.73(G)和0.23(A),理论杂合率为0.39,实际杂合率为0.40。这表明vWF基因G2805A多态性在中国汉族人群中具有较高的理论杂合率,可用于血管性血友病的遗传咨询和产前诊断。

中国汉族人vWF基因HhaⅠ和SmaⅠ限制性片段长度多态性研究

为了解中国汉族人vWF基因HhaⅠ和SmaⅠ限制性片段长度多态性特点,应用PCR技术结合HhaⅠ和SmaⅠ酶切分析研究了48个汉族人96条染色体等位基因的杂合情况。结果发现,96条染色体中HhaⅠ^+:HhaⅠ^-和SmaⅠ^+:SmaⅠ^-染色体的频率均分别为0.38:0.62(36:60),理论杂合率为0.47,且发现HhaⅠ和SmaⅠ呈完全连锁,未发现HhaⅠ^+/SmaⅠ^-或HhaⅠ^-/SmaⅠ^+染色体。提示在我国汉族人群中,在vWF基因的5’端均存在HhaⅠ和SmaⅠ的多态性位点。新的vWF基因分子遗传标记的建立和应用,对vWD的遗传咨询和产前诊断具有较高的实用价值。

血液病染色体检查失败因素分析

通过3948例血液病患者染色体检查，对其中未成功的276例的失败因素作了全面的回顾性分析。方法经染色体数据库查询，将失败因素归纳六组：Ⅰ．细胞太少，Ⅱ．细胞过多，Ⅲ．培养失败，Ⅳ．化疗期标本，Ⅴ．显带失败，Ⅵ．染色体质量差。结果引起失败的因素依次为W（38。8％），Ⅰ（29．3％），Ⅱ（12．7％），Ⅱ，Ⅳ（各76％），Ⅴ（最低4．0％）。AA失败率最高（23．3％）；短期培养失败率为16．2％，同时加直接法其失败率大大降低（2．3％）；年度失败率呈逐年下降趋势（近二年分别为1．4％和1．8％）。结论白血病本身所致的分裂指数低下和质量不佳往往是导致失败的主要原因。我们认为，为提高成功率必须注意以下几点：①抽取标本量要足够；②按有核细胞计数结果进行接种；③同时采用直接法和培养法制备染色体。

溶栓治疗的现状及研究进展

链激酶、尿激酶和重组组织型纤溶酶原激活剂已普遍应用于急性心肌梗死和其它急性血栓栓塞性疾病的治疗。新的溶栓药物 ,如茴香酰纤溶酶原 链激酶复合物、重组单链尿激酶和葡激酶有较高的纤维蛋白亲和性和体内半寿期较长的特点 ,已在临床上应用或试用。GPⅡb Ⅲa拮抗剂可预防冠状动脉手术或急性心肌梗死溶栓后的血管再闭塞 ,降低死亡率。凝血酶激活的纤溶抑制物 (TAFI)是血浆中新发现的纤溶抑制物。抗TAFI抗体和TAFI抑制物有促进纤溶作用 ,可望成为溶栓治疗的一个新的有效的药物。

包装细胞转导提高逆转录病毒滴度的研究

将含标志基因NeoR的逆转录病毒载体pLXSN用脂质体转染法导入包装细胞，然后利用宿生范围不同的包装细胞（PA317／GP＋envAm12与GP＋E86）相互转导来提高病毒滴度，并用敏感方法检测其安全性。结果显示脂质体DOSPER转染法获得生产细胞的病毒滴度为（2．0～8．0）×105CFU／ml，而病毒相互转导方法则为（2．8～16）×106CFU／ml，可提高滴度达10倍以上；以NIH3T3细胞为靶细胞证实NeoR基因可被重组病毒转移至靶细胞基因组，巢式PCR与标志基因补救分析均未能检测到野生型辅助病毒。提示“乒乓效应”为提高病毒滴度的有效方法且无辅助病毒产生，因而该基因转移系统是安全的。

第三代溶栓剂研究进展

近年来,为改进和完善临床上广为应用的第一、二代溶栓剂的不足,人们一点在努力研制具有高效、特异、安全、方便的第三代溶栓剂。本文综述了第一、二代溶栓剂存在的主要问题,第三代溶栓剂的研制策略及研究现状。

急性早幼粒细胞白血病对维甲酸产生耐药的机制及其对策的研究进展

目的 全反式维甲酸(ATRA)在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的应用使APL的缓解率大为提高,而且早期死亡率明显降低,但是ATRA治疗中复发的患者往往对ATRA产生耐药。本文就APL对ATRA产生耐药的机制及其对策作一综述。

重组SZ51Hu-scuPA融合蛋白的体外溶栓研究

目的 获得大量人源化抗人活化血小板单抗SZ5 1Hu和尿激酶原 (scuPA)融合蛋白SZ5 1Hu scuPA并测定该基因重组抗体导向溶栓剂的导向溶栓性。方法 通过转瓶扩大培养系统获得大量SZ5 1Hu scuPA ;通过抗体竞争结合实验证明融合蛋白的抗体亲和力 ;进而与尿激酶进行比较对不同浓度血小板血浆凝块的溶栓研究。结果 该融合蛋白在培养上清中的表达量为 5mg/ml;其纤溶活性为 390 0 0IU/mg ;抗体亲和力是鼠源性单抗的 6 7% ;体外溶栓效力较uPA提高 4 1～ 8 4倍。结论 该融合蛋白比uPA具有更高、更快的溶栓效率 。

血管性血友病及其相关基因研究

血管性血友病(von Willebrand Disease,vWD)是最常见的遗传性出血性疾病之一,发病率(5～10)/10万人口,最高达1%,是由于血浆中vWF因子质或量异常的疾病.vWF在初期止血过程中起着重要的作用.vWF既是血小板膜糖蛋白GpIb/Ⅸ复合物的受体,介导血小板粘附于受损的血管内皮组织,又是血浆中FVⅢ的载体,起着稳定FVⅢ,延长其半衰期的作用.vWD是一组高度异质性的遗传性疾病.利用我国人口众多,vWD的病人来源丰富的优势,提出适合我国的vWD患者正确的诊断和分型的方法,具有重要的临床意义.用分子生物学的手段对中国vWD患者进行分子生物学的研究,有助于了解中国vWD的分子病因,从而进一步证明vWF基因结构和功能的关系.该项研究的开展具有重要的理论意义.

抗人活化血小板单克隆抗体SZ-51的研制及其在血栓研究中的作用

血小板的活化是血栓形成过程中一个重要的病理过程.本研究室利用杂交瘤技术制备了国内第一株抗人活化血小板单克隆抗体SZ-51,并利用这株单抗对血小板的活化及其在血栓形成和血栓性疾病的发病机理、诊断和治疗中的应用价值等方面进行了研究.现将我室七年来在SZ-51方面研究的科研成果归纳如下:

人类白血病耐药特征、机理和逆转及其应用的研究

人类白血病耐药特征、机理和逆转及其应用的研究建立了具有高度稳定耐药表型的人类白血病细胞HL-60/VCR耐药株,对VCR的耐药是HL-60母株的500倍.与母株相比,耐药株HL-60/VCR的细胞生物学特性有所改变,并因单链DNA断裂修复能力的增强而对放射线辐射交叉耐受.

流式细胞术在检测血小板无力症中的意义

血小板上含有丰富的GPⅡ-Ⅲa,在血小板聚集时,GPⅡb-Ⅲa复合物上的纤维蛋白原受体与纤维蛋白原结合。血小板无力症(Glanzmann’s thrombasthenia,GT)患者是GPⅡb-Ⅲa复合物的质或量的缺陷所致血小板聚集异常。通常用聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western印迹等方法检测膜糖蛋白,但操作烦琐、费时费试剂。流式细胞术(FCM)及特异性单机的应用使血小板膜GP检测有了新突破,特别是纤维蛋白原结合试验使变异型GT的诊断成为可能。我们用FCM检测12例GT患者及其家属的血小板膜GP及纤维蛋白原结合并与SDS-PAGE和Western印迹做比较,以探索FCM方法对GT诊断的价值和意义。

Flt3基因在白血病中的表达及临床意义

目的：研究Ｆｌｔ３基因在不同类型、亚型白血病中ｍＲＮＡ表达、分布情况，以期阐明Ｆｌｔ３基因表达与疾病发生、发展的关系，探索Ｆｌｔ３基因作为白血病转归及预后指标的意义。方法：应用血细胞Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度分离法分离出外周血中原始细胞，采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），检测Ｆｌｔ３基因在１０９例恶性血液病患者外周血中表达。结果：初治 ＡＭＬ（急性髓细胞性白血病）中 Ｆｌｔ３基因 ｍＲＮＡ表达为 ９１.４％ ； ＡＬＬ（急性淋巴细胞性白血病）中表达率亦较高，为 ８２.３％；在急性白血病的 ＣＲ（完全缓解）病例中原 Ｆｌｔ３阳性表达可转为阴性；而 ＮＲ（未缓解）的患者则持续为阳性表达。ＣＭＬ（慢性髓细胞性白血病）中阳性表达为３３．９％，仅见于急变期及加速期，在慢性阶段则无表达。６例ＣＬＬ（慢性淋巴细胞性白血病）中的４例、４例ＭＤＳ（骨髓增生异常综合征）中的２例表达Ｆｌｔ３。结论：Ｆｌｔ３基因有望在白血病诊治过程中成为标志性基因。

丁酸类衍生物联合维甲酸对APL原代培养细胞的诱导分化作用

目的 研究丁酸类衍生物联合维甲酸对急性早幼粒细胞白血病 (APL )患者原代培养细胞的诱导分化作用。方法 采集 2 8例 APL患者骨髓单个核细胞体外培养 ,将各种诱导剂稀释后加入培养体系达到所需的效应浓度 ,台盼兰拒染率判断细胞存活率 ,离心甩片制片瑞氏染色后光镜下观察细胞形态 ,检测 NBT还原率及 CD11b评价细胞分化程度。结果 各组诱导剂对细胞存活力与对照组之间无明显差异 ,加入 ATRA、BA/ATRA、TB/ATRA组 ,细胞形态向终末期分化成熟、NBT还原率、CD11b表达升高 ,以 BA/ATRA、TB/ATRA组成熟细胞所占比例、NBT还原率高于单用 A-TRA组 ,而且 ATRA用量减少至单用时的 10 %。结论 丁酸类衍生物联合维甲酸对 APL