熊果酸抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制

目的:研究熊果酸(UA)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,并探讨其对p38MAPK信号通路的影响。方法:高糖(葡萄糖,25mmol/L)诱导VSMC增殖为模型,MTT法检测UA对细胞增殖的影响,Cell-based ELISA测定UA对p38MAPK磷酸化水平变化,采用SABC免疫组化法测定UA对细胞c-fos蛋白表达水平的影响。结果:UA(20,40μmol/L)能抑制高糖诱导的VSMC增殖作用(P<0.05)。UA组p38MAPK的磷酸化水平明显低于葡萄糖模型组(P<0.05),且c-fos的蛋白表达水平较模型组也明显降低。结论:UA可以抑制大鼠VSMC增殖,此作用可能与其抑制p38MAPK信号传导通路激活,从而下调c-fos蛋白表达有关。

熊果酸对蛋白质体外非酶糖基化反应的影响

目的研究熊果酸(ursolic acid,UA)对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响。方法采用L16(45)正交设计,以牛血清白蛋白(BSA)浓度,d-葡萄糖浓度和孵育时间3因素4水平正交试验,筛选出体外蛋白质非酶糖基化的最佳反应条件。并以此条件用荧光分光光度法观察UA对晚期糖基化终产物(advanced glycation endproducts,AGEs)形成的影响。同时,采用NBT法测定UA在体外对AGEs中间产物果糖胺(Amadori产物之一)形成的影响。结果正交试验结果显示,5g/LBSA,50mM d-葡萄糖及40d的孵育时间是蛋白质非酶糖基化反应的最佳条件,荧光分光光度法结果表明,UA(10、20、40μM)对AGEs的形成有明显的抑制作用(P<0.05or 0.01 vs模型组),且呈剂量依赖性。但UA在体外不能抑制果糖胺的形成。结论 UA可通过干扰早期糖基化产物-Amadori产物的深度糖基化来抑制AGEs形成,这可能是UA减轻糖尿病血管损伤的重要机制之一。

胰岛素对人肝癌HepG2细胞的侵袭特性及增殖能力的影响

目的探讨不同浓度胰岛素对肝癌细胞系Hep G2侵袭特性及体外增殖能力的影响及其可能机制。方法将人肝癌细胞系Hep G2细胞培养于不同胰岛素浓度的高糖培养基中,应用预铺Matrigel基质胶的Transwell小室检测不同胰岛素浓度对Hep G2细胞侵袭能力的影响;应用PI单染流式细胞仪技术检测不同浓度胰岛素对Hep G2细胞周期的影响;运用CCK-8方法检测不同浓度胰岛素对Hep G2细胞增殖能力的影响;同时应用RT-PCR检测不同胰岛素浓度培养的Hep G2细胞中MMP-2、、MMP-9转录水平的变化。结果在一定浓度范围内,Hep G2细胞的侵袭能力与胰岛素浓度成正相关(P<0.05);在一定浓度范围内,高浓度胰岛素能促进Hep G2细胞的体外增殖能力,并加快Hep G2细胞G0/G1至S期转换,加快细胞周期的进展(P<0.05);在一定浓度范围内,Hep G2细胞MMP-2、MMP-9转录水平与胰岛素浓度成正相关(P<0.05)。结论在一定浓度范围内,胰岛素可能通过上调基质金属蛋白酶表达水平促进Hep G2的侵袭能力,并通过驱动Hep G2细胞G0/G1至S期转换促进Hep G2细胞的增殖能力。

西红花酸对晚期糖基化终产物诱导牛血管内皮细胞E-选择素表达的抑制作用

目的:研究西红花酸(crocetin)对晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导牛主动脉血管内皮细胞(bovine Endothelial cells,BECs)E-选择素(E-selectin)表达的抑制作用。方法:分离纯化新生牛全血的中性粒细胞与单核细胞,用虎红染色法测定西红花酸对牛单核细胞/中性粒细胞与BECs黏附的影响,Cell-based ELISA法和sABC免疫细胞化学法测定E-选择素蛋白表达变化。结果:AGEs(100μg/mL)能促进中性粒细胞和单核细胞对BECs的黏附(P<0.01 vs control),用西红花酸(1,0.1,0.01μmol/L)预孵内皮细胞12h后,再用AGEs作用24h,中性粒细胞和单核细胞对BECs的黏附较AGEs模型组降低,且呈剂量依赖性关系(P<0.05或0.01)。Cell-based ELISA测定结果显示,AGEs作用4h内,BECs中的E-selectin表达水平上升,之后E-selectin表达下降,8h时,恢复接近正常水平。而西红花酸(1,0.1μmol/L)能使E-selectin表达下降。sABC免疫化学结果也证实西红花酸对AGEs诱导BECs中E-selectin表达有抑制作用。结论:西红花酸可通过抑制黏附分子E-selcetin蛋白表达,从而抑制中性粒细胞和单核细胞对内皮细胞的黏附作用,这可能是西红花酸减轻糖尿病血管病变的作用机制之一。

胰岛素对人肝癌HepG2细胞体外诱导人脐静脉内皮细胞血管形成能力的影响

目的:探讨胰岛素对人肝癌细胞系HepG2体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成能力的影响及其可能机制。方法:用含不同浓度胰岛素的完全培养基预培养肝癌细胞系HepG2制备条件培养基;应用预铺Matrigel基质胶的Transwell小室检测不同组条件培养基对HUVECs迁移能力的影响;运用CCK-8方法及EdU细胞增殖实验检测不同组条件培养基对HUVECs增殖能力的影响;运用内皮细胞成管实验检测不同组条件培养基对HUVECs成血管能力的影响;同时应用RT-PCR检测不同胰岛素浓度培养的HepG2细胞中血管内皮生长因子(VEGF)121、VEGF165、环氧化酶2(COX-2)的转录水平。结果:在一定浓度范围内,HepG2细胞对HUVECs的侵袭迁移能力、增殖能力的影响,对HUVECs的成血管能力的影响,对HepG2细胞VEGF121、VEGF165、COX-2转录水平的影响,均分别与胰岛素浓度呈正相关。结论:在一定浓度范围内,胰岛素可能通过上调HepG2细胞中VEGF121、VEGF165、COX-2的表达水平促进HepG2细胞诱导HUVECs血管形成能力。

抗艾滋病药物的现状与展望

艾滋病(AIDS)的肆意传播对人类生存和发展提出了严峻挑战,迫切需要开发出新的药物来遏制AIDS的泛滥。笔者全面综述了已上市的五大类抗AIDS药物,包括核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、蛋白酶抑制剂(PIs)、进入抑制剂(entry inhibitors)、整合酶抑制剂(integrase inhibitors)的作用机制、特点及ADR情况,并探讨了一些有可能成为新的抗AIDS药物的研究进展,以期为AIDS的药物治疗提供参考。

循证药学在合理使用抗HIV药物中的应用

高效抗逆转录病毒治疗法(HAART)应用临床以来,大大降低了AIDS病的死亡率,使获得性免疫缺陷综合症AIDS病从"绝症"变为1种可控的慢性疾病。但HAART治疗也面临着不能彻底清除患者体内的AIDS病毒(HIV)、耐药及较多ADR等问题。因此,如何合理使用抗HIV药物,是AIDS治疗中面临的问题。该文从循证药学的角度,探讨了抗HIV药物有效性、耐药性和安全性及药物经济学,以期为临床合理用药提供参考。

熊果酸对DM大鼠主动脉血管NF-κB表达的影响

目的:观察熊果酸(Ursolicacid,UA)保护糖尿病(DM)大鼠血管病变的作用,并探讨其对NF-κB蛋白表达的影响。方法:以STZ诱导DM大鼠模型,设DM模型组、UA两剂量治疗组(50mg/kg,25mg/kg)和氨基胍治疗组(100mg/kg),同时设正常对照组。给药8wk后,用血糖仪测定空腹血糖,试剂盒测定血清MDA和NO水平,HE染色观测主动脉的病理变化;同时,采用sABC法检测核转录因子(NF-kBp65)蛋白的表达。结果:UA50mg/kg治疗后DM大鼠血糖值降低,血清MDA和NO水平较模型组降低;病理切片和免疫组化结果显示UA治疗组血管损伤较模型减轻且NF-κB阳性表达明显低于模型组。结论:UA有保护DM大鼠血管损伤的作用,机制可能与UA抗氧化,从而抑制NF-kB的激活有关。

免疫分子B7-H3对人脐静脉内皮细胞功能的影响

设计针对B7-H3 1041以及996位点的shRNA,构建相应慢病毒B7-H3载体,研究其表达下调对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)生物学行为的影响。针对B7-H3mRNA序列设计2对不同位点的shRNA,克隆连接至慢病毒载体中,与穿梭载体LV3共转染至人肾上皮细胞系293T细胞并包装病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度。用聚凝胺浸染HUVEC细胞株,real-time PCR、FACS测定靶细胞B7-H3及其蛋白表达抑制情况,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验分析其迁移能力。结果显示,慢病毒载体可抑制B7-H3及其蛋白的表达,抑制率超过84.7%;CCK-8实验显示B7-H3表达降低后HUVEC的增殖和迁移能力明显降低。以上发现可为进一步研究该分子的生物学功能及其在RA中的作用奠定基础。