目的:克隆人CXCR3B基因,并构建含有该目的基因的真核表达载体,获得稳定表达人CXCR3B分子的基因转染细胞株L929-huCXCR3B。方法:采用PCR方法从pMD19-T/huCXCR3A质粒中扩增人CXCR3B基因,通过双酶切装入真核表达载体pIRES2-EGFP中;脂质体...目的:克隆人CXCR3B基因,并构建含有该目的基因的真核表达载体,获得稳定表达人CXCR3B分子的基因转染细胞株L929-huCXCR3B。方法:采用PCR方法从pMD19-T/huCXCR3A质粒中扩增人CXCR3B基因,通过双酶切装入真核表达载体pIRES2-EGFP中;脂质体法转染L929细胞,G418加压筛选阳性克隆;分别用RT-PCR方法与免疫荧光技术分析阳性克隆中人CXCR3B在mRNA和蛋白水平的表达。MTT分析基因转染细胞株L929-huCXCR3B在Mig(monokineinduced by IFN-γ,IFN-γ诱导的单核因子)作用下的增殖能力。结果:成功克隆了人CXCR3B基因并构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/huCXCR3B,转染该载体后获得了稳定表达人CXCR3B的基因转染细胞株L929-huCXCR3B,膜表面CX-CR3B分子的阳性表达率为93%。该基因转染细胞与其配体Mig共培养24、48及72 h,抑制率分别为41.44%、44.01%和24.80%。结论:L929-huCXCR3B细胞株的建立为研究CXCR3B信号转导及制备相应的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。展开更多
目的：通过分析非小细胞肺癌（non-small-cell carcinoma，NSCLC）患者外周血淋巴细胞 Th1和 Th2细胞水平，研究 NSCLC患者术前术后T淋巴细胞亚群的变化，为临床上对 NSCLC疾病的预防、诊断及治疗提供参考依据。方法收集NSCLC患者（60...目的：通过分析非小细胞肺癌（non-small-cell carcinoma，NSCLC）患者外周血淋巴细胞 Th1和 Th2细胞水平，研究 NSCLC患者术前术后T淋巴细胞亚群的变化，为临床上对 NSCLC疾病的预防、诊断及治疗提供参考依据。方法收集NSCLC患者（60名），健康体检者（60名）全血（EDTA抗凝处理），采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞 CD3^＋，CD4^＋， CD8^＋T细胞百分比以及Th1和Th2细胞水平，并且用血细胞分析仪检测其淋巴细胞绝对值。结果 NSCLC术前和正常对照组CD3^＋，CD4^＋，CD8＋T细胞百分比（％）分别为58.40±10.27 vs 66.58±6.84，31.32±8.65 vs 39.40±6.43，34.23±8.00 vs 24.31±8.16，CD4^＋／CD8^＋比值为0.96±0.23 vs 1.58±0.23，差异均具有统计学意义（t＝－6.726～14.916，P均＜0.05）。NSCLC术后1～3天组和正常对照组CD3^＋，CD4^＋，CD8^＋T细胞百分比（％）分别为56.31±8.00 vs 66.58±6.84，27.72±7.55 vs 39.40±6.43，33.69±7.10 vs 24.31±8.16，CD4^＋／CD8^＋比值为0.87±0.31 vs 1.58±0.23，差异均具有统计学意义（t＝－6.720～14.367，P 均＜0.05）。与正常对照组相比，NSCLC术后4～7天组 CD4^＋T 细胞百分比（％）为33.23±4.13 vs 39.40±6.43，差异具有统计学意义（t＝6.257，P＜0.05）。在辅助性 T细胞亚群中，NSCLC术前与正常对照组Th1，Th2细胞含量（×10／μl）分别为6.79±1.34 vs 12.52±3.56，4.82±0.51 vs 2.32±0.82，Th1／Th2比值为1.39±0.84 vs 5.36±1.42，差异均具有统计学意义（t＝－20.087～18.630，P均＜0.05）。NSCLC术后1～3天组与正常对照组Th1细胞含量（×10／μl）为8.86±1.52 vs 12.52±3.56，术后4～7天组与正常对照组Th1细胞含量（×10／μl）为7.02±1.27 vs 12.52±3.56，差异均具有统计学意义（t＝7.339～11.275，P均＜0.05）。结论 NSCLC患者免疫功能紊乱，表现在T淋巴细胞数和辅助性T细胞的数量减少，T细胞亚群失调，明显趋向 Th2细胞；另外可能在癌细胞的不断刺激下，细胞免疫功能亢进杀伤性T细胞增多，经过手术治疗后杀伤性T细胞开始降低。展开更多
文摘目的:克隆人CXCR3B基因,并构建含有该目的基因的真核表达载体,获得稳定表达人CXCR3B分子的基因转染细胞株L929-huCXCR3B。方法:采用PCR方法从pMD19-T/huCXCR3A质粒中扩增人CXCR3B基因,通过双酶切装入真核表达载体pIRES2-EGFP中;脂质体法转染L929细胞,G418加压筛选阳性克隆;分别用RT-PCR方法与免疫荧光技术分析阳性克隆中人CXCR3B在mRNA和蛋白水平的表达。MTT分析基因转染细胞株L929-huCXCR3B在Mig(monokineinduced by IFN-γ,IFN-γ诱导的单核因子)作用下的增殖能力。结果:成功克隆了人CXCR3B基因并构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/huCXCR3B,转染该载体后获得了稳定表达人CXCR3B的基因转染细胞株L929-huCXCR3B,膜表面CX-CR3B分子的阳性表达率为93%。该基因转染细胞与其配体Mig共培养24、48及72 h,抑制率分别为41.44%、44.01%和24.80%。结论:L929-huCXCR3B细胞株的建立为研究CXCR3B信号转导及制备相应的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。
文摘目的：通过分析非小细胞肺癌（non-small-cell carcinoma，NSCLC）患者外周血淋巴细胞 Th1和 Th2细胞水平，研究 NSCLC患者术前术后T淋巴细胞亚群的变化，为临床上对 NSCLC疾病的预防、诊断及治疗提供参考依据。方法收集NSCLC患者（60名），健康体检者（60名）全血（EDTA抗凝处理），采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞 CD3^＋，CD4^＋， CD8^＋T细胞百分比以及Th1和Th2细胞水平，并且用血细胞分析仪检测其淋巴细胞绝对值。结果 NSCLC术前和正常对照组CD3^＋，CD4^＋，CD8＋T细胞百分比（％）分别为58.40±10.27 vs 66.58±6.84，31.32±8.65 vs 39.40±6.43，34.23±8.00 vs 24.31±8.16，CD4^＋／CD8^＋比值为0.96±0.23 vs 1.58±0.23，差异均具有统计学意义（t＝－6.726～14.916，P均＜0.05）。NSCLC术后1～3天组和正常对照组CD3^＋，CD4^＋，CD8^＋T细胞百分比（％）分别为56.31±8.00 vs 66.58±6.84，27.72±7.55 vs 39.40±6.43，33.69±7.10 vs 24.31±8.16，CD4^＋／CD8^＋比值为0.87±0.31 vs 1.58±0.23，差异均具有统计学意义（t＝－6.720～14.367，P 均＜0.05）。与正常对照组相比，NSCLC术后4～7天组 CD4^＋T 细胞百分比（％）为33.23±4.13 vs 39.40±6.43，差异具有统计学意义（t＝6.257，P＜0.05）。在辅助性 T细胞亚群中，NSCLC术前与正常对照组Th1，Th2细胞含量（×10／μl）分别为6.79±1.34 vs 12.52±3.56，4.82±0.51 vs 2.32±0.82，Th1／Th2比值为1.39±0.84 vs 5.36±1.42，差异均具有统计学意义（t＝－20.087～18.630，P均＜0.05）。NSCLC术后1～3天组与正常对照组Th1细胞含量（×10／μl）为8.86±1.52 vs 12.52±3.56，术后4～7天组与正常对照组Th1细胞含量（×10／μl）为7.02±1.27 vs 12.52±3.56，差异均具有统计学意义（t＝7.339～11.275，P均＜0.05）。结论 NSCLC患者免疫功能紊乱，表现在T淋巴细胞数和辅助性T细胞的数量减少，T细胞亚群失调，明显趋向 Th2细胞；另外可能在癌细胞的不断刺激下，细胞免疫功能亢进杀伤性T细胞增多，经过手术治疗后杀伤性T细胞开始降低。
