刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响及作用机制研究

目的:探讨刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响及作用机制。方法:CCK-8检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;细胞划痕实验检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移的影响;Transwell实验检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的影响;试剂盒检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDAMB-231细胞乳酸分泌的影响;PCR检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞HK、PFK和Glut4基因表达的影响;Western Blot法检测刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞HK、PFK和Glut4蛋白表达的影响。结果:刺五加皂苷B/E 25、50、100、200μmol·L^-1剂量不抑制MDA-MB-231细胞增殖;刺五加皂苷B/E 100、200μmol·L^-1能够抑制MDA-MB-231细胞迁移;刺五加皂苷B/E 50、100、200μmol·L^-1能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭和乳酸分泌,也能够降低MDA-MB-231细胞有氧糖酵解中相关蛋白HK、PFK、Glut4的表达。结论:刺五加皂苷B/E能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移、侵袭,其机制可能与抑制肿瘤细胞糖酵解有关。

基于网络药理学、分子模拟的射干治疗脑胶质瘤的作用机制

目的通过网络药理学方法、分子对接技术和体外细胞实验验证探讨射干治疗脑胶质瘤的潜在分子生物学机制。方法①通过数据库检索获取射干活性成分、作用靶点及脑胶质瘤疾病靶点。利用STRING数据库进行蛋白质相互作用关系分析,利用R语言进行基因本体论(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,使用Cytoscape软件构建“化合物-靶点-疾病”网络和PPI网络,利用AutoDock软件进行分子对接验证。②通过免疫蛋白印迹实验(Western blotting)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、细胞凋亡实验对网络药理学靶点蛋白通路富集结果进行验证。结果①筛选得到射干32个活性成分、484个作用靶点和464个脑胶质瘤疾病靶点,映射后获得62个治疗靶点,网络拓扑学分析获得异-德国鸢尾醛、3-甲基鼠李素等12个关键药效分子和AKT1、STAT3、HRAS等核心靶点,富集分析结果显示主要涉及肽基丝氨酸磷酸化、蛋白激酶B信号转导、肽基丝氨酸修改等生物过程和PI3K/AKT信号通路、Rap1信号通路等;分子对接结果验证了关键药效分子与核心靶点具有较好的结合活性。②Western blotting实验结果表明,与空白对照组相比,射干提取物8 mg/mL和16 mg/mL组的VEGF、MMP9蛋白表达量均显著降低(P<0.01或P<0.001),且呈剂量依赖性,射干提取物16 mg/mL组的p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值均显著降低(P<0.01),细胞凋亡实验表明与空白对照组比较,射干提取物8 mg/mL和16 mg/mL组的细胞早期凋亡率显著降低(P<0.01或P<0.001),qRT-PCR实验结果表明射干提取物8 mg/mL和16 mg/mL组VEGF和MMP9基因mRNA表达水平显著降低(P<0.001或P<0.0001)。结论射干治疗脑胶质瘤是多成分、多靶点、多途径相互作用的结果;细胞实验结果证实了射干提取物能够影响PI3K/AKT信号通路相应靶点蛋白和VEGF、MMP9的表达,验证了网络药理学结果,为射干的临床应用以及脑胶质瘤的研究提供一定的理论依据。

白藜芦醇调控miR-519c逆转乳腺癌多柔比星耐药作用机制研究

目的 白藜芦醇具有一定抗肿瘤作用,但其对多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADR逆转耐药的作用及机制尚不清楚.miR-519c是一种内源性短链非编码小分子核糖核苷酸,在肿瘤细胞耐药过程中具有重要作用.本研究旨在探讨白藜芦醇能否通过调控miR-519c逆转乳腺癌多柔比星耐药.方法 MTS法和克隆形成实验检测并计算白藜芦醇细胞逆转耐药倍数;裸鼠移植瘤实验检测白藜芦醇对MCF-7/ADR细胞体内移植瘤的抑制作用;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测裸鼠移植瘤中miR-519c表达水平;细胞转染miR-519c抑制剂后,克隆形成实验检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞增殖情况;蛋白质印迹法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ATP binding cassette transporter G2,ABCG2)和HuR耐药蛋白表达.结果 10μmol/L白藜芦醇逆转MCF-7/ADR细胞对多柔比星的耐药性,多柔比星组和多柔比星+白藜芦醇组IC50值分别为(29.82±1.26)和(10.25±0.86)μmol/L,t=31.42,P<0.001,耐药逆转倍数约为2.9倍;多柔比星组和白藜芦醇组细胞克隆数分别为296±32和281±27,高于白藜芦醇+多柔比星组(81±11),差异有统计学意义,F=69.20,P<0.001;白藜芦醇体内逆转MCF-7/ADR细胞耐药,多柔比星组和白藜芦醇组裸鼠移植瘤组织质量分别为(0.71±0.12)和(0.66±0.23)g,高于白藜芦醇+多柔比星组(0.19±0.08)g,差异有统计学意义,F=6.25,P<0.001;白藜芦醇能够促进miR-519c表达,白藜芦醇组和白藜芦醇+多柔比星组miR-519c相对含量分别为2.913±0.793和3.526±0.827,高于多柔比星组(1.012±0.231),差异有统计学意义,F=10.72,P=0.010;转染miR-519c抑制剂后,多柔比星组和白藜芦醇+多柔比星+miR-519c抑制剂组克隆数分别为296±32和256±29,高于白藜芦醇+多柔比星组(81±9),差异有统计学意义,F=59.25,P<0.001;蛋白印迹结果显示,多柔比星组、白藜芦醇+多柔比星组和白藜芦醇+多柔比星+miR-519c抑制剂组ABCG2蛋白表达量分别为(1.056±0.079)、(0.432±0.051)和(0.895±0.084),F=59.41,P<0.001;HuR蛋白表达量分别为(1.138±0·093)、(0.495±0.073)和(0.937±0.098),F=41.30,P<0.001.多柔比星+白藜芦醇组耐药相关蛋白ABCG2和HuR表达低于多柔比星组,差异具有统计学意义,均P<0.001;多柔比星+白藜芦醇+miR-519c抑制剂组ABCG2和HuR蛋白表达高于多柔比星+白藜芦醇组,差异具有统计学意义,均P<0.001.结论 miR-519c可能参与MCF-7/ADR乳腺癌耐药,白藜芦醇可能通过升高MCF-7/ADR细胞中miR-519c水平,抑制细胞耐药蛋白表达,发挥逆转耐药作用.

基于数值模拟验证的中药原生药粉制备微丸成型规律研究

目的探讨陈皮Citri Reticulatae Pericarpium、枳壳Aurantii Fructus、白芍Paeoniae Radix Alba、牡丹皮Moutan Cortex、木瓜Chaenomelis Fructus、干姜Zingiberis Rhizoma、菊花Chrysanthemi Flos、山药Dioscoreae Rhizoma这8种中药原生药粉制得的软材物理性质与微丸成型性的关系,为后续挤出滚圆制备微丸提供合理的处方依据。方法以微晶纤维素为载体,8种中药原生药粉为模型药,设置挤出机速度为60 r/min、滚圆机速度为1200 r/min,在30%载药量和4种加水量下制得32个处方的软材、挤出物和微丸,测定软材物理性质参数,得到微丸形态,采用数据统计软件分析软材物理性质和微丸形态间的关系,得到微丸成型性预测结果。基于枳壳的物理性质参数采用计算流体动力学(computational fluid dynamics,CFD)进行模拟验证,探讨微丸成型性预测结果的准确性。结果软材的物理性质和微丸的形态有一定的关系,以黏附性/内聚性(Ad/Co)为1级分类指标,硬度/弹性(Ha/Sp)为2级分类指标,硬度×内聚性(Ha×Co)为3级分类指标,黏附性(Ad)为4级分类指标,含水量为5级分类指标,可将微丸分为3类,该分类结果准确性为96.87%。基于中药枳壳物理性质参数的CFD结果表明该模拟结果与枳壳的微丸成型性预测结果相一致。结论该32个处方软材的物理性质与微丸的成型性有一定的相关性,CFD模拟进行微丸成型性的预测具有一定的可行性。

野鸢尾黄素对人脑胶质瘤细胞LN229增殖、迁移和侵袭的影响

目的观察野鸢尾黄素对人脑胶质瘤LN229细胞的增殖、迁移和侵袭能力,以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法将细胞分为3组,分别为空白对照组和低、高剂量实验组。空白对照组不加任何药物;低、高剂量实验组分别加入40和80μmol·L-1野鸢尾黄素。用免疫荧光实验检测细胞增殖能力,用Tranwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,用蛋白质印迹法检测MMP-2蛋白的表达水平。结果干预48 h后,空白对照组和低、高剂量实验组的细胞增殖率分别为(38.07±2.53)%,(23.90±1.10)%和(12.00±2.65)%,迁移细胞数量分别为(683.33±110.15),(322.00±72.19)和(132.33±18.23)个,侵袭细胞数量分别为(715.33±109.70),(300.00±60.67)和(135.00±30.64)个,MMP-2蛋白相对表达量分别为0.95±0.05,0.77±0.06和0.27±0.06。低、高剂量实验组的上述指标与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P <0.05或P <0.01或P <0.001)。结论野鸢尾黄素可能通过抑制MMP-2的表达,从而抑制LN229细胞的增殖、迁移及侵袭。