大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞和星形胶质细胞分化的研究

目的探讨体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化成神经细胞或星形胶质细胞。方法使用四种不同的诱导方式来处理BMSCs:-巯基乙醇(BME)、维甲酸(RA)、无血清培养基以及和新生鼠的脑星形胶质细胞共培养。结果四种方法处理后,BMSCs都能表达神经细胞标示物MAP2或星形胶质细胞标志物GFAP,并伴随着明显的细胞形态的改变。用RA诱导以及在无血清的培养基中培养,BMSCs主要分化成神经元样细胞,表达神经元的标志物MAP2,并且BME能促进这个过程。但在和星形胶质细胞共培养后,BMSCs主要分化成GFAP+细胞。结论BMSCs依赖于不同的诱导条件,具有分化成神经细胞或星形胶质细胞的可塑性。

肿瘤坏死因子-α对少突胶质前体细胞的影响及其机制的研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对少突胶质前体细胞(OPC)的作用及机制,为脑室周围白质软化(PVL)的治疗提供策略。方法将分离纯化的OPC分为空白对照组、TNF-α组、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)抗体组,将50ng/mL TNF-α作用于TNF-α组、TNFR1抗体组,免疫荧光化学检测OPC的分化情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测3组细胞的相对活力,RT-PCR检测细胞TNFR1的mRNA水平的表达情况。结果与空白对照组和TNFR1抗体组相比,TNF-α组OPC的细胞活力明显下降(P<0.05),并且不能沿着少突胶质谱系细胞进行分化,即分化为原少突胶质细胞。TNF-α组TNFR1的mRNA表达明显的上调,空白对照组和TNFR1抗体组的mRNA表达无明显的变化。结论 TNF-α主要通过TNFR1引起OPC的凋亡,抑制OPC分化。

少突胶质谱系细胞易损性的研究

目的:研究TNF-α对O-2A祖细胞、原少突胶质细胞、少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)这三个不同发育阶段少突胶质谱系细胞的易损性。方法:采用TNF-α分别刺激这三个不同发育阶段的细胞,MTT法检测存活率,免疫细胞化学检测活化的caspase-3。结果:O-2A祖细胞与OL相比存活率明显降低,原少突胶质细胞与OL相比存活率也降低;50ng/mlTNF-α刺激少突胶质谱系细胞48h以内,O-2A祖细胞的存活率与原少突胶质细胞、OL的存活率相比差异无统计学意义,而原少突胶质细胞的存活率与OL存活率相比较明显降低;caspase-3免疫细胞化学染色显示在这些细胞的胞浆和胞核有大量阳性信号。结论:TNF-α降低少突胶质谱系细胞的存活率具有细胞成熟程度的依赖性;caspase-3参与TNF-α诱导的3个不同发育阶段的OL的凋亡。