人重组白细胞介素11在毕氏酵母系统中的表达及纯化

目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11（ rhIL-11），便于进一步开发。方法 以人工设计合成的 rhIL-11基因，构建表达载体 pPICZα A-IL-11，经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71，甲醇诱导表达，用 ELISA和 SDS-PAGE检测发酵上清中 IL-11的抗原性和表达量，用 IL-11依赖的 B9-11细胞株分析其生物学活性，采用疏水层析、离子交换和凝胶过滤纯化发酵上清中的 IL-11。 结果 序列分析表明，克隆载体中 IL-11人工基因序列与设计相符；基因工程菌株 KM71-2424在摇瓶培养上清中 IL-11的表达量超过 60 mg/L，生物学活性测定显示其比活性为 5.5× 107 U/mg，而标准品的生物学活性为 2.2× 107 U/mg。经过三步层析纯化得到电泳纯的 rhIL-11蛋白质。结论 成功获得 IL-11人工基因和稳定分泌重组蛋白的基因工程菌株 KM71-2424，该重组蛋白的生物学活性显著高于大肠杆菌表达的标准品，并获得较高纯度的重组蛋白。

Graves病患者外周血IL-6、TNF-α水平表达的变化及意义

目的:探讨IL-6、TNF-α与Graves病(GD)发病之间的联系及其意义。方法:采用ELISA法测定83例GD患者治疗前后外周血IL6、TNFα水平变化,并与T3、T4、FT3、FT4、TSH作多元相关性分析。结果:(1)GD患者IL6、TNFα水平显著高于正常人(P<0.0001),且两者间呈正相关(P<0.001)。(2)IL6、TNFα与T3、T4、FT3、FT4均呈正相关(P<0.001),而与TSH呈负相关(P<0.001)。(3)经治疗后IL6、TNFα水平明显下降(P<0.001),但仍高于对照组(P<0.01)。结论:推测IL6、TNF异常升高可能与GD免疫学发病机制有关,经治疗后IL6、TNFα水平明显下降,提示抗甲状腺药物可能具有一定的免疫调节作用。

慢性肾炎患者血清IL-2、IL-6及其受体水平变化研究

目的 研究慢性肾炎 (Chronicglomerulonephritis,CGN)患者血清IL - 2、IL - 6及其受体水平变化与意义。方法 应用细胞生物学方法测定 77例CGN患者外周血IL - 2、IL - 6及应用ELISA方法测定sIL - 2R、sIL -6R水平 ,以及应用免疫荧光法分析患者外周血淋巴细胞mL - 2R表达。结果 77例CGN患者外周血sIL - 2R、IL - 6、sIL - 6R含量均显著升高 (P <0 .0 0 0 1) ,而IL - 2明显降低 (P <0 .0 0 0 1) ;mIL - 2R无明显变化。直线相关分析显示IL - 6与BUN呈正相关 (P <0 .0 0 5 ) ,sIL - 6R与Cr呈正相关 (P <0 .0 0 5 ) ;sIL - 2R与BUN、Cr呈正相关 (P <0 .0 5及P <0 .0 0 5 ) ,与尿蛋白定量呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论IL - 2、sIL - 2R、IL - 6R可能与了CGN的发病 ,并与该病严重程度及预后有关 ;CGN患者IL -

CD137单抗联合IL-15体外扩增NK细胞及其对肺癌细胞的杀伤活性

目的:建立CD137单抗联合IL-15体外扩增NK细胞的方案,研究扩增后NK细胞对肺癌细胞的杀伤活性。方法:分离健康人外周血单个核细胞,经免疫磁珠阴性分选获取CD3-CD56+NK细胞,将NK细胞分成对照组、IL-2组、IL-2+CD137单抗组、IL-2+IL-15组、IL-2+CD137单抗+IL-15组进行培养,经锥虫蓝染色法计算NK细胞的扩增倍数,流式细胞术检测NK细胞的表型,LDH酶释放法检测NK细胞对肺癌细胞株A549的杀伤活性,ELISA法检测扩增后NK细胞培养液上清中IFN-γ的分泌量。结果:经磁珠分选后NK细胞纯度为(93.28±3.21)%。IL-2+CD137单抗+IL-15组NK细胞扩增倍数明显高于IL-2+CD137单抗组、IL-2+IL-15组、IL-2组及对照组[(86.20±5.00)vs(60.01±5.00)、(49.06±4.39)、(17.04±1.49)、(3.95+0.23)倍,P<0.01]。IL-2+CD137单抗+IL-15组NK细胞对A549细胞的杀伤效率明显高于其他各组[(93.14±3.27)%vs(83.15±4.03)%、(71.25±3.24)%、(62.27±3.01)%、(49.38±2.35)%,P<0.01]。IL-2+CD137单抗+IL-15组培养液上清中的IFN-γ的分泌水平明显高于IL-2+CD137单抗组、IL-2+IL-15组、IL-2组及对照组[(296.25±9.79)vs(260.47±11.55)、(201.13±6.36)、(138.36±6.09)、(38.42±3.56)pg/ml,P<0.01]。结论:CD137单抗联合IL-15能高效扩增NK细胞,扩增的NK细胞高效杀伤A549肺癌细胞。

颅脑损伤后脑组织中IL-8的表达及其意义

目的 研究兔脑损伤后不同阶段脑组织中中性粒细胞 (PMNL)和IL 8的变化 ,探讨两者与继发性脑损伤的关系。方法 采用自由落体兔脑损伤模型 ,形态学动态观察不同阶段脑组织中PMNL出现、聚集、浸润变化及IL 8产生变化情况 ,同时观察抗IL 8单抗治疗后两者的变化。结果 正常脑组织内无PMNL浸润 ,IL 8亦无阳性表达。伤后 2小时 ,IL 8就有弱阳性表达 ,PMNL于伤后 6小时才出现 ,两者于伤后 2 4小时达高峰 ,48小时后明显减弱。抗IL 8单抗治疗后 ,脑组织中IL 8无表达 ,PMNL浸润也明显减少 (P <0 0 1)。结论 IL 8作为中性粒细胞趋化因子 ,趋化诱导PMNL在组织中聚集、浸润。IL 8表达强度与PMNL的浸润情况呈正相关。颅脑损伤后早期给予抗IL 8单抗治疗 ,可抑制IL 8的表达 ,减少组织中PMNL的浸润 。

IL8单抗对放射性脑损伤保护作用的实验研究

目的 :通过建立兔放射性脑损伤模型 ,研究IL 8单抗对放射性脑损伤的作用及其机理。方法 :30只新西兰兔行脊髓蛛网膜下腔置管 ,分成二组 ,照射前 30分钟和照射后六天内每天向蛛网膜下腔注入IL 8单抗或生理盐水 ,分别在 7、14、30天处死取样 ,行病理免疫组化和脑脊液IL 8水平检测。结果 :治疗组与对照组各时间段相比 ,放射性脑损伤的病理形态学改变减轻。IL 8浓度明显降低 (P <0 0 0 1) ,胶质细胞原纤维酸性蛋白 (GFAP)、脑一氧化氮合成酶 (bNOS)阳性细胞数较NS组显著减少。结论 :10 0Gy剂量能造成放射性脑损伤 ,蛛网膜下腔注入IL

缺血再灌注脊髓组织中白细胞介素-8表达的实验研究

目的 观察兔缺血再灌注脊髓组织中白细胞介素 - 8(IL - 8)的表达 ,探讨其对脊髓缺血再灌注损伤的影响。方法 采用免疫组织化学和组织病理学方法 ,检测并观察兔缺血再灌注不同阶段脊髓组织中IL - 8的表达情况及病理改变。结果 随着缺血及再灌注进程、脊髓组织病理变化的加重 ,组织中IL - 8阳性表达强度逐渐增加。结论 缺血再灌注脊髓组织中IL -

细胞间隙连接蛋白43在耐药性卵巢癌中的表达

目的 探讨细胞间隙连接蛋白 4 3(CX4 3)与上皮性卵巢癌化疗疗效 (耐药或敏感 )及临床病理的关系。方法 从 1999年 1月至 2 0 0 3年 6月间临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中 ,筛选出 6 0例原发上皮性卵巢癌和 6例正常卵巢作为研究对象。根据临床诊断将其分为 3组 :①化疗耐药组 30例 ,②化疗敏感组 30例 ,③正常卵巢组 6例。全部病例术前均未接受过放疗 ,入院后均行全子宫和双附件切除 +盆腔淋巴结清扫 +阑尾切除 +大网膜切除术 ,6 6例患者均有随访结果。用流式细胞仪定量分析 6 6例标本组织中CX4 3蛋白的表达量。结果 CX4 3蛋白的表达为化疗耐药组 <化疗敏感组 <正常卵巢组织 ,单向方差分析两两比较结果差异有显著意义。结论 CX4 3蛋白表达量的下降与上皮性卵巢癌的化疗耐药显著相关。

Gp130分子的活化在树突状细胞分化和成熟中的意义

目的 :研究激发型抗gp130分子单抗B S12对树突状细胞 (DC)分化成熟和功能的影响。方法 :人外周血单核细胞在GM CSF和IL 4作用下分化为未成熟DC后 ,加入B S12单抗 ,观察它对DC表型、摄取抗原的能力以及DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞能力的影响 ;同时比较B S12和激发型抗CD4 0单抗 5C11对DC的作用。结果 :激发型抗gp130分子单抗B S12作用于未成熟DC ,可以上调DC上CD1a和共刺激分子CD80、CD86以及成熟DC的标志CD83分子的表达 ,下调CD14的表达 ,降低DC摄取抗原的能力 ,增强DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞的能力 ,但这些作用都稍弱于 5C11对DC的作用。结论 :未成熟DC上gp130分子的直接活化可以诱导DC的分化和功能成熟。

慢性肾炎患者血清IL-2、IL-6及其受体水平变化研究

目的研究慢性肾炎(Chronic glomerulonephritis，CGN)患者血清IL-2、IL-6及其受体水平变化与意义。方法应用细胞生物学方法测定77例CGN患者外周血IL-2、IL-6及应用ELISA方法测定sIL-2R、sIL-6R水平，以及应用免疫荧光法分析患者外周血淋巴细胞mL-2R表达。结果77例CGN患者外周血sIL-2R、IL-6、sIL-6R含量均显著升高P<0．0001，而IL-2明显降低P<0．001；mIL-2R无明显变化。直线相关分析显示IL-6与BUN呈正相关P<0．005，sIL-6R与Cr呈正相关P<0．005；sIL-2R与BUN、Cr呈正相关P<0．05及P<0．005，与尿蛋白定量呈负相关(P<0．05)。结论IL-2、sIL-2R、IL-6、sIL-6R可能参与了CGN的发病，并与该病严重程度及预后有关；CGN患者IL-2水平降低可能与患者细胞免疫功能低下相关。

术前静脉注射氯诺昔康对子宫切除术患者血浆趋化因子表达的影响

目的:研究术前静脉注射氯诺昔康对围术期病人血浆趋化因子表达的影响。方法:择期行子宫切除术病人30例,静注氯诺昔康8或16mg。在开放静脉前(T0)、手术切皮后30min(T1)、手术结束时(T2)、术后24h (T3)和术后48h(T4)采集静脉血,测定血浆依赖激活正常T细胞表达分泌调节蛋白(RANTES)、基质细胞源性因子-1(SDF-1α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度。结果:手术和麻醉引起的创伤可导致子宫切除术病人围手术期血浆趋化因子RANTES表达下降,MCP-1及SDF-1α表达增加,氯诺昔康可以逆转这一变化。结论:氯诺昔康有助于维持子宫切除术病人围术期细胞免疫功能的稳定。

2型糖尿病血清可溶性共刺激分子B7-H3与颈动脉粥样硬化斑块的相关性研究

目的探讨血清可溶性共刺激分子B7-H3(soluble co-stimulatory molecule B7-H3,sB7-H3)与2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)患者合并颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis,CAS)的相关性。方法选择87例临床诊断T2DM患者作为研究组,另外选择33例非T2DM人群作为对照组。入选的糖尿病患者根据有无颈动脉粥样硬化斑块分为T2DM无颈动脉斑块组(T2DM-NCAS)与T2DM有颈动脉粥样硬化斑块组(T2DM-CAS)。应用酶联免疫法(ELISA)检测所有研究对象的血清可溶性共刺激分子B7-H3水平。结果 T2DM-NCAS组的sB7-H3水平显著高于对照组(P<0.05),T2DM-CAS组的sB7-H3水平显著高于对照组(P<0.05),T2DM-CAS组的sB7-H3水平显著高于T2DM-NCAS组(P<0.05)。血清sB3-H7水平与颈动脉斑块Crouse积分呈正相关。ROC曲线分析显示sB7-H3对于2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化斑块形成有诊断价值(P<0.05)。结论血清sB7-H3可能参与2型糖尿病患者动脉粥样硬化斑块的形成、发展;sB7-H3或可作为2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化斑块严重程度的评估指标。

双链RNA结合蛋白ILF3在神经系统疾病中的研究进展

白介素增强结合因子3(ILF3)通过双链RNA结合序(dsRBM)及其他结构域与RNA进行结合,参与了RNA转录、翻译、编辑和运输等相关过程,基是重要的RNA调控蛋白。在神经系统相关领域的研究中发现,ILF3与胚胎神经系统的发生、正常结构和功能的维持存在密切联系,同时与众多神经系统疾病如退行性病变、缺血缺氧损伤、病毒感染、肿瘤或精神障碍等也具有相关性。该文着重回顾了ILF3蛋白在神经领域中的研究进展,希望对相关神经系统疾病的干预研究提供思路。

术前静注氯诺昔康对子宫切除术病人围术期单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的探讨术前静注氯诺昔康对子宫切除术病人围术期单核细胞趋化蛋白-1表达的影响。方法择期行子宫切除术的病人30例,随机分为3组,对照组、氯诺昔康8 mg组、氯诺昔康16 mg组,每组各10例。氯诺昔康8 mg组在开放静脉后静脉注入氯诺昔康8 mg,氯诺昔康16 mg组在开放静脉后静脉注入氯诺昔康16 mg。分别在开放静脉前、手术开始后30 min、手术结束、术后24 h、术后48 h外周静脉采血4 ml测定血浆单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度。结果①三组病人的血浆MCP-1水平在手术开始后升高,到手术结束达到高峰,分别为(76±16)μg/L、(46±7)μg/L和(47±10)μg/L,与开放静脉前比较差异有统计学意义(P<0.05);②氯诺昔康8 mg组在手术结束时和术后24 h血浆MCP-1水平为(46±7)μg/L和(30±7)μg/L与对照组比要低(P<0.05),氯诺昔康16 mg组在手术结束时和术后24 h血浆MCP-1水平为(47±10)μg/L和(32±6)μg/L与对照组比要低(P<0.05);③氯诺昔康8 mg组和16 mg组比较对血浆MCP-1水平影响差异无统计学意义。结论术前静注氯诺昔康8 mg和16 mg可以有效的抑制子宫切除病人围术期MCP-1的表达的增加,16 mg组并不优于8 mg组,术前静注氯诺昔康有助于维持子宫切除病人围术期的免疫功能稳定。

术前静脉注射氯诺昔康对子宫切除术患者围术期血浆RANTES浓度的影响

目的探讨术前静脉注射氯诺昔康对子宫切除术患者围术期血浆T细胞表达和分泌的调节性激活因子（RANTES）浓度的影响。方法择期行子宫切除术患者30例,随机分为3组（n=10）,对照组（C组）,氯诺昔康8 mg组（L8组）麻醉前单次静脉注射氯诺昔康8 mg,氯诺昔康16 mg组（L16组）麻醉前单次静脉注射氯诺昔康16 mg。分别在开放静脉前（T0）、切皮后30 min（T1）、术毕（T2）、术后24 h（T3）和术后48 h（T4）采集外周静脉血,测定血浆RANTES的浓度。结果与T0时比较,C组、L8组、L16组在T1～T3时血浆RANTES浓度降低（P〈0.05）;与C组比较,L8组、L16组血浆RANTES浓度升高（P〈0.05）;与L8组比较,L16组血浆RANTES浓度升高（P〈0.05）,呈剂量依赖性。结论术前静脉注射氯诺昔康16 mg可抑制子宫切除术患者围术期血浆RANTES浓度的下降,提示可能有助于维持细胞免疫功能的稳定。

急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血浆杀菌／通透性增加蛋白表达的影响

目的探讨羟乙基淀粉急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血浆杀菌／通透性增加蛋白（BPI）表达的影响。方法选择ASAⅠ、Ⅱ级择期行全髋关节置换术患者20例，随机分为羟乙基淀粉组（HES组）和乳酸钠林格液组（LR组），每组各10例。20例患者均采用腰麻-硬膜外联合麻醉，于麻醉后，以20ml／kg的剂量和30mE／（kg·h）的速率分别输入6％HES和LR。分别记录手术时间、术中出血量和输血量。分别在麻醉前（T0）、手术开始前（T1）、手术开始后30min（T2）、手术结束（T3）时采外周静脉血测定BPI含量。结果HES组术中出血量[（560±90）ml]、输血量[（200±100）ml]显著少于LR组[（810±110）ml与（600±200）ml，t分别为5．562和5．657，P均〈0．001]。HES组T2、T3时BPI浓度为（8．9±1．6）μg／L和（13．4±1．2）μg/L，显著高于麻醉前[（4．9±1．2）μg/L，P均〈0．05）]。LR组T2、1、3时BPI浓度为（7．3±1．2）μg/L和（9．9±0．8）μg/L，明显高于麻醉前[（5．0±1．1）μg/L，P均〈0．05]，HES组T2、T3时BPI浓度明显高于LR组（t分别为2．530和7．674，P分别为0．021、0．001）。结论全髋关节置换术患者用羟乙基淀粉进行急性高容量血液稀释，不仅可以减少术中输血，而且可以有效提高血浆BPI浓度，有利于机体免疫功能的稳定。

术前静脉注射氯诺昔康对子宫切除术患者围术期血浆基质细胞源性因子-1表达的影响

目的研究术前静脉注射氯诺昔康对子宫切除术患者围术期基质细胞源性因子-1(SDF-1α)表达的影响。方法择期行子宫切除术的患者30例,随机分为对照组、氯诺昔康8 mg组、氯诺昔康16mg组10例。氯诺昔康8 mg组在开放静脉后静脉注射氯诺昔康8mg,氯诺昔康16mg组在开放静脉后静脉注射氯诺昔康16 nag。分别在开放静脉前、手术开始后30 min、手术结束、术后24h和术后48h采集静脉血,测定血浆SDF-1α浓度。结果①3组患者血浆SDF-1α浓度在手术开始后30 min升高并迅速达到峰值,分别为(2062±298)、(1472+313)和(1103±211)ng/L,与术前比较差异有统计学意义(P<0.05);②氯诺昔康8 mg组和16 mg组在手术开始后30 min和术毕时血浆SDF-1α浓度分别为(1472±313)、(1012±207)ng/L和(1103±211)、(911±102)ng/L,均较对照组低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。③氯诺昔康16 mg组在手术开始后30 min和术毕时血浆SDF-1α浓度低于8 mg组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论手术和麻醉可以造成SDF-1α表达增加,术前静脉注射氯诺昔康8 mg或16mg可以有效地抑制SDF-1α的表达,16mg可能优于8mg,氯诺昔康预处理有助于维持子宫切除患者围术期的免疫功能稳定。