遗传学课程中生命教育的渗透和思考

目前理工科高校中偏重知识教育与理性教育,特别是学生进入高年级之后,涉及生命教育的课程少之甚少。在遗传学课程中通过典型的遗传学人物和案例的介绍和分析,突出了生命的价值,让学生认识到生命的意义不仅在于个体生物学身体的本身,更在于社会文化精神的蕴含。这种将生命教育渗透在专业课程里是一个很好的强化生命教育的方法。

产时护理满意度评价体系的建立和临床应用

目的建立产时护理满意度评价体系及其应用方法,探索提高产时护理服务质量的途径。方法参照国内外成熟的临床患者满意度量表,设计并编制产科领域产时护理满意度调查表。在产妇和家属中设置对照组和干预组,通过人文干预比较满意度得分差异,评价干预效果。结果人文干预前产时护理满意度量表各条目得分以及四项因子得分相关分析结果显示,年龄与接产技术呈正相关(P=0.012),学历与产程进展(P=0.005)、镇痛法(P=0.036)、腹压(P=0.024)、接产技术(P=0.021)呈正相关,收入与自我介绍(P=0.030)、产程进展(P=0.039)、接产技术(P=0.019)呈负相关,与沟通呈正相关(P=0.041)。收入与主动沟通因子呈正相关(P=0.043),与专科技术因子呈负相关(P=0.033)。干预组产时的护理满意度各条目及四个因子的得分与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论创新设计编制的产房专科产时护理满意度量表可及时发现产时护理服务质量问题,以及时采取切实有效的干预措施,可显著提高产时护理满意度。

ICOS/ICOSL的免疫调节作用与相关疾病的研究进展

协同刺激信号分子(ICOS)及其配体ICOSL在免疫应答和调节中起重要作用。研究发现ICOS结合ICOSL,与自身免疫性疾病和肿瘤有密切联系。靶向干预ICOS/ICOSL信号分子将可能为预防和治疗相关临床疾病提供新的途径。

PI3K/AKT信号通路的抑制促进B7-H4分子的核转移

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对负性共刺激分子B7-H4细胞定位的调控作用。方法体外培养稳定转染B7-H4/HEK293细胞,采用PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002和/或出核转运抑制剂来普霉素B(LMB)处理细胞之后,免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜检测B7-H4蛋白在B7-H4/HEK293细胞中亚细胞定位的变化;Western blot法检测B7-H4蛋白在细胞膜、细胞质和细胞核表达水平的变化。结果激光共聚焦显微镜观察结果显示,PI3K抑制剂LY294002作用于B7-H4稳定转染的B7-H4/HEK293细胞后,与空白对照组相比,B7-H4发生核转移,加入出核转运抑制剂LMB后,核转移的程度显著增加;Western blot法结果显示,LY294002抑制PI3K/AKT信号通路活性24 h后,B7-H4在细胞膜和细胞质中的定位均显著降低(P<0.05),而细胞核中B7-H4的定位显著增加(P<0.05)。结论 PI3K/AKT信号通路可抑制B7-H4的核转移。

一种稻鱼生态循环种养模式介绍

近年来,我国水产养殖逐步向绿色、环保方向转型发展,池塘尾水排放和农产品质量要求日趋严格。为有效解决新形势下新需求与传统水产养殖和种植模式存在的矛盾,常州市武进区以江南古法种养技术为基础,通过利用现代设备、改进生产工艺流程,建立了一套对外界环境无影响、促进稻鱼质量同步提升的生态循环种养模式,现介绍如下。

负性共刺激分子B7-H4赋予肾癌细胞对化疗药物的耐药性研究

通过RT-PCR方法克隆出人野生型负性共刺激分子B7-H4基因,将目的片段双酶切(EcoRⅠ和BamHⅠ)后,与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4-WT并进行鉴定;然后用定点突变法构建B7-H4核定位序列突变体基因,再构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4-NLS-MT;脂质体转染法将重组载体导入786-O细胞,CCK8法研究转基因细胞株的增殖率及对化疗药物5-氟尿嘧啶、阿霉素和顺铂的耐药性。结果显示:B7-H4野生型转基因细胞株相较于空白质粒组,可有效促进786-O细胞增殖,并赋予786-O细胞对3种化疗药物的耐药性。与空白质粒组相比,对5-氟尿嘧啶的耐药倍数为2.06,对阿霉素的耐药倍数为1.81,对顺铂的耐药倍数为1.72。机制研究显示B7-H4野生型可赋予肿瘤细胞抗凋亡作用,1.25μg/mL 5-氟尿嘧啶引起B7-H4 WT/786-O的细胞的凋亡率是20.2%,而Mock/786-O和B7-H4 NLS/MT/786-O细胞的凋亡率分别是41.1%和35.1%。说明B7-H4可能通过调控细胞凋亡赋予肿瘤细胞多药耐药性。当B7-H4核定位序列被突变后,这些功能都消失,说明B7-H4促肿瘤细胞增殖、赋予其多药耐药性的功能与其核定位序列密切相关。

PD-1在类风湿关节炎外周血T淋巴细胞亚群表达的临床意义

目的检测类风湿关节炎(RA)患者外周血中的程序性死亡配体-1(PD-1)水平,分析其与常用临床实验室检测指标的相关性,并探讨其表达的临床意义。方法(1)收集RA患者及体检健康者的外周血标本,采用流式细胞术检测其PD-1水平;(2)记录RA的常用临床检测指标及其阳性率,并与PD-1进行相关分析与比较;(3)跟踪同一患者并观察其不同时期PD-1水平的变化。结果(1)在RA外周血中CD4+PD-1+T%和CD8+PD-1+T%水平活动期高于缓解期和健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01);缓解期高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)在RA外周血中其PD-1与C反应蛋白(CRP)和红细胞沉降率呈正相关关系(P<0.01)与抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)无明显相关性(P>0.05),且PD-1的阳性表达率高于CRP和红细胞沉降率,差异有统计学意义(P<0.01),而与抗CCP抗体阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);(3)同一患者其外周血PD-1水平活动期明显高于缓解期,差异有统计学意义(P<0.01)。结论RA患者外周血PD-1水平高表达,并且PD-1与疾病严重程度密切相关;PD-1的阳性表达率高,并且与CRP、红细胞沉降率等指标密切相关,PD-1作为新的临床检测指标用于RA有一定的应用前景。

肾素-血管紧张素系统(RAS)在慢性应激状态下胰岛素分泌中的作用

目的研究肾素-血管紧张素系统(RAS)在慢性应激诱导下的大鼠胰岛素分泌中所起作用。方法将20只SD大鼠随机分为4组,正常对照、电击组、卡托普利(captopril)处理加电击、坎地沙坦(candesartan)处理加电击。3个需要电击处理组连续电击4周,4组大鼠定期测量血压,在电击结束后行腹腔注射葡萄糖耐量(IPGTT)实验,在相应的时间点测定大鼠血糖水平,处死后收集血清和胰脏,测定血清中血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)和胰岛素水平,用Q-PCR测定各组大鼠的Pcsk1基因和Pcsk2基因的表达情况。结果在慢性应激情况下,只经电击处理的大鼠血压和血清血管紧张素Ⅱ水平均高于对照组大鼠的正常水平(P<0.05);分别经过血管紧张素Ⅱ受体(AT1)拮抗剂-坎地沙坦(candesartan)和血管紧张素转化酶抑制剂-卡托普利(captopril)处理的两个组,大鼠的血压及AngⅡ水平均低于对照组水平(P<0.05)。3组电击处理过的大鼠血清胰岛素水平均明显低于对照组(P<0.05)。电击4周后的IPGTT显示,4组大鼠的糖耐量水平表现无显著差异。3个电击处理组大鼠Pcsk1基因的表达相比对照组明显降低(P<0.05),各组大鼠Pcsk2基因表达无明显差异。结论在慢性应激4周的情况下,大鼠胰岛素分泌出现显著下降,卡托普利(captopril)和坎地沙坦(candesartan)处理并未改善慢性应激诱导引起的胰岛素分泌下降,因此,RAS系统可能未参与慢性应激诱导的胰岛素分泌下降。

IL-33增强体外培养的外周血单个核细胞细胞因子的分泌以及杀伤功能

目的探讨白细胞介素33(IL-33)是否能在体外增强外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子和杀伤功能。方法常规分离培养健康人PBMC,分别经CD3单克隆抗体(m Ab)/CD28mAb/IL-2、CD3mAb/CD28mAb/IL-2/IL-12、CD3mAb/CD28m Ab/IL-2/IL-12/IL-33三种组合刺激培养72 h,收集细胞。经实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(granzyme B)mRNA的水平;CCK-8法检测各组细胞对A549人肺腺癌细胞的杀伤活性;采用流式细胞术分析各组细胞IFN-γ、程序性死亡蛋白1(PD-1)的水平。结果各组因子组合刺激的PBMC,形态无明显差异;qRT-PCR检测发现,IL-33刺激组的PBMC中IFN-γ、granzyme B mRNA的水平升高;IL-33刺激组的PBMC对A549的杀伤能力更强;IL-33刺激组的PBMC中CD3+CD8+细胞亚群IFN-γ的水平升高、PD-1的水平降低。结论 IL-33能够在体外增强PBMC的效应功能。

农村土地经营权抵押贷款助力供给侧结构性改革

供给侧结构性改革对于改善"三农"问题有着相当巨大的作用,农村土地经营权抵押贷款则为供给侧结构性改革提供了良好的支持。在文中分析了供给侧结构性改革以及农业供给侧结构性改革的内涵,明确了农村土地经营权机器抵押贷款的内涵,并就农村土地经营权抵押贷款助力供给侧结构性改革进行了展望。

青虾“双壳症”诱因及防控策略

在长三角地区,青虾是一种深受人们喜爱的水产珍品,市场销售价格逐年走高,2017年春季青虾销售单价100元/千克,大规格的青虾销售单价超过150元/千克,呈现出价高量增的态势。青虾的养殖模式主要包括单养和蟹塘套养两种,前者亩产可达150千克,效益可达9000元以上,后者亩产可达30千克,可增加效益2000元。

如何培养学生的自学能力

素质教育加强了对学生能力的培养，教学观念也由传统的以教为中心向以学为中心转变。注重培养学生的自学能力，提高学习效率，本文以笔者近年来的教学实践为基础。初步探讨了如何培养学生自学能力的问题。

Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞生长抑制的体外实验

旨在研究携带人IL-24基因的腺病毒表达载体(Ad-IL-24)对SGC-7901人胃癌细胞的生长抑制作用并分析其分子机制。以不同MOI(感染复数)的Ad空载体腺病毒感染SGC-7901人胃癌细胞,筛选出最佳感染剂量;Ad-IL-24以最佳感染剂量感染SGC-7901胃癌细胞,RT-PCR法和Western blotting法检测腺病毒介导的IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中的转录;MTT法检测Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其诱导SGC-7901人胃癌细胞凋亡和细胞周期改变的效应,Hoechst33258染色荧光显微镜检测其诱导胃癌细胞凋亡的核形态改变;RT-PCR半定量法进一步检测SGC-7901胃癌细胞中凋亡相关基因的转录。结果显示,100MOI为感染SGC-7901胃癌细胞的腺病毒最佳感染剂量;Ad-IL-24能成功介导IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中转录性表达;Ad-IL-24感染SGC-7901胃癌细胞后,能明显抑制胃癌细胞生长和诱导凋亡;Ad-IL-24能显著上调SGC-7901胃癌细胞中bax、caspase-3和p53的表达和下调bcl-2的表达。因此,腺病毒介导的IL-24表达具有明显抑制SGC-7901人胃癌细胞生长和诱导凋亡的抗肿瘤效应,其机制可能与上调bax/bcl-2、caspase-3和p53密切相关。

诱导共刺激分子和诱导共刺激分子配体在系统性红斑狼疮患者外周血中表达的变化及临床意义

目的 检测SLE患者外周血淋巴细胞表面诱导共刺激分子（ICOS）和诱导共刺激分子配体（ICOSL）的表达,以及血浆中可溶性ICOSL的表达,探讨其临床意义.方法 流式细胞术检测45例SLE患者和39名健康志愿者外周血CD4＋、CD8＋T细胞表面ICOS及CD14＋单核细胞、CD19＋B细胞表面ICOSL的表达;ELISA检测血浆可溶性ICOSL的表达,分析临床意义.采用Levene方差齐性检验,组间比较采用t检验,两变量间相关性采用Pearson相关分析.结果 与健康志愿者相比,SLE患者外周血CD4＋、CD8＋T细胞表面ICOS的表达均显著升高[（19.1±1.7）％与（14.0±1.5）％,t=2.156,P=0.035]、[（10.0±1.0）％与（6.4±1.0）％,t=2.587,P=0.012].CD14＋单核细胞上ICOSL的表达高于健康志愿者个体[（2.94±0.88）％与（0.89±0.21）％,t=2.152,P=0.04],且与患者血浆C3、C4水平呈正相关（r=0.401,P=0.031;r=0.44,P=0.017）.活动期组SLE患者血浆sICOSL的浓度显著高于非活动期组[（362±25） ng/ml与（278±15） ng/ml,t=2.356,P=0.025],且与CD14＋单核细胞和CD19＋B细胞表面ICOSL的表达均呈负相关（r=-0.4243,P=0.022;r=-0.4099,P=0.025）.MMPI可显著抑制sICOSL产生.结论 SLE患者外周血淋巴细胞表面ICOS和ICOSL,以及血浆sICOSL异常表达,且与疾病活动度密切相关.提示ICOS/ICOSL信号通路可能参与SLE免疫病理进程.

芳香烃受体抑制miR-101a介导PM_(2.5)有机提取物所致斑马鱼胚胎心脏畸形

[背景]研究表明芳香烃受体(AhR)介导大气PM_(2.5)引起的斑马鱼胚胎心脏畸形,但其具体分子机制有待明确。小分子核糖核酸(miRNAs)等表观遗传机制在心脏发育中起重要作用,而且有报道AhR能调控miRNAs的表达。因此,PM_(2.5)有可能通过AhR信号通路干扰miRNAs表达,从而导致心脏发育异常。[目的]探讨PM_(2.5)有机提取物(EOM)激活AhR后对miR-101a的调控,以及miR-101a异常表达影响斑马鱼胚胎心脏发育的作用机制。[方法]收集苏州市区PM_(2.5)并以索氏提取法提取EOM,在受精后2 h(hpf)内加入EOM(5 mg·L^(-1))及AhR小分子抑制剂CH223191(0.05μmol·L^(-1))进行斑马鱼胚胎染毒。以吗啉寡核苷酸进行AhR基因敲减,以miR-101a类似物注射进行miR-101a过表达。在受精后72 hpf,观察各组斑马鱼胚胎发育情况,统计心脏畸形率。剖取斑马鱼胚胎心脏,提取总RNA,以实时荧光定量PCR方法检测miR-101a和elfa、gsk3β、cdc42 mRNA的表达。以在线数据库Targetscan进行斑马鱼miRNA靶基因预测,并以DAVID数据库对靶基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。[结果]与DMSO对照组相比,5 mg·L^(-1) EOM引起72 hpf的斑马鱼胚胎心脏畸形率由5%升高至18%(P<0.05)。EOM引起斑马鱼胚胎心脏中mi R-101a表达降低至对照组的60%左右(P<0.05),而AhR小分子抑制剂CH223191(0.05μmol·L^(-1))及AhR基因敲减均对EOM所致miR-101a表达变化有拮抗作用(P<0.05)。miR-101a类似物可减轻EOM所致的斑马鱼胚胎心脏畸形(由19%降至11%,P<0.05)。miR-101a的预测靶基因集中于Fox O及Wnt等心脏发育相关的重要信号通路,并且Wnt通路基因gsk3β及Rho家族小分子鸟苷酸三磷酸酶cdc42的表达在EOM染毒斑马鱼胚胎心脏中升高(升高1.9倍,P<0.001;升高1.7倍,P<0.01),但加入miR-101a类似物后恢复正常水平(P<0.01)。[结论]斑马鱼胚胎心脏中,PM_(2.5)中的EOM激活AhR后抑制miR-101a的表达,进而通过gsk3β及cdc42等基因干扰心脏发育,引起心脏畸形。

分枝杆菌膜锚定表达载体的构建与亚细胞定位分析

目的构建分枝杆菌膜锚定表达载体，并分析外源目标蛋白的表达情况及其亚细胞定位。方法在分枝杆菌胞内表达载体pMFA42的基础上进行改造，人工合成结核分枝杆菌（Myco—bacteriumtuberculosis，Mtb）相对分子质量（Mr）为19×10^3的脂蛋白膜分泌信号序列，将其插入高效的突变型furA基因启动子（pfurAma）下游构建新型的分枝杆菌膜锚定表达载体pMFA42M。PCR扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）编码基因，亚克隆至上述两种载体中并电转化耻垢分枝杆菌（Mycobacte—riumsmegmatis，Ms），分别获得重组EGFP融合表达菌株和膜锚定表达菌株；接着将Mtb主要保护性抗原Ag85A及其嵌合抗原Ag856A2的编码基因亚克隆入膜锚定表达载体pMFA42M中构建Mtb抗原-EGFP融合表达菌株；通过Westernblot和流式细胞表面标记技术来分析目标抗原的表达水平及其亚细胞定位，并进一步通过荧光显微镜直接观察重组EGFP融合表达菌株在体外和感染巨噬细胞后的荧光强度。结果通过引入Mtb19×10^3脂蛋白膜分泌信号，在高效pfurAma启动子的驱动下，成功地构建了分枝杆菌膜锚定表达载体。利用EGFP作为标签抗原，通过Westernblot、荧光显微观察和流式细胞表面标记等技术均证实了外源目标抗原可在分枝杆菌中高水平表达并定位至细胞膜上。结论本研究为重组BCG和分枝杆菌膜蛋白功能研究提供了一种新型的膜锚定表达载体，所构建的EGFP重组表达菌株亦可作为一种模式示踪菌为细胞吞噬和动物免疫中的细菌定植和移位分析提供新思路。

URI基因稳定表达对肝癌SMMC-7721细胞增殖能力的影响

目的:瞬转以及筛选出能够稳定表达URI(RPB5-mediating protein)基因的SMMC-7721细胞株,以其为模型研究URI基因对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响。方法:首先,抽提URI的重组质粒并转染到SMMC-7721细胞中,在G418药物的筛选下选出能够稳定表达URI基因的细胞株,RT-PCR法和酶切检测该稳定细胞中URI基因的表达效率以确认URI是否稳定表达,MTT法和克隆形成实验检测URI基因对SMMC-7721细胞增殖的影响。结果:成功建立URI基因过表达的稳定细胞株。与SMMC-7721细胞对照组比较,其URI mRNA表达水平显著上调,能稳定表达URI细胞株的增殖,克隆形成率明显升高。结论:pFLAG-CMV-4-URI重组质粒能使URI在肝癌SMMC-7721细胞内稳定表达,过表达URI基因有可能帮助细胞通过G2/M期检验点来提高肝癌细胞SMMC-7721的增殖能力。

外周炎症性疼痛诱导下丘脑弓状核c-fos表达及其机制

目的观察下丘脑弓状核(ARC)神经元在炎症性痛觉过敏中的激活状态,分析NMDA受体在ARC神经元活动与痛觉过敏中的作用。方法用完全弗氏佐剂建立大鼠炎症性痛觉过敏模型,用辐射热-缩腿法测定痛阈,用c-fos检测神经元激活状态,用体视学无偏差测量系统计数免疫阳性细胞,用MK801观测NMDA受体的作用。结果佐剂组的痛阈均有明显下降(P<0.05),ARC中Fos蛋白阳性细胞计数明显上调(P<0.05);在侧脑室微量注射MK801后痛阈可恢复至正常水平,ARC中Fos蛋白阳性细胞计数回落接近正常水平。生理盐水组在这两方面都无明显变化。结论 ARC神经元的激活对炎症性痛觉过敏的产生和维持有重要作用,该作用主要通过NMDA受体介导。中枢敏感化也可发生在脊髓以上的高位痛觉调节中枢。