利用CRISPR/Cas9系统在小鼠胚胎干细胞中进行miR-22的功能研究

旨在构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并利用CRISPR/Cas9技术构建miR-22缺失的小鼠胚胎干细胞,探究miR-22在小鼠胚胎干细胞中的调控作用。首先通过点突变、搭桥PCR等手段,构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并获得靶向敲除miR-22的sgRNA表达载体,电转至稳转Cas9的小鼠胚胎干细胞中;其次经药物筛选、基因型鉴定等步骤筛选miR-22纯合缺失的小鼠胚胎干细胞。RT-qPCR手段证实miR-22在小鼠胚胎干细胞中被成功敲除,纯合突变体的比例约为6.67%。此外,miR-22缺失并未影响胚胎干细胞的细胞形态以及Oct4、Sox2和Nanog等干性基因的表达。因此,miR-22对小鼠胚胎干细胞的干性维持并非必需,而对胚胎干细胞谱系分化和命运决定的影响还有待进一步研究。

肉牛人工授精技术常存在的问题和改进方法

肉牛人工受精技术目前在各养殖场、养殖户广泛使用,对于提高母牛的配种受胎率、种公牛的利用率都非常重要,但是在实际养殖过程中常存在一些问题,使得人工授精操作不当引起母牛患生殖系统疾病,引起配种受胎率下降、发生难产等,需采取有效措施进行改进。

猪人工授精的优点和技术操作

猪人工授精技术目前在各生猪养殖场得到了普遍的应用,采用此项技术不但可以提高种公猪的利用率,降低饲养成本,提高母猪的配种受胎率,还可以减少疾病的发生和传播。要想提高人工授精技术的实施效果,需要掌握准确、规范的操作技术。

新型小鼠动脉粥样硬化消退模型的构建

目的动脉粥样硬化通常被认为是一种不断发展的病变,但斑块的消退提示动脉粥样硬化病变存在逆转的可能,因此建立一种高效且操作方便的小鼠动脉粥样硬化斑块消退模型对于阐明斑块消退的机制具有重要意义。方法在ApoE^(-/-)模型鼠中,首先进行三种类型的颈动脉结扎,诱导不同类型的血流形成颈动脉斑块。为了建立斑块消退模型,利用活结部分结扎小鼠左颈动脉分支造成扰动流,高脂饮食喂食2周诱导斑块形成后,打开活结,并恢复正常饮食。颈动脉血流超声检测追踪由结扎或斑块引起的血流变化;苏丹Ⅳ染色评估动脉粥样硬化病变区域;免疫荧光染色评估巨噬细胞浸润情况。结果颈动脉部分结扎高脂饮食喂养2周后,扰动流模型诱导的动脉粥样硬化斑块面积最大。造模小鼠打开活结2周后,颈动脉血流恢复接近正常值;且可显著减少动脉粥样硬化斑块大小,同时斑块中巨噬细胞含量和血管腔内斑块面积也明显减少。结论基于颈动脉结扎手术的新型小鼠动脉粥样硬化消退模型成功建立,利用该模型将帮助理解动脉粥样硬化消退的潜在机制。

普通生物学(英文)课程教学理论和实践探索

普通生物学是高校生命科学学院本科生的重要必修课程,该课程在宏观层次上涉及动植物发育过程,生命进化和演变等;在微观层次上,包含细胞,基因和遗传以及细胞信号转导等内容。因此,该课程是高校生命科学专业课的奠基石,对该课程教学理论和教学实践探索改革,不仅有利于学生构建整个生命科学知识体系,更有助于激发学生对生命科学领域的探索兴趣和求知欲。本文将结合本校普通生物学(英文)课程的教学实践,从不同层面探索如何深入进行教学理论和教学实践的改革。